2.2　實驗材料

2.2.1　水樣采集

油水樣均采自大港油田官69區(qū)塊產(chǎn)油井，用滅菌塑料桶采樣密封，在無菌條件下用普通濾紙過濾除去懸浮物質(zhì)，于4℃低溫保存，48h內(nèi)處理。

2.2.2　培養(yǎng)基

基礎(chǔ)培養(yǎng)基（g·L^-1）：KH₂PO₄ 0.3，Na₂HPO₄·12H₂O 1.25，MgSO₄·7H₂O 0.01，NH₄Cl 0.2，CaCl₂·2H₂O 0.01，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 0.36，酵母粉0.5，蔗糖1.0，pH 7.2。以基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加2.0%液體石蠟作為種子培養(yǎng)基；以基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加0.5%大港油田原油作為降解培養(yǎng)基。以基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加30%原油，進(jìn)行降黏度和降凝固點實驗。

2.2.3　主要試劑

聚丙烯酰胺凝膠DNA回收試劑盒（Biospin），尿素、丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺、過硫酸銨、去離子甲酰胺、TEMED、lysozyme、Ampicillin均購自BBI，克隆載體pGMT-vector購于天根生物公司，T₄DNA Ligase、各種限制性內(nèi)切酶、T4連接酶、PCR所用的高保真DNA聚合酶、Agarose Gel DNA purification Kit、DNA Marker DL15000、DNA Marker DL2000、dNTPs、X-gal、IPTG及蛋白酶K均購自TaKaRa公司，其余試劑均為國產(chǎn)分析純。PCR引物由北京奧科生物技術(shù)有限責(zé)任公司合成，序列測序由北京三博遠(yuǎn)志生物有限責(zé)任公司完成。試劑用水均為超純水。

2.2.4　DGGE變性劑

（1）0%變性劑溶液

脫氣10～15min，用0.45μm濾膜過濾滅菌。置于棕色瓶中于4℃保存一個月。

（2）100%變性劑溶液

（3）濃度低100%的變性劑溶液，參照上表添加丙烯酰胺，TAE和水，使用下表中的尿素和甲酰胺量。

2.2.5　儀器設(shè)備

高速冷凍離心機　　美國Beckman

高速冷凍離心機　　日本Hitachi

臺式高速冷凍離心機Universal 32R　　德國Heritte

變形梯度凝膠電泳儀 Dcode^TM　　美國Bio-Rad

凝膠成像系統(tǒng)　　美國Bio-Rad

MyCycler梯度PCR儀　　美國Bio-Rad

全自動滅菌鍋　　日本Hirata

光學(xué)顯微鏡　　日本Nikon

電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀ICP-900（N+M）　　美國Thermo

旋轉(zhuǎn)式黏度計　　上海峰志儀器有限公司

紅外測油儀JDS-109C　　北京中儀遠(yuǎn)大科技有限公司