1.3　實(shí)驗(yàn)技術(shù)

1.3.1　樣品的制備

紫外-可見吸收光譜的測(cè)定通常是在溶液中進(jìn)行的。固體樣品需轉(zhuǎn)變成溶液，無機(jī)樣品需用合適的酸溶解或用堿熔融，有機(jī)樣品需用有機(jī)溶劑溶解或抽提。有時(shí)需先用濕法或干法將樣品消化，然后再轉(zhuǎn)化成適用于光譜測(cè)定的溶液。溶劑的選擇，除要滿足溶解能力強(qiáng)、揮發(fā)性小、毒性小等要求外，特別要注意的是要在被測(cè)波長(zhǎng)范圍內(nèi)沒有明顯的吸收。表1-1給出了紫外-可見吸收光譜測(cè)定中常用的溶劑的截止波長(zhǎng)。

1.3.2　測(cè)量條件的選擇

（1）吸光度范圍

根據(jù)Lambert-Beer定律可以推導(dǎo)出當(dāng)T =36. 8%，或A=0.434時(shí)，吸光度測(cè)量誤差最小。一般選擇A測(cè)量范圍為0.2～0.8（T%為65%～15%），在此范圍內(nèi)，濃度測(cè)量相對(duì)誤差較小。

（2）入射光波長(zhǎng)

入射光的波長(zhǎng)一般選擇λ_max。這是因?yàn)樵?i>λ_max處測(cè)量時(shí)靈敏度最高，由儀器單色性變化引起的測(cè)量誤差小。當(dāng)然在待測(cè)組分濃度較大、超出吸光度測(cè)量范圍或者該波長(zhǎng)下存在共存雜質(zhì)干擾等因素時(shí)，也可以選擇其他的波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定。

（3）狹縫寬度

有兩種表示狹縫寬度的方法：一種是狹縫實(shí)際寬度（用mm表示），另一種是光譜帶寬（用nm表示）。

狹縫寬度直接影響測(cè)定的靈敏度和工作曲線的線性范圍。狹縫寬度小，雜散光小，但入射光較弱；狹縫寬度大，單色性差，工作曲線的線性范圍窄。狹縫寬度的選擇應(yīng)該在保證吸光度不減小的前提下，盡量選擇寬度較大的狹縫，一般選擇試樣吸收峰半寬W_1/2的1/10。

（4）溶液的酸度

溶液的酸度直接影響被測(cè)組分存在的形式及數(shù)量，從而嚴(yán)重影響吸收峰的形狀、位置和強(qiáng)度。在進(jìn)行紫外-可見光譜測(cè)定中應(yīng)嚴(yán)格控制被測(cè)溶液的pH，一般可通過加入緩沖溶液來控制。強(qiáng)酸、強(qiáng)堿以及弱酸-弱堿鹽等都可作為緩沖溶液。

（5）參比溶液

通常采用以下三種參比溶液。

①溶劑參比溶液　當(dāng)待測(cè)組分溶液的組成較為簡(jiǎn)單，共存的組分在測(cè)定波長(zhǎng)的光吸收很小時(shí)，可用溶劑作為參比溶液，這樣可以消除溶劑、吸收池等因素的影響。

②試劑參比溶液　如果顯色劑或其他試劑在測(cè)定波長(zhǎng)有吸收，用與顯色反應(yīng)相同的條件，但不加入試樣，同樣加入試劑和溶劑作為參比溶液。這種參比溶液可消除試劑中的組分產(chǎn)生吸收的影響。

③試樣參比溶液　如果試樣基體（除被測(cè)組分以外的）在測(cè)定波長(zhǎng)處有吸收，而與顯色劑不起顯色反應(yīng)時(shí)，可不加顯色試劑但按與顯色反應(yīng)相同的條件處理試樣，作為參比溶液。這種參比溶液適用于試樣中有較多共存組分，加入的顯色劑的量不大，且顯色劑在測(cè)定波長(zhǎng)處無吸收的情況。

（6）測(cè)定條件

在建立紫外-可見分光光度方法時(shí)，應(yīng)進(jìn)行顯色劑用量、溶液酸度、顯色反應(yīng)時(shí)間、溫度等因素對(duì)該方法影響的條件實(shí)驗(yàn)，確定最佳值。