三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

（一）細(xì)胞的基本形態(tài)觀察

1.原理

細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)與功能相關(guān)是很多細(xì)胞的共同特點(diǎn)，在分化程度較高的細(xì)胞中更為明顯。這是生物漫長(zhǎng)進(jìn)化過程的產(chǎn)物，從進(jìn)化觀點(diǎn)看有一定合理性。例如：具有收縮功能的肌細(xì)胞伸展為細(xì)長(zhǎng)形；具有感受刺激和傳導(dǎo)沖動(dòng)功能的神經(jīng)細(xì)胞有長(zhǎng)短不一的樹狀突起；游離的血細(xì)胞為圓形、橢圓形或圓餅形。不論細(xì)胞的形狀如何，光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞的結(jié)構(gòu)一般分為三大部分，即細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。但也有例外，如哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞沒有細(xì)胞核。

2.觀察方法與結(jié)果

（1）人口腔黏膜上皮細(xì)胞標(biāo)本的制備與觀察：取清潔牙簽，用鈍端在自己口腔內(nèi)腮面輕刮少許黏液，并棄掉。換支牙簽，在原位稍用力刮取上皮細(xì)胞，均勻涂在一張干凈的載玻片中央（不可反復(fù)涂抹），滴1滴甲苯胺藍(lán)染液，染色5min，蓋上蓋玻片，吸去多余染液。先在低倍鏡下觀察，可見視野中有許多單個(gè)或成堆的被染成藍(lán)色的細(xì)胞，即人口腔黏膜上皮細(xì)胞。細(xì)胞呈多邊形或橢圓形，細(xì)胞中央有一染成深藍(lán)色的細(xì)胞核，核周圍均質(zhì)部分為細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞外表有細(xì)胞膜（圖1-1）。

（2）蟾蜍血涂片的制備與觀察：取一滴蟾蜍血液，靠近一端滴在載玻片上，將另一載玻片的一端呈45°角緊貼在血滴的前緣，均勻用力向前推，使血液在載玻片上形成均勻的薄層（圖1-2）。晾干。將制備好的蟾蜍血涂片在低倍鏡下選擇涂布均勻的血細(xì)胞，換高倍鏡觀察。蟾蜍的紅細(xì)胞呈橢圓形，有核，細(xì)胞膜不顯著。白細(xì)胞數(shù)目少，為圓形。此外，還看到各種形態(tài)不同的血小板（圖1-3）。

（3）人血細(xì)胞的觀察：取人血涂片1張，在顯微鏡下觀察，可見人紅細(xì)胞為凹圓盤形，無核。白細(xì)胞數(shù)目少，為圓形。

（4）制備蟾蜍脊髓壓片觀察脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)細(xì)胞：取一只蟾蜍，左手握住其股部，腹部貼著掌心，食指壓住蟾蜍頭部前端使其盡量屈腹。在頭和軀干之間可摸到一凹陷處（枕骨大孔），用解剖針從枕骨大孔向內(nèi)刺入1～2mm（注意不要太深），隨即將針尖向前攪碎腦組織，然后再轉(zhuǎn)向后深入椎孔內(nèi)，攪碎脊髓，待看到蟾蜍后肢強(qiáng)直肌肉松弛時(shí)為止。在口裂處剪去頭部，除去延腦，剪開椎管，可見乳白色脊髓，取下脊髓放在平皿內(nèi)，用Ringer液洗去血液后放在載玻片上，剪碎。將另一載玻片壓在脊髓碎塊上，用力擠壓。將上面的載玻片取下即可得到壓片。在壓片上滴一滴甲苯胺藍(lán)染液，染色10min，蓋上蓋玻片，吸去多余染液。在顯微鏡下觀察，染色較深的小細(xì)胞是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。染成藍(lán)紫色的、大的、有多個(gè)突起的細(xì)胞是脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)細(xì)胞，胞體呈三角形或星形，中央有一圓形細(xì)胞核，內(nèi)有一個(gè)核仁（圖1-4）。

（5）骨骼肌細(xì)胞的觀察：取家兔骨骼肌縱切片，置于低倍鏡下觀察，可見細(xì)胞呈圓柱形，其內(nèi)有許多細(xì)胞核（圖1-5）。

（二）顯微測(cè)微尺的使用

1.原理

顯微測(cè)微尺由目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺組成，兩尺配合使用。目鏡測(cè)微尺，簡(jiǎn)稱目微尺，是一塊圓形的玻璃片，直徑20～21mm。它的上面刻有直線或網(wǎng)格式的標(biāo)尺。其中網(wǎng)格式的目微尺可用來測(cè)量物體的體積。使用目微尺時(shí)，先將目鏡從鏡筒中抽出，旋去接目透鏡，然后將目微尺放在目鏡的光闌上。注意讓有刻度的一面朝下，再將接目透鏡旋上，把目鏡插入鏡筒 ，即可進(jìn)行測(cè)量。

鏡臺(tái)測(cè)微尺，簡(jiǎn)稱臺(tái)微尺，是一塊特制的載玻片。它的中央封著一把刻度標(biāo)尺，全長(zhǎng)1mm，共劃分成10個(gè)大格，每一個(gè)大格又分成10個(gè)小格，共100個(gè)小格，每一小格長(zhǎng)0.01mm，即10μm。在標(biāo)尺的外圍有一小黑環(huán)，利于找到標(biāo)尺的位置。要測(cè)量標(biāo)本的長(zhǎng)度，首先必須對(duì)目微尺在不同放大倍數(shù)的物鏡下進(jìn)行標(biāo)定。

2.方法

（1）將臺(tái)微尺夾于載物臺(tái)上，調(diào)焦直至看到臺(tái)微尺刻度。這時(shí)目微尺和臺(tái)微尺同時(shí)顯示在視野中，轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡，使目微尺標(biāo)尺直線與臺(tái)微尺標(biāo)尺直線盡量靠近平行，最終促使兩線重合，再移動(dòng)臺(tái)微尺，使兩個(gè)微尺左邊一端平齊，然后從左到右找出兩個(gè)微尺另一次重合的直線（圖1-6），分別計(jì)數(shù)重合線之間臺(tái)微尺和目微尺各自包含的格數(shù)，據(jù)公式即可計(jì)算出目微尺每個(gè)小格的標(biāo)度。

（2）按下式求出目鏡測(cè)微尺每格代表的長(zhǎng)度。

這樣，就可進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定時(shí)，取下臺(tái)微尺，換上標(biāo)本，記錄被檢標(biāo)本占目微尺的格數(shù)，然后乘以每小格代表的長(zhǎng)度，即為標(biāo)本的實(shí)際長(zhǎng)度。如果更換不同放大率的鏡頭，必須重新標(biāo)定目微尺，這樣才能再次測(cè)量。

根據(jù)測(cè)量結(jié)果可計(jì)算各種細(xì)胞、細(xì)胞核的體積及核質(zhì)比例，公式如下：

1）橢圓形：計(jì)算式為V=4/3πab2（a、b為長(zhǎng)、短半徑）。

2）圓球形：計(jì)算式為V=4/3πR3（R為半徑）。

3）核質(zhì)比例：計(jì)算式為Np=Vn/（Vc-Vn）（Vc為細(xì)胞的體積，Vn為細(xì)胞核的體積）。

（三）測(cè)量人口腔黏膜上皮細(xì)胞

從顯微鏡載物臺(tái)上取下鏡臺(tái)測(cè)微尺，換上人口腔黏膜上皮細(xì)胞標(biāo)本，測(cè)量細(xì)胞、細(xì)胞核的長(zhǎng)短徑。