第一節 培養基的制備

一、目的與要求

（1）學習制備培養基的基本技術。

（2）制備牛肉膏蛋白瓊脂培養基。

二、原理

牛肉膏蛋白培養基是一種應用最廣泛和最普通的細菌培養基。這種培養基中含有一般細菌生長繁殖所需要的最基本的營養物質，可作繁殖之用；制作固體培養基時須加2%瓊脂；培養細菌時，應用稀酸或稀堿將pH調至中性或微堿性。

牛肉膏蛋白培養基的配方：牛肉膏0.5%，蛋白胨1%, NaCl0.5%, pH值7.4～7.6。

三、材料與儀器

1．試劑

牛肉膏，蛋白胨，NaCl，瓊脂，1mol/L NaOH溶液，1mol/L HCl溶液。

2．其他

試管，三角燒瓶，燒杯，量筒，漏斗，乳膠管，彈簧夾，紗布，棉花，牛皮紙，線繩，pH試紙，電爐，天平。

四、操作步驟

1．稱量

根據用量按比例依次稱取成分。牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化后倒入燒杯。

2．溶解

在燒杯中加入少于所需要的水量，加熱，加入各成分，使其溶解，瓊脂在溶液煮沸后加入，溶化過程中需不斷攪拌。加熱時應注意火力，勿使培養基燒焦或溢出。瓊脂完全溶化后，補足所需水分。

3．調pH

用1mol/L NaOH溶液或1mol/L HCl溶液把pH值調至所需范圍。

4．過濾

趁熱用濾紙或多層紗布過濾，以利于某些實驗結果的觀察。

5．分裝

按實驗要求，可將配制的培養基分裝入試管內或三角瓶內。

（1）液體分裝。分裝高度以試管高度的1/4左右為宜，分裝三角瓶的量則根據需要而定，一般以不超過三角瓶容積的1/2為宜。

（2）固體分裝。分裝試管，其裝量不超過管高度的1/5，滅菌后制成斜面，斜面長度不超過管長的1/2。分裝三角瓶，以不超過容積的1/2為宜。

（3）半固體分裝。裝置以試管高度的1/3為宜，滅菌后垂直待凝。

6．加棉塞

分裝完成后，在試管口或三角瓶口塞上棉塞（或泡沫塑料塞）及試管帽等，以阻止外界微生物進入培養基而造成污染，并保證有良好的通氣性能。

7．包扎

在棉塞頭上包一層牛皮紙，扎緊，即可進行滅菌。

8．保存

滅菌后的培養基放入37℃培養箱中培養24小時，以檢驗滅菌的效果，無污染方可使用。

思維聚焦

已經滅菌的培養基如何進行無菌檢查？

知識拓展

pH是1909年由丹麥生物化學家SorenPeterLauritz Sorensen提出。pH值是氫離子濃度指數，一般在0～14之間。在常溫下（25℃時），當它為7時溶液呈中性；小于7時呈酸性，值越小，酸性越強；大于7時呈堿性，值越大，堿性越強。通常使用pH試紙來檢測溶液和水的酸堿程度。