5.4　紫外分光光度法對紅茂草制劑質量的檢測

5.4.1　材料與方法

（1）材料

①儀器與試劑

UV-751GD型紫外-可見光分光光度計（上海分析儀器廠）、RE52-99型旋轉蒸發器（上海亞榮生化儀器廠）、AB104-S型精密電子分析天平（瑞士梅特勤公司）、SH8-Ⅲ型循環水式多用真空泵、超聲波清洗儀、索氏提取器、pH計等。

異紫堇堿標準品（購自ABCR Gmbh & Co.KG im Schlehert公司，批號166401，規格10mg）、無水乙醇、其余試劑均為國產或進口分析純。

②樣品

采自野外生長的紅茂草，由王廷璞研究員鑒定，經自然風干、粉碎、過篩。紅茂草注射液來自于天水市某醫院藥劑科。

（2）方法

以異紫堇堿為標準品，配制溶液繪制標準曲線，對照標準曲線測定樣品中生物堿含量，并進行精密度、穩定性、重現性考察。

5.4.2　結果與分析

（1）測定方法及條件考察

①標準樣品

本實驗以紅茂草中主要成分異紫堇堿作為標準品，進行相關實驗檢測。

②線形分析的考察

準確吸取紅茂草生物堿標準樣溶液（20mg/mL）各0.05mL、0.10mL、0.15mL、0.20mL、0.25mL、0.30mL、0.35mL，稀釋成濃度為0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.30mg/mL、0.40mg/mL、0.50mg/mL、0.60mg/mL、0.70mg/mL的梯度溶液，測其OD330值。并以濃度值對吸光度進行回歸，得標準曲線方程Y=1.0236X+0.1559，R2=0.9998。并以濃度值對吸光度作圖，得一條直線，如圖5-16所示。

③樣品溶液的制備

精密稱取15g紅茂草粉，置于500mL的燒瓶中，分別加入400mL不同的溶劑，超聲處理1h，抽濾、濃縮、定容至100mL，吸取100μL，稀釋至10mL，測其OD330，結果如表5-13所示。

對醇溶與水溶提取液生物堿含量進行方差分析，結果如表5-14所示。

①表示極顯著。

方差分析（表5-14）結果顯示P<0.01，說明兩種方法差異性極顯著，建議在工業化生產中使用醇溶法。

④精密度考察

精密吸取醇溶樣品（批號1211101），進行測定。結果如表5-15所示。

精密度實驗結果（n=3），實驗表明，該方法的精密度良好。

⑤穩定性實驗　精密吸取不同時間的醇溶樣品，分別進行測定，結果如表5-16所示。

穩定性實驗結果（n=3），結果表明，該樣品在2年內穩定。

⑥重現性實驗

精密吸取醇溶樣品（批號1211101），進行測定，其結果如表5-17所示。

重現性實驗結果（n=3），結果表明該方法的重現性良好。

（2）樣品的測定

①紅茂草注射液的測定

精密吸取醇溶樣品100μL，置于10mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，照分光光度法在330nm處測定吸光度，其結果如表5-18所示。

紅茂草注射液中生物堿測定結果（n=3）根據測定結果，本品中生物堿含量不得少于7.0mg/支。

②紅茂草提取物的測定

以上述方法對紅茂草提取物進行測定，其結果如表5-19所示。

按紫外分光光度法測定，紅茂草提取物中生物堿含量不得少于3%。

5.4.3　結論

本實驗采用紫外-可見光分光光度計法，以紅茂草中主要成分異紫堇堿作為標準品，對紅茂草提取物、紅茂草注射液等試樣中生物堿的含量進行了測定。建議依據制劑工藝的研究及有關規定的要求，紅茂草注射液確定每支裝2mL；用法與用量為肌肉注射，一次2～4mL，每日1次；依據制劑的貯藏要求確定為密封置陰，干燥處保存。該研究為紅茂草制劑的制備、提取，以及臨床應用提供了依據。