九、鴨病毒性腸炎

鴨病毒性腸炎（Duck virus enteritis，DVE）又名鴨瘟，是由鴨瘟病毒引起的鴨等雁形目禽類的一種急性、敗血性及高度致死性傳染病。臨診上以發病快、傳播迅速、發病率和病死率高，部分病鴨腫頭流淚、食道黏膜出血及壞死、肝臟出血或壞死等為主要特征。該病給世界養鴨業造成了巨大的經濟損失。OIE將其列入B類傳染病，我國將其列為二類疫病。

該病于1923年在荷蘭首次報道，1967年在美國東海岸流行，幾乎呈全球性分布，我國于1957年在廣州首先發現該病。

（一）病毒特征

鴨瘟病毒（Duck plague virus），又稱鴨皰疹病毒Ⅰ型（Anatid herpesvirus），系皰疹病毒科的成員，具有皰疹病毒的典型形態結構。有囊膜，病毒粒子呈球形或橢圓形，直徑80～160nm，有的成熟病毒粒子可達300nm。在感染細胞制備的超薄切片中，電鏡下可見細胞核內病毒粒子約90nm，胞漿內病毒粒子約160nm。該病毒對乙醚、氯仿敏感，在37℃下經胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶及脂肪酶處理18h可使該病毒部分失活或完全失活。

該病毒只有一個血清型，但不同毒株的毒力有差異。病毒適于在8～14日齡鴨胚及鴨胚成纖維細胞單層（DEF）增殖傳代，一般接種3～5d致死鴨胚，死亡胚胎呈廣泛性出血、肝臟有特征性壞死灶，部分胚絨毛尿囊膜水腫、出血、增厚。在成纖維細胞單層中，接毒3～6d可出現細胞病變（CPE）。經過鴨胚或鴨胚成纖維細胞多次連續傳代后的病毒，接種鵝胚、雞胚或其成纖維細胞單層也能很好地增殖。

鴨瘟病毒具有廣泛的組織嗜性，在病（死）鴨臟器、血液、分泌物及排泄物中均含有病毒，但以肝、脾、腦、食道、泄殖腔的含毒量最高。

鴨瘟病毒對外界環境抵抗力較強，在22℃條件下其感染力可維持30d，－7～－5℃時可存活3個月；但50℃ 90～120min、56℃ 30min、60℃ 15min、80℃ 5min均可破壞病毒的感染性。在pH 5.0～9.0環境中較穩定，經6h其毒力不降低；在pH3.0以下或pH11.0以上的環境中很快被滅活。對一般常用消毒劑敏感。

（二）臨床癥狀

自然感染的潛伏期3～5d，人工感染的潛伏期為2～4d。病初體溫升高達43℃以上，高熱稽留。病鴨表現精神委頓，頭頸縮起，羽毛松亂，翅膀下垂，兩腳麻痹無力，伏坐地上不愿移動，強行驅趕時常以雙翅撲地行走，走幾步即行倒地。病鴨不愿下水，驅趕入水后也很快掙扎回岸。病鴨食欲明顯下降，甚至停食，渴欲增加。病鴨的特征性癥狀為流淚和眼瞼水腫。病初流出漿液性分泌物，使眼瞼周圍羽毛沾濕，而后變成黏稠或膿樣，常造成眼瞼粘連、水腫，甚至外翻，眼結膜充血或小點出血，甚至形成小潰瘍。病鴨鼻中流出稀薄或黏稠的分泌物，呼吸困難，并發生鼻塞音，叫聲嘶啞，部分鴨見有咳嗽。病鴨發生瀉痢，排出綠色或灰白色稀糞（圖1-33），肛門周圍的羽毛被沾污或結塊。肛門腫脹，嚴重者外翻，翻開肛門可見泄殖腔充血、水腫、有出血點，嚴重病鴨的黏膜表面覆蓋一層假膜，不易剝離。部分病鴨在疾病明顯時期，可見頭和頸部發生不同程度的腫脹（圖1-34），觸之有波動感，俗稱“大頭瘟”。

（三）病理變化

病變的特點是出現急性敗血癥，全身小血管受損，導致組織出血和體腔溢血（圖1-35），尤其消化道黏膜出血和形成假膜或潰瘍，淋巴組織和實質器官出血、壞死。食道與泄殖腔的疹性病變具有特征性。食道黏膜有縱行排列呈條紋狀的黃色假膜覆蓋或小點出血（圖1-36），假膜易剝離并留下潰瘍斑痕。泄殖腔黏膜病變與食道相似，即有出血斑點和不易剝離的假膜與潰瘍。食道膨大部分與腺胃交界處有一條灰黃色壞死帶或出血帶，肌胃角質膜下層充血和出血。腸黏膜充血、出血，以直腸和十二指腸最為嚴重。位于小腸上的4個淋巴出現環狀病變，呈深紅色，散布針尖大小的黃色病灶，后期轉為深棕色，與黏膜分界明顯。胸腺有大量出血點和黃色病灶區，在其外表或切面均可見到。雛鴨感染時法氏囊充血發紅，有針尖樣黃色小斑點，到后期，囊壁變薄，囊腔中充滿白色、凝固的滲出物。肝表面和切面有大小不等的灰黃色或灰白色的壞死點，少數壞死點中間有小出血點。膽囊腫大，充滿黏稠的墨綠色膽汁。心外膜和心內膜上有出血斑點，心腔里充滿凝固不良的暗紅色血液。產蛋母鴨的卵巢濾泡增大，卵泡的形態不整齊，有的皺縮、充血、出血，有的發生破裂而引起卵黃性腹膜炎。病鴨的皮下組織發生不同程度的炎性水腫，在“大頭瘟”典型的病例，頭和頸部皮膚腫脹、緊張，切開時流出淡黃色的透明液體。

（四）流行病學特征

易感動物：自然易感動物為鴨、鵝、天鵝等水禽，不同品種、日齡均可感染該病，但發病率及病死率有一定差異，其中以家鴨、番鴨、野鴨、鵝、天鵝等易感性較高。在自然感染病例中，以1月齡以上的鴨多見，發病率可高達100%，病死率達95%以上。近些年來，有鵝感染鴨瘟出現大量死亡的報道。自然條件下，野生的雁形目鴨科成員（野鴨、野鵝等）常成為帶毒者，而雞、火雞、鴿、麻雀和哺乳動物等對鴨瘟有抵抗力，但人工感染2周齡雛雞可以發病；經雞胚致弱的鴨瘟病毒對鴨失去致病力，但對1月內雛雞的毒力大大增強，致死率甚高。

傳染源：病鴨、病愈不久的帶毒鴨及潛伏期的感染鴨是主要的傳染源。被病鴨分泌物、排泄物污染的飲水、飼料、場地、水域、用具、運輸工具以及某些帶毒的野生水禽（如野鴨）和飛鳥等也可成為本病的傳染源。野鴨在感染后1年以上仍能分離到病毒。

傳播途徑：消化道是主要的感染途徑，但也可通過交配、眼結膜及呼吸道等途徑感染。該病主要通過水平傳播，吸血昆蟲可能是本病潛在的傳播媒介，目前尚未發現該病有垂直傳播。遷徙水禽對病毒起傳播作用。人工感染試驗，經口服、滴鼻、泄殖腔接種、皮膚刺種、肌內注射、腹腔內注射和靜脈注射等途徑均可引起健康鴨發病、死亡。

流行形式及因素：本病一年四季均可發生，但以夏秋流行最為嚴重。在我國南北方發病差異較大；南方發病多，且主要見于春夏兩季鴨群放牧及運銷旺季；北方發病少，偶見于秋季，這可能與北方地區鴨的飼養數量和飼養方式有關。在購銷旺季，由于鴨的大批調運，常使本病從一個地區傳至其他地區。

當鴨瘟傳入未免疫的易感鴨群后，一般在3～5d出現零星病鴨，再經3～6d發病鴨明顯增多，疾病進入流行高峰期。整個流行過程一般為2～6周。若鴨瘟傳入免疫鴨群，或不發病，或僅有個別鴨發病，且流行過程較為緩慢。

（五）預防及治療

尚無特效藥物可用于治療，故應以預防為主。除做好生物安全性措施外，采用鴨瘟弱毒活疫苗進行免疫接種能有效地預防本病的發生。

加強飼養管理，堅持自繁自養。由于鴨瘟的傳播速度快、致死率高，一旦傳入鴨群可造成巨大的經濟損失，因此對該病的防控應給予足夠的重視。在該病的非疫區，要禁止到鴨瘟流行區域和野鴨出沒的水域放鴨。加強本地良種繁育體系建設，堅持自繁自養，盡量減少從外地，尤其是從疫區引種的機會，防止該病的引入。加強飼養管理，防止帶毒野生水禽進入鴨群。

加強檢疫、消毒和免疫接種。受威脅地區除應加強檢疫、消毒等獸醫衛生措施外，易感鴨群應及時進行鴨瘟疫苗的免疫接種。疫苗免疫接種是預防和控制鴨瘟的主要措施，目前國內應用的疫苗主要是鴨瘟病毒弱毒苗。種用鴨或蛋用鴨于30日齡左右首免，以后每隔4～5個月加強免疫1次。3月齡以上鴨免疫1次即可，免疫有效期可達1年。但免疫接種應注意安排在開產前20d左右或停蛋期或低產蛋期間。對于肉用鴨，于7日齡左右首免，20～25日齡時二免。

（六）實驗室檢測

參照標準：GB/T 22332—2008。

1.病毒分離

（1）材料準備

1）病料的采集　一般在感染初期或發病急性期從瀕死期禽或活禽采取。瀕死期禽采集肝、脾、腦等組織樣品。活禽用滅菌的棉拭子涂抹泄殖腔。帶有分泌物的棉拭子放入每毫升含有1000IU青霉素、1000μg鏈霉素、pH 7.2～7.6的磷酸鹽緩沖液中。送檢病料置于50%的甘油生理鹽水中。

2）病料的保存　采集的樣品若在48h內處理，可于4℃保存；否則應放－20℃以下保存。

3）病料的處理　將棉拭子充分捻動、擰干后去除拭子。樣品液經3000r/min 4℃離心30min，取上清液作為接種材料。組織樣品先用pH 7.2～7.6的PBS制成5～10倍乳劑，3000r/min 4℃離心30min，取上清液作為接種材料。為防止細菌污染，可在樣品液中加入青霉素（1000IU/ml）、鏈霉素（1000μg/ml）、卡那霉素（1000μg/ml），37℃溫箱作用30min。進行無菌檢驗。

4）鴨胚　10～11日齡的非DVE疫苗免疫鴨胚。

（2）實驗操作

1）胚胎接種　取經處理并且無菌檢驗合格的樣品，以0.2ml/胚的量經絨毛尿囊膜接種10～11日齡的非DVE疫苗免疫的鴨胚，每個樣品接種4～5個胚，于38～38.5℃恒溫箱中孵育。72h前每天照胚1～2次，以后每天照胚5次。棄去72h前死亡的胚胎，凍存72～120h內的死胚或活胚。

2）病毒收獲　無菌收取72～120h內的死胚或活胚的絨毛尿囊膜和尿囊液，－20℃保存備用。

3）如第一代分離結果為陰性，需盲傳三代。

2.PCR

（1）引物

P1：GAG CGT ATT TAG TAG AAA CTG C（上游）。

P2：TGA ATG TTG TGA TTG TTC（下游）。

（2）病毒核酸的抽提

1）組織樣品用pH 7.2～7.6的PBS制成5～10倍乳劑，3000r/min 4℃離心30min，上清液作為待檢材料。

2）取一支1.5ml的指形管，加入待檢胚液或1）中上清液和30μl（20mg/ml）核糖核酸酶，混勻后，室溫下作用20min。

3）加43μl 10%的十二烷基酸鈉溶液和5μl（10mg/ml）蛋白酶K，42℃水浴溫育過夜。

4）加等量的Tris鹽酸飽和酚（pH7.6），充分混勻，12000r/min離心5min，小心吸出上層水相于另一個指形管中。

5）加等量的酚-三氯甲烷-異戊醇（25∶24∶1），充分混勻，12000r/min離心5min，小心吸出上層水相于另一個指形管中。

6）加1/10體積3mol/L的乙酸鈉（pH5.4）、2.5倍體積預冷的無水乙醇，15000r/min離心20min，棄去乙醇，沉淀用75%的乙醇洗滌1次，真空干燥。用20μl滅菌雙蒸水溶解沉淀，－20℃保存備用。

（3）操作程序　取一支0.5ml的指形管，依次加入下列試劑：2.5μl 10×的PCR緩沖液、1.0μl上游引物、1.0μl下游引物、0.5μl DNTP、1.0μl病毒核酸、18.5μl滅菌雙蒸水、0.5μl Tag DNA酶，于PCR儀中運行94℃30s、55℃30s、72℃ 30s，25個循環，72℃ 8min，同時設立陽性和陰性對照。

（4）PCR產物的檢測　反應結束后，PCR產物于1.2%的瓊脂糖凝膠中電泳，每個樣品的加樣量為5～10μl，同時以100 bp DNA分子質量標準物為參照。50V恒壓電泳40min，于紫外燈下觀察。

（5）結果的判定　陽性對照在416bp處有一條特異的DNA條帶，陰性對照沒有目的條帶，證明本實驗成立。待檢樣品在相同位置有DNA條帶，判為陽性，否則為陰性。