實驗七 蛋白質等電點的測定
（一）酪蛋白等電點的測定
【原理】
蛋白質在酸性或堿性溶液中，分別帶有正、負電荷，它們互相排斥，不容易生成沉淀，當溶液的pH值改變而使蛋白質分子所帶有的正、負電荷數接近相等時，即失去同電相斥的作用。因此，蛋白質分子很容易彼此結合而沉淀，此時溶液的pH值稱為該蛋白質的等電點。
在本實驗中用酪蛋白的醋酸鈉溶液與不同的醋酸組成5種不同pH值的緩沖溶液，觀察并比較各管中酪蛋白的溶解度，其中沉淀最多的試管之pH值即為酪蛋白的等電點。
【操作】
（1）給5支大試管編號，分別按表2-7-1準確加入試劑，混勻。
表2-7-1
（2）于各試管中加入酪蛋白的醋酸鈉溶液1mL，隨加隨搖（切勿在各管加完后才搖），觀察各管渾濁度。靜置10～30分鐘后，比較各管渾濁度，用（+）號表示其渾濁程度。沉淀最多而上清液較透明的試管的pH值，即為酪蛋白的等電點。填寫實驗報告。
【試劑】
（1）0.01mol/L醋酸。
（2）0.1mol/L醋酸。
（3）1mol/L醋酸。
（4）0.5%酪蛋白的醋酸鈉溶液，稱取純酪蛋白0.25g，置于50mL容量瓶內，準確地加蒸餾水20mL及1mol/LNaOH 5mL，搖勻，使酪蛋白溶解，然后準確地加1mol/L醋酸液5mL，最后用蒸餾水稀釋至刻度。
（二）血紅蛋白在三種不同pH值緩沖液中的電泳
【原理】
血紅蛋白是有色物質，不須染色就可觀察它在電場中的泳動情況。而在不同的pH值溶液中的泳動各有不同。本實驗取三種不同pH值溶液進行比較，其中pH值6.8接近它的等電點（6.79）。
【操作】
（1）在3只電泳槽中分別加入pH值10.0、6.8和4.0緩沖液。
（2）取1.5cm×10cm醋酸纖維薄膜3條，各在正中處用鉛筆畫一短線作原線。分別用上述三種緩沖液浸透，用于濾紙吸干，各于原線點樣（約5μL血紅蛋白）。然后各放入相應的電泳槽（如用pH值10.0緩沖液的必須放入pH值10.0的電泳槽中），擺在槽的正中，使兩端的緩沖液離原線等遠。
（3）進行電泳。電壓：約150V。時間：20～60分鐘。觀察結果，并解釋之。
【試劑】
（1）pH值6.8檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液（0.1mol/L檸檬酸22.75mL,0.2mol/L磷酸氫二鈉77.25mL）。
（2）pH值4.0檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液（0.1 mol/L檸檬酸61.56mL,0.2mol/L磷酸氫二鈉38.55mL）。
（3）pH值10.0碳酸緩沖液（0.05mol/L碳酸氫鈉50mL與0.1mL/L NaOH 10.7mL，加水稀釋至100mL）。
（4）血紅蛋白溶液，取抗凝血5mL，離心除去血漿，用0.9%NaCl洗滌血細胞3次，每次用5mL，要把血細胞攪起，離心后盡量倒去上清液。加水5mL，混勻，放冰箱過夜使之充分溶血，離心10～15分鐘（2000r/min），使血細胞膜殘骸沉淀，取上清透明液放冰箱備用。