學習活動2 培養基母液的配制

【學習目標】 1．理解配制培養基母液的原因。

2．能正確使用電子天平。

3．了解培養基主要成分母液的濃縮倍數。

4．能用容量瓶正確定容各種母液。

【學習準備】 電子天平、稱量紙、玻璃瓶、玻璃棒、藥匙、不同大小的容量瓶、配制培養基母液的各種物質、貯液瓶、冰箱、標簽紙。

【學習過程】

問題1

通過學習培養基配方，我們知道按照培養基配方的要求分別稱取各種物質配制培養基就可以了，為什么還要配制母液？

基本知識

一、培養基母液的配制原理

在植物組織培養中，配制培養基是經常性工作。若每次配制培養基時都按照配方中的成分用量進行稱量，既費時間，又增加了多次稱量的誤差。為了提高效率，一般將常用的基本培養基中的各種成分按原量10~200倍或1000倍稱量，配成濃縮液，這種濃縮液叫作母液。母液貯存在冰箱中。每次配制培養基時，取其總量的1/10、1/200、1/1000，加以稀釋混合，即成培養液。這樣，配制一次母液可以使用多次，既可降低工作強度，又可提高試驗精度。

二、培養基母液配制

現以MS培養基為例，說明培養液中各類物質母液制備的方法。

MS完全培養基的母液有5種：大量元素母液（濃縮20倍）、微量元素母液（濃縮200倍）、鐵鹽母液（濃縮200倍）、除蔗糖之外的有機物質母液（濃縮200倍）、生長調節物質母液。

（一）大量元素母液配制

1．大量元素母液倍數的確定與計算

大量元素母液配制時要分別稱量、分別溶解，按照表3-2-1的順序混合、定容，以防出現沉淀。在具體操作過程中，為了避免各種成分之間發生反應形成沉淀，一般將培養基成分中的KH2PO4、CaCl2·2H2O單獨配制。一般大量元素配成20倍的母液，使用時再稀釋20倍。配制好后倒入磨口試劑瓶中，貼好標簽、作好記錄，常溫保存或放在冰箱中保存。

表3-2-1 MS培養基大量元素母液（配1 L 20倍的母液）

問題2

知道了培養基的配方，又明確了大量元素母液的濃縮倍數，計算得到了1L母液中所含的各種物質的質量。現在需要配制1L母液，那么如何操作呢？

操作實例

2．大量元素母液配制步驟

以配制1L大量元素母液Ⅰ為例。

圖3-2-1大量元素母液配制流程圖

（二）微量元素母液配制

微量元素母液一般濃縮200倍。在配制微量元素母液時，也是分別稱量、分別溶解，混合時可以不按順序隨意加入容量瓶中，再定容，一般不會出現沉淀。配制好后倒入磨口試劑瓶中，貼好標簽、作好記錄，常溫保存或放在冰箱中保存。

表3-2-2 MS培養基微量元素母液（配1 L 200倍的母液）

（三）有機物質母液

一般配制成200倍。按照表3-2-3的用量分別稱取各種有機物，分別溶解后，倒入容量瓶，再用蒸餾水或超純水定容于1L，最后倒入棕色廣口瓶中，貼好標簽、作好記錄，放在冰箱中（4℃）備用。也可將肌醇單獨配制。

表3-2-3 MS培養基有機物質母液（配1 L 200倍的母液）

（四）鐵鹽母液

鐵鹽不易被植物吸收利用，只有螯合物才容易被植物吸收利用，所以鐵鹽必須單獨配制，同時避免與其他無機元素混合而形成沉淀。目前常用的鐵鹽為硫酸亞鐵和乙二胺四乙酸二鈉的螯合物，使用方便，不易產生沉淀。

配制方法：將5.56 g FeSO4·7H2O和7.46 g Na2-EDTA分別用450 mL蒸餾水溶解，適當加熱并不斷攪拌，溶解后，將硫酸亞鐵溶液緩緩倒入乙二胺四乙酸二鈉溶液中，最后定容到1000 mL，倒入棕色廣口瓶中，貼上標簽、作好記錄，放在冰箱中備用。用時每配1000 mL培養基取5 mL。

表3-2-4 MS培養基鐵鹽母液（配1 L 200倍的母液）

（五）生長調節物質母液

生長調節物質的用量極少，通常使用的質量濃度單位是mg/mL。配制母液時，各種生長素和細胞分裂素要單獨配制，不能混合在一起，母液一般配成0.5~1 mg/mL的質量濃度。

1．生長素

生長素一般要先用少量95%酒精或0.1 mol/L的NaOH溶解，然后用蒸餾水或超純水定容，倒入棕色廣口瓶中，貼好標簽、作好記錄，放在冰箱中（4℃）備用。

2．細胞分裂素

細胞分裂素一般要先用0.5~1 mol/L鹽酸或0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，然后加蒸餾水定容，倒入棕色廣口瓶中，貼好標簽、作好記錄，放在冰箱中（4℃）備用。ZT先用少量95%酒精溶解，再用熱蒸餾水定容。

3．赤霉素

赤霉素易溶于水，但溶于水后不穩定，易分解，最好用少量95%酒精配成母液貯存于冰箱備用，使用時再用蒸餾水稀釋到所需的濃度。

瓊脂、蔗糖等用量大的物質，不需要配制母液，使用時直接稱量，隨取隨用。