學習活動2 外植體培養基的設計與制備

【學習目標】 1．能根據培養材料搜集信息。

2．能設計外植體培養基配方。

3．能熟練配制培養基。

【學習準備】 網絡資源、培養基母液、天平、量筒、移液管、有刻度的鋼精鍋、高壓鍋、培養瓶、電磁爐、蒸餾水、pH試紙或酸度計、0.1N的NaOH、0.1N的HCl、蔗糖、瓊脂。

【學習過程】

問題

你通過媒體或科技雜志查閱到北海道黃楊組織培養的培養基了嗎？有什么特點？

獲取信息

據報道，北京林業大學李云等研究北海道黃楊組織培養帶芽莖段的啟動培養基為MS+6-BA 2 mg/L+NAA 1 mg/L，分化繼代培養基為MS+6-BA 4 mg/L+NAA 1 mg/L；

東北林業大學劉曉東等研究北海道黃楊組織培養帶芽莖段的啟動培養基為MS+NAA 0.05 mg/L+6-BA 0.5 mg/L，分化繼代培養基為MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1 mg/L。

上述報道中研究都采用MS培養基為基本培養基，且外植體培養獲得成功。但除了基本培養基相同外，添加的生長調節物質有較大的差異，這種差異可能源于生長調節物質來自不同的生產廠家，或外植體取材方面，或外植體培養條件等方面。因此必須對培養基進行必要的設計試驗。

一、外植體培養基配方設計

以北海道黃楊為例，北海道黃楊整個培養過程都選用MS基本培養基，再加入適量的生長調節物質。外植體培養所加的植物激素，只設計細胞分裂素（6-BA）一種。以不加6-BA為對照，濃度分別設計為0.2、0.4、0.5、0.8、1、1.5、2 mg/L，每個配方各20瓶培養基。

二、外植體培養基制備

以北海道黃楊為例，以MS培養基為基本培養基，每個不同6-BA濃度的培養基配方各做1 L培養基，每個配方各分裝20瓶培養基，并按配方在瓶壁上進行標記，用高壓鍋正常滅菌后備用。

三、培養效果分析

試驗結果顯示，6-BA的濃度對外植體的萌發有明顯的影響，在無6-BA的培養基上，北海道黃楊外植體不萌發，隨著6-BA濃度的增高，芽叢數量及苗高逐漸增加，但超過一定量又表現為下降趨勢，因此，適合北海道黃楊外植體的培養基配方為：MS+6-BA 0.5~0.8 mg/L。