五、細(xì)菌學(xué)檢查

肺結(jié)核診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”是痰中找到結(jié)核菌，這是確診主要依據(jù)。痰菌陰性活動(dòng)性肺結(jié)核是連續(xù)3次痰片檢查或痰菌培養(yǎng)檢查未獲得陽(yáng)性結(jié)果，經(jīng)非細(xì)菌學(xué)手段診斷為活動(dòng)性肺結(jié)核者。

（一）結(jié)核菌的涂片檢查

1．痰涂片抗酸染色法

包括直接涂片法、離心集菌涂片法、漂浮集菌涂片法等經(jīng)萋?tīng)?尼爾遜（Ziehl-Neelsen）抗酸染色法后連續(xù)觀察300個(gè)視野未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌的涂片，報(bào)告涂片陰性。檢查結(jié)果抗酸桿菌報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)如下。

抗酸桿菌陰性（-）：連續(xù)觀察300個(gè)不同視野，未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌；

報(bào)告抗酸桿菌菌數(shù)：1～8條/300視野；

抗酸桿菌陽(yáng)性（+）:3～9條/100視野；

抗酸桿菌陽(yáng)性（++）:1～9條/10視野；

抗酸桿菌陽(yáng)性（+++）:1～9條/每視野；

抗酸桿菌陽(yáng)性（++++）:≥10條/每視野。

如果3張涂片中只1張涂片為1～8條/300個(gè)視野，總結(jié)果報(bào)陰性，其中2張涂片為1～8條/300個(gè)視野，總結(jié)果報(bào)陽(yáng)性。

2．痰涂片熒光染色法

是將痰直接涂片或集菌后涂片，經(jīng)熒光染色，用熒光顯微鏡在低倍物鏡下連續(xù)觀察50個(gè)視野，未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌的涂片，報(bào)告涂片陰性。檢查結(jié)果抗酸桿菌報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)如下。

熒光染色抗酸桿菌陰性（-）：鏡檢50個(gè)視野內(nèi)未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌者。

熒光染色抗酸桿菌陽(yáng)性（報(bào)告抗酸桿菌數(shù)）:1～9條/50視野。

熒光染色抗酸桿菌（+）:10～99條/50視野。

熒光染色抗酸桿菌（++）:1～9條/每視野。

熒光染色抗酸桿菌（+++）:10～99條/每視野。

熒光染色抗酸桿菌（++++）:≥100條/每視野。

（二）結(jié)核菌的培養(yǎng)檢查

1．改良羅氏（L-T）培養(yǎng)法

通用的培養(yǎng)方法，結(jié)核菌生長(zhǎng)緩慢，生長(zhǎng)周期在4～6周，至第8周末生長(zhǎng)，方可報(bào)告培養(yǎng)陰影。培養(yǎng)檢查結(jié)果報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)如下。

（-）：培養(yǎng)8周未見(jiàn)菌落生長(zhǎng)者。

（+）：培養(yǎng)基斜面菌落分散生長(zhǎng)，占據(jù)斜面面積的1/4以下者。

（++）：培養(yǎng)基斜面菌落分散生長(zhǎng)，占據(jù)斜面面積的1/2以下者。

（+++）：培養(yǎng)基斜面菌落密集生長(zhǎng)或部分融合，占據(jù)斜面面積的3/4以下者。

（++++）：培養(yǎng)基斜面菌落密集生長(zhǎng)呈苔樣分布，占據(jù)斜面全部。

2．快速培養(yǎng)法

（1）半自動(dòng)放射法或半自動(dòng)BACTEC460快速培養(yǎng)法。可進(jìn)行分離培養(yǎng)、藥敏試驗(yàn)、菌種鑒定，但存在污染率高、放射性污染等不足。

（2）全自動(dòng)非放射法。包括：①BACTEMGIT960系統(tǒng)，快速、高效、無(wú)污染、非放射性。②BACTEC9000系統(tǒng)，快速、準(zhǔn)確、假陽(yáng)性率低、無(wú)交叉污染，但有放射性。③DIFCO ESP系統(tǒng)，是取代BACTEC460作分離培養(yǎng)的可靠方法。④MB/BACT系統(tǒng)，快速、敏感，但污染率高，有放射性。

（三）L型結(jié)核菌檢查

結(jié)核菌在環(huán)境、物理、化學(xué)、藥物與免疫等多種因素影響下，使細(xì)胞壁發(fā)生部分或全部缺失后，結(jié)核菌變異為結(jié)核菌L型或L型結(jié)核菌。它的結(jié)構(gòu)、形態(tài)、染色性、培養(yǎng)特性、致病性、免疫性、對(duì)藥物的敏感性等生化特性均發(fā)生改變，尤其是抗酸染色性減弱或消失，使涂片抗酸染色鏡檢不能發(fā)現(xiàn)，菌體的滲透壓升高，用培養(yǎng)結(jié)核菌的等滲培養(yǎng)基培養(yǎng)不生長(zhǎng)，必須高滲培養(yǎng)基培養(yǎng)才生長(zhǎng)，才能發(fā)現(xiàn)。

L型結(jié)核菌的檢查發(fā)現(xiàn)，主要依靠培養(yǎng)方法，必須用高滲的特殊培養(yǎng)基培養(yǎng)，高滲培養(yǎng)基中常用者有：胰胨大豆蛋白胨培養(yǎng)基（TSA-L）、改良TSA-L培養(yǎng)基、matman合成培養(yǎng)基和PPLO培養(yǎng)基。