第二節(jié)　羊肚菌菌種生產(chǎn)、營(yíng)養(yǎng)袋制作與出菇試驗(yàn)

一、菌種生產(chǎn)

羊肚菌菌種最大的缺點(diǎn)就是容易退化、變異，給羊肚菌栽培帶來很大困難。為了解決這些問題，每年羊肚菌菌種都需要分離、提純和做出菇試驗(yàn)，并且需要妥善保管、運(yùn)輸，控制菌種傳代。菌種生產(chǎn)流程如下：羊肚菌選擇和采集→組織（孢子）分離→提純培養(yǎng)→出菇試驗(yàn)→優(yōu)良一級(jí)菌種→復(fù)壯培養(yǎng)、菌種擴(kuò)繁→二級(jí)菌種→接種、培養(yǎng)栽培菌種。

1．菌種分離

羊肚菌的分離方法與其他食用菌大體相同，采用組織分離和孢子分離。

（1）組織分離 選取成熟、具優(yōu)良長(zhǎng)勢(shì)的羊肚菌子實(shí)體，在無菌環(huán)境中用接種針將組織塊接入平皿培養(yǎng)基上，獲得菌種。

① 培養(yǎng)基制作。配方為馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂18～20g、磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂1.5g、水1000ml。將培養(yǎng)基裝到500ml三角瓶中（每瓶裝入200ml），115℃滅菌30min后在無菌條件下將培養(yǎng)基倒入平皿中（每個(gè)平皿約20ml），冷卻備用。

② 選取頭潮、新鮮、健壯、周圍幼菇或

原基多、朵形圓整、七八分熟的子實(shí)體（圖1-10）。

③ 菇面用75%酒精棉球擦拭消毒。

④ 切取組織塊（菌肉）。用手術(shù)刀切開種菇（圖1-11），在菌蓋或菌柄內(nèi)側(cè)用無菌手術(shù)刀或尖嘴鑷子取5mm見方組織塊（菌肉）接于培養(yǎng)基上（圖1-12）。

⑤ 培養(yǎng)。溫箱18℃恒溫培養(yǎng)，2天后組織塊萌發(fā)（圖1-13），待菌落長(zhǎng)到2cm（圖1-14），用接種針選取最優(yōu)菌落的先端菌絲接入新培養(yǎng)基，進(jìn)行尖端脫毒。將菌絲生長(zhǎng)快、產(chǎn)菌核適中、產(chǎn)色素少且晚的分離物挑選出來，作為第一代母種保存?zhèn)溆谩?/p>

除菌絲尖端脫毒法外還可采用斷橋脫毒法。在無菌條件下，用接種針把平皿培養(yǎng)基中間培養(yǎng)基斷開1cm，把菌種接在斷開培養(yǎng)基一側(cè)（圖1-15、圖1－16），菌絲穿越斷開處，伸入前端的培養(yǎng)基上，可以純化菌種。

（2）孢子分離 在無菌條件下，使孢子在適宜的培養(yǎng)基上萌發(fā)成菌絲體而獲得純培養(yǎng)的方法。多孢分離的菌株不能直接用于生產(chǎn)，要經(jīng)過出菇試驗(yàn)。采集孢子有多種方法，如整朵插種菇、三角瓶鉤懸和試管瓊脂培養(yǎng)基黏附法等，此處介紹整朵插種菇法。

① 選取頭潮、新鮮、健壯、八九分成熟的子實(shí)體。

② 采集孢子。將按照組織分離方法消毒子實(shí)體的整朵菇插入無菌孢子收集器里，在18℃下培養(yǎng)2～3天后子囊孢子落下，形成孢子印（圖1-17） 。

③ 孢子分離、培養(yǎng)。無菌條件下，將少量孢子移入盛無菌水的三角瓶?jī)?nèi)稀釋成孢子懸浮液，其濃度以1滴水中含5～10個(gè)孢子為宜。用接種環(huán)取孢子懸浮液在斜面上劃線，孢子萌發(fā)后菌絲體長(zhǎng)在一起。取菌絲塊轉(zhuǎn)接新的平皿培養(yǎng)基上，18℃避光培養(yǎng)（圖1-18）。選取菌絲生長(zhǎng)快，菌核數(shù)量適中，產(chǎn)生色素少且晚的培養(yǎng)物用于栽培試驗(yàn)。

2．母種擴(kuò)大繁殖及保藏

（1）母種擴(kuò)大繁殖 選取無污染菌絲優(yōu)良的試管菌種，用接種針劃取帶培養(yǎng)基的小塊菌種接到斜面培養(yǎng)基中（圖1-19），一般1支母種第一次擴(kuò)接15～20支。將轉(zhuǎn)接的菌種放在18℃培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)7天，待菌絲長(zhǎng)滿試管斜面后備用。母種轉(zhuǎn)代盡量不要超過3代。

（2）優(yōu)質(zhì)母種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 菌絲長(zhǎng)勢(shì)均勻，開始是白色，后來慢慢變成黃色，無雜菌污染，表明菌絲生長(zhǎng)良好（圖1-20、圖1-21）。

（3）母種的保藏 放入冰箱3～5℃保鮮層保存，但時(shí)間最長(zhǎng)不超過3個(gè)月。

3．原種和栽培種制作

（1）常用配方

① 木屑30%，稻殼30%，小麥20%，腐殖土20%。

② 木屑65%，小麥20%，白糖1%，石膏1%，過磷酸鈣1%，腐殖土12%。

③ 玉米芯40%，木屑30%，小麥15%，石膏1%，過磷酸鈣1%，腐殖土13%。

④ 木屑40%，棉籽殼30%，小麥15%，石膏1%，過磷酸鈣1%，腐殖土13%。

以上每個(gè)配方最后都需要加入原料用量1%的石灰。

（2）制作方法 小麥浸泡或煮漲，木屑發(fā)酵3個(gè)月以上，再加入煮漲的小麥、濕土及其他材料，將配方混合均勻后，加入清水，使含水量達(dá)55%～65%時(shí)即可裝料。原種一般采用500～750ml的玻璃瓶，裝瓶要求上下松緊一致，用薄膜封口就行。栽培種一般用（15～18）cm×33cm的聚丙烯折角袋裝料，無棉蓋封口。高壓滅菌在1.5MPa下維持4h，常壓滅菌在100℃以上保持10～12h，注意滅菌時(shí)間不能過長(zhǎng)，壓力不能過高，否則會(huì)破壞其中的養(yǎng)分。高壓滅菌見圖1-22。

（3）培養(yǎng) 在無菌條件下，每支母種可

接原種3～5瓶，每瓶原種可接40～60袋栽培種，接種后放在18～22℃條件下暗光培養(yǎng)。3天菌絲開始萌發(fā)吃料，10天菌絲可布滿培養(yǎng)基表面，15～20天可長(zhǎng)滿。在培養(yǎng)期間要盡量避免強(qiáng)光刺激，菌齡不超過30天為好。

合格的羊肚菌菌種應(yīng)該菌絲生長(zhǎng)均勻、迅速，無污染；在瓶肩部或料與瓶的縫隙處產(chǎn)生菌核，菌核初期白色，后期為金黃色至淺褐色的顆粒狀（圖1-23～圖1-26）。菌絲太弱、菌絲老化、含雜菌者不能用。

二、營(yíng)養(yǎng)袋制作

（1）營(yíng)養(yǎng)袋規(guī)格 營(yíng)養(yǎng)袋有2種規(guī)格，一般用12cm×24cm或14cm×28cm的折角袋裝料。

（2）營(yíng)養(yǎng)袋配方 營(yíng)養(yǎng)袋的配方很多，以下配方供參考。

① 稻殼40%，小麥60%。另加占總料1%的石灰。

② 玉米芯30%，稻殼20%，小麥50%。另加占總料1%的石灰。

③ 木屑30%，玉米芯20%，小麥40%，麩皮9%，過磷酸鈣1%。另加占總料1%的石灰。

（3）制作方法 原材料的預(yù)處理方法和做菌種時(shí)一樣，將配方混合均勻后，使含水量達(dá)55%～65%時(shí)即可裝料。將裝好料的營(yíng)養(yǎng)袋用專用扎口機(jī)或者塑料繩扎口，然后裝入編織袋或筐內(nèi)，放入滅菌柜內(nèi)滅菌。高壓滅菌在1.5MPa下維持6h，常壓滅菌在100℃以上保持18～20h，滅完菌冷卻后使用（圖1-27、圖1-28）。

三、出菇試驗(yàn)

羊肚菌是子囊菌，多次擴(kuò)大繁育的菌種較易發(fā)生變異，不經(jīng)出菇試驗(yàn)，直接用于大量生產(chǎn)，就有可能導(dǎo)致子實(shí)體生產(chǎn)率降低，甚至絕收。下面簡(jiǎn)單介紹一下室內(nèi)出菇試驗(yàn)。

① 播種（圖1-29、圖1-30）。

② 菌絲生長(zhǎng)、形成菌霜（圖1-31、圖1-32）。

③ 放營(yíng)養(yǎng)包。放12cm×24cm菌袋制作的營(yíng)養(yǎng)包，營(yíng)養(yǎng)包倒放土上，壓實(shí)使袋內(nèi)營(yíng)養(yǎng)料緊貼菌絲（圖1-33）。

④ 出菇（圖1-34～圖1-36）。

（羅金洲 編寫）