實驗六 蛋白質的沉淀反應
當維持蛋白質膠體溶液的穩定因素（水化層和電荷）遭受破壞時，蛋白質即沉淀析出。若系非變性沉淀，例如加入中性鹽或在低溫下加入有機溶劑脫水，則除去沉淀劑，蛋白質仍可溶解，此即可逆的沉淀。若系變性沉淀，例如加入重金屬鹽類、沉淀生物堿的試劑或加熱，則沉淀不易除去，沉淀常不能再溶解，此即不可逆的沉淀反應。
（一）蛋白質的鹽析
【原理】
當蛋白質溶于中性鹽（硫酸銨、硫酸鎂、氯化鈉等）時則蛋白質沉淀析出，稱為鹽析作用。鹽析作用包括兩種過程：①大量電解質破壞了蛋白質的水化層從而出現沉淀。②電解質中和了蛋白質分子所帶的電荷而沉淀。
中性鹽能否沉淀各種蛋白質常決定于中性鹽的濃度、蛋白質的種類、溶液的pH值，以及蛋白質的膠體顆粒。顆粒大者比顆粒小者容易沉淀，如球蛋白多在半飽和的硫酸銨溶液中析出，而清蛋白則常在飽和的硫酸銨溶液中析出。
【操作】
（1）取5mL雞蛋白溶液于中試管中，加入等量飽和硫酸銨溶液，混勻，靜置20分鐘后，則球蛋白全部析出。
（2）過濾、收集透明濾液，濾液中含有清蛋白。若濾液混濁，須重復過濾至透明為止。
（3）取1mL清濾液加固體硫酸銨約0.5g使達飽和，邊加邊振搖至溶液出現渾濁。再向渾濁液（不含硫酸銨結晶顆粒）加1.5～2.0mL水，觀察結果。
【試劑】
（1）1∶10雞蛋白溶液。
（2）飽和硫酸銨溶液，稱取377g硫酸銨溶于500mL 20℃的水中。硫酸銨在20℃的水中溶解度為754g/L水。配制時須稱取稍過量的硫酸銨使溶液中有若干固體存在，同時可加熱助溶。
（3）固體硫酸銨。
（二）重金屬鹽類沉淀蛋白質
【原理】
蛋白質在堿性溶液中，帶有較多的負電荷，當它與帶正電荷的重金屬離子結合時即生成不溶解的沉淀。
重金屬鹽類沉淀蛋白質能引起蛋白質變性，而中性鹽類即使加入量很多也不致改變蛋白質原來的性質。
【操作】
取試管1支，加入1∶10雞蛋白溶液1mL及0.5%NaOH溶液1滴混勻，再加入0.5%硫酸鋅溶液6滴，觀察結果。
【試劑】
（1）1∶10雞蛋白溶液。
（2）0.5%NaOH溶液。
（3）0.5%硫酸鋅溶液。
（三）沉淀生物堿的試劑沉淀蛋白質
【原理】
蛋白質溶液的pH值小于等電點時，蛋白質分子帶較多的正電荷，它能與沉淀生物堿的試劑中的負離子結合而沉淀。
此沉淀常可在堿性溶液中再溶解。屬于沉淀生物堿的試劑有鎢酸、苦味酸、鞣酸等。
【操作】
（1）取1支試管，加入1∶10雞蛋白溶液1mL,10%HCl 1滴，混勻，再加入10%磺基水楊酸溶液2滴。
（2）另取1支試管，加入1∶10雞蛋白溶液1mL及10%NaOH溶液數滴，再加入10%磺基水楊酸溶液2滴。
比較兩管溶液的變化。
【試劑】
（1）1∶10雞蛋白溶液。
（2）10%HCl溶液。
（3）10%NaOH溶液。
（4）10%磺基水楊酸溶液。
（四）加熱沉淀蛋白質
【原理】
由于溫度升高，破壞了蛋白質分子內部的化學鍵會引起蛋白質變性，因此幾乎所有蛋白質都可因加熱而凝固。
蛋白質在其等電點時不帶電荷，或帶等量的正負電荷，此時若溫度升高則容易出現沉淀。在酸性或堿性溶液中，蛋白質分子帶有正或負電荷，較為穩定。如過酸或過堿則易變性，此時若溫度升高，雖變性卻并不沉淀。在冷卻后，加酸或加堿調節pH值達蛋白質的等電點時，則有沉淀析出。
【操作】
（1）取4支試管，編號，按表2-6-1加入試劑。
表2-6-1
（2）將4支試管同時放在沸水浴中加熱，觀察并記錄各管蛋白質出現的現象，解釋變化原因。
（3）取出試管，冷卻后于第3管中慢慢滴入10%NaOH溶液，并觀察現象。
（4）向第4管中慢慢滴入10%醋酸，并觀察現象。
【試劑】
（1）1∶10雞蛋白溶液。
（2）1%醋酸。
（3）10%醋酸。
（4）10%NaOH溶液。
（五）尿蛋白的定性檢查
【原理】
尿蛋白遇熱凝固變性，呈白色渾濁，加乙酸使至蛋白質的等電點，即可除去磷酸鹽或碳酸鹽所形成的白色渾濁。正常人尿蛋白甚微，平均每日30～75mg，一般方法不易檢出。
【操作】
（1）取小試管4支，標號，分別加入1∶10雞蛋白溶液、自己尿液以及待檢尿液1及2到試管內約2/3處。
（2）手執試管底部，使火焰加熱于液柱上段至沸，如有蛋白質，即可看到白色沉淀，如蛋白質較多，可發生凝固。此時再滴入1%醋酸2～3滴，若沉淀消失，表示沉淀物質是磷酸鹽，如沉淀不消失，反而更明顯，則表示尿中有蛋白質。有時，煮沸后雖不渾濁，但加酸后渾濁出現，也表示管中有蛋白質。
上述方法既是尿蛋白定性也是半定量的方法之一?？砂幢?-6-2粗略估計尿中蛋白質含量。
表2-6-2
【試劑】
（1）1∶10雞蛋白溶液。
（2）1%（V/V）醋酸溶液（取冰醋酸1mL加水至100mL）。
（3）蛋白尿（配制兩種濃度不同的蛋白尿為待檢尿）。