學習活動3 植物組織培養實訓室的器皿、工具及其使用

【學習目標】 1．認識植物組織培養實訓室常用的器皿及工具。

2．能正確清洗各種器皿。

3．能正確使用各種常用的工具。

【學習準備】 玻璃器皿：試管、三角瓶、組織培養瓶、培養皿、貯液瓶、燒杯、量杯、量筒、容量瓶、稱量瓶、試劑瓶、滴管、移液管、玻璃棒、酒精燈。

工具：鑷子、手術剪、解剖刀、接種針、接種鉤、接種鏟、試管架、洗耳球、搪瓷盤、藥匙、醫用小平車、育苗盤、育苗缽。

【學習過程】

問題1

植物組織培養實訓室常用的器皿及工具有哪些？

基本知識

一、常用玻璃器皿的種類及規格

1．試管：常用規格有2 cm×15 cm、2.5 cm×15 cm、3 cm×15 cm。

2．三角瓶：口徑多為2.5~3 cm；容積為50、100、150、250 mL不等。

3．組織培養瓶：用于試管苗的快繁，成本低，空間大，氣體條件好，操作方便。常用200~500 mL的規格。

圖2-3-1組織培養玻璃器皿

4．培養皿：用于單細胞的固體平板培養、胚和花藥培養、室內催芽等。

5．注射器：該注射器頭上裝有濾板夾，可過濾消毒，亦可用于微量懸滴培養中營養液的分裝。

6．刻度移液管：專管專用，常用的移液管容量有0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1、1.5、2、2.5、5、10 mL等規格。

7．其他：各種容量的燒杯、量杯、量筒、試劑瓶、容量瓶、稱量瓶、滴管、玻璃棒等。

二、工具

1．鑷子：小型尖頭鑷子，適用于夾取植物組織和分離莖尖、葉片表皮等。長20~30 cm的槍形鑷子，腰部彎曲，可用于接種和轉移植物材料。

2．剪刀：常用的剪刀有解剖剪和彎頭剪，一般在轉移植株時使用。

3．解剖刀及刀片：常用的解剖刀有長柄和短柄兩種，刀片有單面和雙面之分。

4．接種工具：有接種針、接種鉤、接種鏟等，由白金絲或鎳絲制成。

5．打孔器：取肉質莖、塊莖、肉質根內部組織時使用。

6．其他：酒精燈、電磁爐、普通電爐、貯備蒸餾水的大型塑料桶、試管架、封口紙、皮套、脫脂棉、濾紙、藥匙、溫度計、濕度計、照度計、搪瓷盤、育苗盤、醫用小平車等。

圖2-3-2組織培養工具

圖2-3-3電磁爐

問題2

植物組織培養實訓室器皿、工具的使用及無菌操作應遵循哪些規程？

基本操作

三、玻璃器皿洗滌

植物組織培養中對玻璃器皿的清潔程度要求較高。

新購置的玻璃器皿或多或少地含有游離的堿性物質，試用前先用1%稀鹽酸浸泡12 h，再用肥皂水洗凈，清水沖洗，最后用蒸餾水沖洗一遍，晾干備用。

用過的玻璃器皿，先除去器皿中的殘渣，用清水洗凈，再用溫肥皂水或洗衣粉水洗凈，清水沖洗，最后用蒸餾水沖洗一遍，晾干備用。

已污染的玻璃器皿，必須高壓蒸汽滅菌后（高壓滅菌鍋溫度121℃，滅菌時間30 min），倒掉殘渣，用清水沖洗，并用毛刷刷去瓶壁上的培養液和菌斑，再用清水沖洗干凈，浸泡于濃重鉻酸鉀中2h后取出，用自來水沖洗3~4次，最后用蒸餾水沖洗一遍，晾干備用。

清洗后的玻璃器皿，瓶壁應透明發亮，內外壁水膜應均一，不掛水珠。

對有頑固污垢的玻璃器皿，用超聲波清洗，十分有效，對環境無污染。

四、滅菌方法

1．干熱滅菌法：用于玻璃器皿或金屬器具等耐熱器具的滅菌。可以利用烘箱進行干熱滅菌，烘箱溫度150℃~180℃，保溫時間2~3 h；滅菌后待烘箱充分冷卻后打開烘箱門，以免外部冷空氣進入烘箱，引起污染，或造成玻璃器皿的爆炸。

2．高壓蒸汽滅菌法：用于玻璃器皿、器具和培養基的滅菌。新配制好的培養基分裝后應立即滅菌，主要用此方法。控制高壓滅菌鍋內壓力為1.1 kg/cm2，溫度為121℃，保持20~25 min。

3．過濾除菌法：用于高溫下容易分解或變性的物質，如生長調節物質、酶、某些維生素等不耐高溫物質的滅菌。此法比較麻煩，不常用。

4．灼燒滅菌法：用于接種工具的滅菌。將接種工具直接在酒精燈的火焰上灼燒以殺死病菌，一般接種前先將接種工具用95%酒精浸泡，然后在火焰上灼燒，冷卻后使用；或用組織培養器械專用滅菌器進行滅菌。

5．熏蒸滅菌法：接種室常用此方法滅菌，用甲醛與高錳酸鉀產生的氣體熏蒸，可殺死室內的病菌。接種室應定期熏蒸，效果好。

6．紫外線照射滅菌法：接種室和超凈工作臺接種前打開紫外線燈照射20~40 min。接種時要關閉紫外線燈，以免對人體造成傷害。

五、無菌操作

植物組織培養過程中，把用于離體培養的植物材料轉入培養基的過程稱為接種。在接種過程中，嚴格遵守無菌操作的要求是十分重要的。無菌操作可按照以下步驟進行：

1．實驗前30 min打開接種室和超凈工作臺的紫外線燈，工作時關閉。

2．打開超凈工作臺風機20 min后，方可開始工作。

3．接種人員洗凈雙手，在緩沖室換好工作服，戴上口罩、帽子，并換上拖鞋等。

4．用酒精棉（70%酒精浸泡）擦拭工作臺面。

5．手和小臂用70%酒精擦拭，特別是指甲處要認真擦拭。

6．培養瓶的瓶口在酒精燈上灼燒滅菌。

7．鑷子、解剖刀等用具浸泡在90%或95%酒精中，后在酒精燈上灼燒滅菌，或用組織培養器械專用滅菌器滅菌，放支架上待用。接種過程中反復浸泡、灼燒。

8．接種時，工作人員雙手不能離開工作臺，不能說話、走動、咳嗽等。

9．接種完成后，清理干凈工作臺，可用紫外線燈照射30 min，若連續接種，每5天要高強度滅菌1次。

【思考題】

1．簡要說明植物組織培養實訓室的構成和用途。

2．簡要說明接種室的主要設備、工具及其用途。

3．植物組織培養實訓室設計應遵循哪些原則？

4．植物組織培養常用的滅菌方法有哪些？

5．植物組織培養的無菌操作規程有哪些？