第二節　一級種制作

一級種，為食用菌生產中至關重要的基礎，比如說，以平菇為例，一個一級種的生產用種，可以轉接4～6個二級種，每個二級種又可轉接15～30個三級種，按照栽培用種率為10%來計算，那么，這個一級種最低投料量應達到500千克干料，其比率大約是1∶1000；如果該一級種是F1級，該數字尚應擴大40倍左右。所以，從業三十多年的經驗告訴我們：一級種，是菌種生產的重中之重，萬不可掉以輕心。

一、配方及其注意要點

一級種的配方，其實很簡單，只要根據資料介紹的配方進行稱量和制作就好了。但是，任何事情都會有個要點，即：一定要根據當時的環境、溫候以及原材料等實際情況而定，不要機械。

（一）基本配方

1.適用于平菇、姬菇、草菇、金針菇、雞腿菇等大部分品種的通用型配方

配方一：馬鈴薯200克，葡萄糖20克，瓊脂粉10～15克，水1300毫升。該配方適于轉接、擴大等生產用。

配方二：馬鈴薯200克，麥麩30克，葡萄糖20克，磷酸二氫鉀3克，硫酸鎂2克，蛋白胨3克，食母生4片，維生素B1 　2片，瓊脂粉10～15克，水1300毫升。該配方適于商品母種及轉擴、分離菌種等生產用。

配方三：馬鈴薯200克，麥麩30克，葡萄糖20克，磷酸二氫鉀3克，硫酸鎂2克，蛋白胨3克，瓊脂粉15～20克，水1300毫升。培養基斜面冷卻后，每支斜面試管內加入氯霉素眼藥水2～4滴。該配方適于菌種脫毒、菌種分離，尤其適用基質分離、室外分離等操作用。

配方四：玉米淀粉30克，麥麩50克，葡萄糖20克，磷酸二氫鉀3克，硫酸鎂2克，蛋白胨3克，食母生4片，維生素B1  2片，水1100毫升。

2.適用于糞草型品種如雙孢菇、姬松茸等生產用配方

配方一：腐熟糞草（栽培基料曬干）200克，麥麩50克，玉米粉20克，葡萄糖20克，瓊脂粉13～16克，水1500毫升。

配方二：栽培廢料（雙孢菇廢料、曬干）200克，麥麩、玉米粉各50克， 葡萄糖20克，磷酸二氫鉀2克，硫酸鎂1克，瓊脂粉13～16克，水1500毫升。

配方三：干麥草（或稻草）50克，牛糞粉50克，麥麩、玉米粉各50克，葡萄糖20克，蛋白胨5克，食母生6片，維生素B1 2片，瓊脂粉13～16克，水1500毫升。

配方四：葡萄糖20克，蛋白胨5克，酵母膏5克，磷酸二氫鉀1.5克，硫酸鎂0.5克，食母生4片，維生素B12片，瓊脂粉13～16克，水1000毫升。

3.適于木腐菌如靈芝、金針菇、楊樹菇、茶新菇、柳松菇、白靈菇、杏鮑菇等生產用配方

配方一：闊葉木屑60克，麥麩30克，葡萄糖15克，瓊脂粉13～16克，水1500毫升。該配方適于轉擴及保存菌種用。

配方二：棉籽殼50克，麥麩、玉米粉各20克，葡萄糖20克，瓊脂粉13～16克，水1500毫升。該配方適于轉擴菌種用，亦可用于保存。

配方三：小麥60克（煮汁），玉米粉30克，葡萄糖20克，蛋白胨5克，瓊脂粉13～16克，水1500毫升。該配方適于商品菌種生產用。

配方四：闊葉木屑30克（或小木塊50克），麥麩、玉米粉各20克，葡萄糖20克，磷酸二氫鉀3克，硫酸鎂1克，維生素B1 1片，蛋白胨5克，瓊脂粉13～16克，水1500毫升。該配方適于轉擴及分離菌種用。

4.猴頭菇專用配方

新鮮馬鈴薯200克，麥麩、玉米粉各15克，葡萄糖20克，磷酸二氫鉀3克，硫酸鎂1.5克，食母生4片，維生素B1 2片，瓊脂粉13～16克，水1300毫升。該配方要求：馬鈴薯一定要新鮮，剛收獲的馬鈴薯最佳，并需調pH值6～6.5。

5.草菇專用配方

蘋果150克，麥麩30克，葡萄糖20克，蛋白胨5克，維生素B1 2片，瓊脂粉13～16克，水1100毫升。

6.北蟲草專用配方（冬蟲夏草分離兼用）

配方一：馬鈴薯200克，葡萄糖20克，蛋白胨5克，磷酸二氫鉀1克，瓊脂20克，水1200毫升。

配方二：葡萄糖10克，蛋白胨10克，酵母膏1克，磷酸二氫鉀1克，硫酸鎂0.5克，生長素5毫升，瓊脂20克，水1100毫升。

配方三：蔗糖30克，天門冬酰胺1克，磷酸二氫鉀1.25克，硫酸鎂0.3克，氯化鉀0.5克，硝酸鈉0.5克，瓊脂20克，水1100毫升。

7.最新配方

最新配方一：蘑菇殺青水1100毫升，葡萄糖15克，磷酸二氫鉀3克，硫酸鎂2克，食母生4片，瓊脂粉13～16克。該配方為通用型，適用于大部分品種。

最新配方二：食用菌菌柄（干品）100克，玉米粉30克，葡萄糖15克，磷酸二氫鉀3克，硫酸鎂2克，食母生4片，瓊脂粉13～16克，水1500毫升。該配方為通用型，可適于大部分食用菌品種。

最新配方三：新鮮豆汁200毫升，葡萄糖20克，磷酸二氫鉀3克，硫酸鎂2克，酵母膏5克，維生素B1 1片，瓊脂粉13～16克，水900毫升。該酸方為高蛋白營養，適于大部分品種，尤其在珍稀品種生產時，更具優勢性。

最新配方四：洋蔥、胡蘿卜各150克，葡萄糖20克，磷酸二氫鉀3克，硫酸鎂1克，食母生4片，維生素B1 1片，蛋白胨5克，瓊脂粉13～16克，水1200毫升。該配方在草菇等品種生產時表現較好。

（二）培養基制備

馬鈴薯去澀皮、芽眼，洗凈，切薄片，加水與麥麩同煮，沸后煮30分鐘，四層紗布過濾，并補足濾液至1000毫升，將瓊脂加入濾液中煮至全部溶化，然后依次加入葡萄糖等輔料，食母生等充分研碎最后加入，全部溶化后趁熱分裝試管。試管不分規格大小，均應裝至約1/5～1/4高度，塞棉塞后每7支一把，牛皮紙封管口一端并捆扎。

（三）注意要點

材料要新鮮，不能有霉變；馬鈴薯盡量不要發芽，已經發芽的要剔除干凈；尤其是制猴頭菇菌種，馬鈴薯一點也不能發芽，用剛出土的新鮮的最好。

二、分裝及其注意要點

分裝試管注意以下要點。

（1）液量適宜　裝到試管高度的1/5～1/4即可，不要超過1/4。

（2）培養基液體不要沾附到試管口，尤其不要沾附到棉塞位置。

（3）試管外部不要有培養基液體。

三、滅菌及其注意要點

（一）滅菌操作

采用高壓蒸汽滅菌形式，一般要求達0.05MPa時排冷空氣一次，再升至0.11MPa開始計時，維持30分鐘后滅菌結束，停止加熱，任其自然降壓至0時，打開放氣閥，取出培養基試管并趁熱將其擺成斜面，注意斜面長度約為試管長度的3/5～4/5，溫度降至40℃時斜面成型并固定。

（二）注意要點

（1）到達0.05MPa時必須排空，否則，可能出現“壓力到，溫度不到”的問題，導致滅菌失敗。滅菌鍋內冷空氣排除程度對溫度的影響見表2-1。

（2）計時開始后，必須確保壓力準確并持續；如有中途下降等問題，如果時間偏少，可以重新計時，如果時間偏長，則需另行制作培養基。

（3）滅菌期間，不得離開；確需離開時，必須交代另人負責——這是責任問題。

四、接種及其注意要點

（1）準備工作　斜面冷卻后，碼于操作臺；備好酒精棉球、接種工具等；空間噴灑百病傻藥物后，將種源亦放于操作臺；打開接種凈化機，10分鐘后即可開始接種。

（2）接種操作　使用75%酒精棉球將雙手擦洗一遍；點燃酒精燈，灼燒接種鉤；在待其冷卻的時間里，將待接試管解開扎繩，放入酒精燈左側。接種鉤自然冷卻至30℃以下或常溫時，即可開始接種操作，基本動作如下：左手平伸，虎口處夾住種源試管中下部，試管口以下10厘米左右放入無名指和小手指的指尖處，使種源試管與拇指內側呈約100°夾角，右手拔掉種源棉塞的同時使試管口在酒精燈火焰上方約2～5厘米位置處，右手持接種鉤，伸入種源試管內，先將氣生菌絲壓倒，以防遮擋視線，再將菌種尖端約1～2厘米處連同培養基一同挖出，棄之不用；接種鉤仍伸入種源試管內，騰出右手拿起待接試管，從其底部伸入左手虎口處種源內側，并與種源試管平行，且使兩試管口呈一條直線；旋轉棉塞并向外拔松但不拔出，翻轉右手用無名指與中指或小指的背面夾住棉塞向外拔出，同時使管口與種源試管口相接觸，平行于火焰上方；右手持接種鉤，將菌種連同培養基挖取約半個大米粒大小一塊，用接種鉤托起抽出試管，通過火焰上方迅速伸入待接試管，將菌種塊放入斜面培養基的中間位置。抽出接種鉤插入種源試管，翻轉右手，將棉塞經過火焰迅速塞入已接種的試管，同時使試管偏離火焰，右手將其塞緊至原始位置，抽出接好的試管放入酒精燈右側或方便的地方，一支母種接種完成。周而復始，直至完成全部接種。

（3）即時標記　全部接完后，應將菌種扎把，每7支一把，扎緊后，在封包紙上注明品種名稱或菌株代號、接種時間、操作人員姓名等標記。如果一次接種操作中有若干個品種或菌株，則應每完成一個品種或菌株即進行相應標記。嚴格、準確的標記，是菌種生產中操作者的工作作風、職業道德的具體體現，萬萬馬虎不得。

五、培養及其注意要點

（1）溫度　一級種的培養溫度等條件，應根據生產的品種具體設定和調控，一般平菇、雞腿菇、金針菇、白靈菇等大多數品種應調至25℃左右，草菇應調至28℃以上。

（2）避光　避光培養，是一級種培養應遵守的規程之一。

（3）特殊情況　假如在中溫環境中，在培養箱恒定的溫度條件下，一級種的長速尚不如在自然條件下的長速快。據分析，應該是培養箱內的環境中新鮮空氣不足，并且，亦與自然條件下的晝夜溫差刺激有關。

六、檢查剔雜及其要點

培養第2天開始，每天檢查一次，發現任何與種源菌絲不同的紅、黃、綠、黑、灰等污染，應及時剔出并作相應的殺菌工作，以防雜菌擴散。大部分母種生產的成功率為100%，偶有污染，也是個別的，或是特殊原因所致。如果某次接種的污染率超過30%，則該批菌種保留的價值不大。針對污染，應分析原因，找出癥結所在，既防止再次發生，也便于清理污染源。

七、一級種的基本特征

（一）合格一級種的共同特征

（1）生長整齊　同一品種、同一來源的母種，擴繁后，不論擴繁量有多大，只要使用的培養基相同，試管與試管之間，菌絲的生長外觀沒有明顯的差異。生長外觀包括長速、色澤、菌落的厚薄及氣生菌絲的多寡等。

（2）長速正?！〔煌N、不同品種的食用菌，在一定的營養和培養條件下，都有其固定的生長速度。如平菇一般在PDA改良培養基上，使用18毫米×180毫米規格的試管，在25℃黑暗條件下7天即可長滿斜面。如果長速不在這一范圍內，說明菌絲活力不夠，或老化，或退化，一般不宜再使用。

（3）形態特征　不同品種的食用菌，其母種都有各自的形態，如菌落形態、氣生菌絲的多寡、菌絲的色澤、培養中是否產生色素及其色澤、生長邊緣是否齊整、菌絲體的生長態勢等。

（4）菌落邊緣　菌落生長的邊緣外觀飽滿、整齊、長勢旺盛。

（二）退化或老化的基本特征

不同種的食用菌菌種，退化、老化的表現特征不同，但有一些規律可循，其主要表現有以下幾方面。

（1）長速減慢　退化、老化的菌種，培養期間往往長速變緩，特別是在瓊脂培養基上未發滿試管以前，與正常母種有明顯的區別。

（2）長速不一　退化、老化的菌種，其繼代培養時，個體間長速差異明顯，不能同時完成培養。

（3）長相不一　退化、老化的菌種，其繼代培養物長相不完全相同，往往菌絲不舒展，有的菌絲邊緣不整齊，有的菌絲干癟，有的菌絲稀疏，有的氣生菌絲變少，有的出現異常色素，甚至分泌到培養基中。

（4）似非拮抗現象的出現　當在瓊脂培養基上進行培養時，在斜面上出現星星點點的小菌落，這些小菌落之間，不能隨菌落的擴展而融為一體，而是兩者邊緣之間總有誰都不能逾越的距離，但又不呈現典型的拮抗現象。

（三）品種特征

1.平菇

菌絲潔白、濃密、粗壯、整齊、氣生菌絲發達，多的可布滿試管空間，多不產生色素，爬壁能力強。接種塊周圍無菌絲稀疏區。菌絲生長速度快，適溫20～22℃經6～8天即可長滿試管斜面，低溫保存能產生珊瑚狀子實體原基；耐高溫，短時間在34℃下正常生長；有些菌株氣生菌絲過多，形成很厚的菌被將管壁包滿，很容易在種塊或管壁上形成原基，就是老化或多次轉管的菌種，不宜使用；有些菌株在高于28℃的溫度下培養或培養時間過長，氣生菌絲頂端往往會產生橘紅色分泌物，這雖不影響使用，但已不宜作為種源擴大培養；氣生菌絲過多的母種也不宜擴大培養。

2.雙孢菇

菌絲纖細、稀疏、灰白，優良菌絲上下均勻，沒有生長很快的扇形變異，一般22～24℃條件下15天以上才能長滿斜面，超過28℃菌絲生長受抑制而發黃，若菌絲倒伏、發黃或形成黃白色菌被者，不能用于生產。以氣生菌絲生長整齊、清晰、挺拔有力，基質菌絲多者為好。

（1）氣生型　 孢子分離7～9天后，出現星芒狀菌落。氣生菌絲生長旺盛、白色或灰白色，尖端清晰整齊、挺拔有力，密度均勻，基內菌絲較發達，一般15～25天長滿試管斜面。

（2）半氣生型、匍匐型　菌絲緊貼培養基斜面，表面呈索狀生長，挺拔有力，但生長緩慢，排列稀疏、清晰，常呈扇形生長，數日后多出現細細的菌索，菌絲纖細、微黃，氣生菌絲很少，不易形成“菌被”，在適宜的培養基和環境條件下一般22～26天長滿斜面。

3.香菇

菌絲潔白、濃密、粗壯而略顯絨狀、整齊有力，呈健康態勢發展；一次轉接生產的菌種，各個試管的菌絲表現均勻一致，沒有大的差別；氣生菌絲明顯；接種塊周圍稍有菌絲稀疏現象，但無明顯“禿菌絲區”； 常溫培養的母種，因晝夜溫差而導致菌絲表面呈小波浪狀發展態勢，但不會出現“無菌絲帶”；拔開棉塞，即可聞到明顯的香菇特有的菌香味，而無其它如酸、臭、腐等異味；4℃條件長時間保存時，會有小菇蕾發生。符合以上表現的菌種，基本可以認定為合格（生物特性等除外），可以放心使用。如試管內有除香菇以外任何顏色的菌絲或斑塊、菌絲稀疏、長速過慢等特征，或者同一批菌種生長快慢不一、極不均勻，或者試管內有明顯的異味等，均為不合格菌種，引種時不要購買，生產者應予以及時淘汰，不可用于生產。

4.金針菇

菌絲白色或淺灰白色，細絨毛狀，初期較蓬松，后期氣生菌絲緊貼培養基表面，有爬壁現象。菌絲生長速度較快，黃色品種在適溫20～22℃10～12天長滿斜面，白色品種稍慢。黃色品種常在培養后期出現黃褐色色素，使菌絲不再潔白，老化時表面出現淡污褐色斑塊；白色品種則不如此。時間較長的菌種分泌色素；低溫貯存時有細水珠出現，斜面上形成少量子實體。如菌絲由白色變為灰白或略帶黃色，在管壁出現許多粉狀物（即粉孢子）說明菌種開始老化；粉孢子多的菌株，品質一般不理想。

5.草菇

菌絲生長初期纖細、無色透明，多分枝的絲狀體，似蠶絲，有金屬光澤，后期呈淡白色、銀灰色，老時灰黃色。菌絲生長速度快，在30～32℃條件下，5～6天即可長滿斜面，再培養2～3天開始出現厚垣孢子，呈鏈狀，初為灰白色、淡黃色，后漸變成褐色至銹紅色（20多天），最后培養基表面出現紫紅色。氣生菌絲茂盛，而且爬壁能力強，在試管內生長蓬亂，每根菌絲清晰可見，布滿整個試管空間，不易變黃，斜面上不產生子實體；菌絲變為淡黃褐色，是老化的表現。厚垣孢子出現過早過多，是種性開始老化的表現。若菌絲密集，顏色潔白，可懷疑混有雜菌。

6.雞腿菇

菌絲淺灰白色，濃密，棉絮狀，生長旺盛，邊緣整齊、有力，基內菌絲分泌色素，使斜面培養基顏色加深，部分呈黑褐色。菌絲生長速度較快，適溫25℃、10天左右菌絲即可長滿試管斜面。菌絲隨培養時間延長而變灰色，是鑒別雞腿菇菌齡的重要特征。

7.猴頭菇

菌絲生長不均勻，白色至灰白色、微黃色，線絨狀，短而稀疏，緊貼在培養基表面，不爬壁，氣生菌絲粗、短、少，基內菌絲多；常不規則地形成索狀物，并在其上形成小子實體原基，外觀上似小疙瘩，較老的菌絲形成節孢子，后期會分泌棕褐色色素，使斜面培養基呈茶色，顏色過深的基內菌絲活力下降，不宜使用；多次轉管后生活力明顯下降，當菌絲呈線粒狀時，很難繼續生長；轉接后菌絲恢復慢，萌發后菌絲呈線絨狀，向四周作放射狀延伸；在PDA綜合培養基上，黑暗恒溫25℃下培養，14～20天長滿斜面，在酸性培養基上生長快、旺盛；若使用有麥芽糖的猴頭菇專用培養基，菌絲生長會大大改善，菌絲長速大大加快且濃密潔白，不再形成菌索和原基。

8.阿魏菇、白靈菇、杏鮑菇

該類品種的不同品種、不同菌株之間差異顯著，有的品種菌落致密、微黃，生長緩慢，在PDA綜合培養基上要3周左右長滿斜面；有的品種菌落舒展、潔白，菌絲也較稀疏，生長較快， 2周即可長滿斜面。

9.真姬菇

菌絲濃密潔白，氣生菌絲旺盛，表面是絨毛狀，生長不甚均勻，在加入有兩種以上碳源的培養基上生長較好。在馬鈴薯酵母粉綜合培養基上，黑暗恒溫24℃下培養，14～17天長滿斜面（不同品種間長速有差異）。

10.柳松菇

菌絲暗黃色，濃密，絨毛或絨氈狀，生長整齊度好，在PDA綜合培養基上長速較慢，氣生菌絲較少，1000毫升培養基中加入適量木屑濾液并添加蛋白胨成分時，長速明顯加快，但絨氈狀菌絲則顯得略薄，氣生菌絲增加，一般要20天左右完成發菌。

11.木耳、毛木耳

菌絲白色，產生黑色色素，明顯匍匐生長，邊緣不齊，普通PDA綜合培養基培養時，菌絲顯得不旺盛，基本無氣生菌絲產生。

12.楊樹菇、茶新菇

菌絲較纖細，但長勢有力，初白色，氣生菌絲較少，平鋪于培養基表面生長，邊緣整齊，菌落薄厚一般。培養后期分泌深褐色色素到培養基中，并擴散到菌落表面，常在表面形成黑色稍有纖維化的斑塊。在PDA綜合培養基上，黑暗恒溫25℃下，培養2周左右長滿斜面。

13.靈芝

菌絲纖細、平坦、致密、潔白、均勻、整齊，匍匐生長，幾乎不見氣生菌絲，隨著菌絲的生長，菌落的擴展，近接種塊處的菌絲逐漸老化形成堅韌的菌皮，并隨菌皮的老化，色澤逐漸為淡黃色，不分泌色素，易形成有菌管的子實體原基。在PDA綜合培養基上，28～30℃黑暗培養，8～11天長滿斜面。

八、一級種的基本標準

一級種的基本標準，應具備以下特質。

（1）用統一的或標準的菌種名稱和編號（代號），不得把他人的菌種拿來隨意編號或重新改名。

（2）經出菇試驗、品比試驗以及驗證試驗，具有優良的品種特性，或保持原菌株的生物特性。基本表現為：高產、優質、抗逆性強、生命力旺盛、適應當地氣候特點和市場要求。

（3）有標簽，并注明名稱、編號、種性介紹、生產單位和生產日期。

（4）名稱與內容相符。標明哪種菇即是哪種菇，標明哪個品種就是哪個品種，標明哪個菌株就是哪個菌株，標明哪種特性就是哪種特性。

（5）無任何雜菌污染，無蟲、螨為害，并無潛在的病（雜菌、病原菌）蟲（蟲卵）等。

（6）普通生產用菌種的轉代次數要低于8代，脫毒菌種的轉代次數控制在3代，4代以后其脫毒性狀則不明顯。

（7）菌絲健壯。標志是：齊（先端生長整齊）、白（菌絲具有本品種應有的濃白、白或灰白色）、濃（菌絲濃密）、勻（菌絲生長均勻一致）、香（打開容器，無任何異味，有濃郁的菌香）。

（8）棉塞要干燥、不松動、無雜菌污染，容器無破損。