蛋白質(zhì)含量測定主要用于原液的比活性測定及成品中蛋白含量的確定。常用蛋白含量測定方法有凱氏定氮法、Folin-酚試劑法（Lowry法）、雙縮脲法、紫外吸收法、考馬斯亮藍(lán)法等。其中前三種方法為藥典法定方法。不同方法的測定結(jié)果會出現(xiàn)不同程度偏差。

依據(jù)含氮樣品經(jīng)硫酸消化后，生成硫酸銨，被氫氧化鈉分解釋放氨，后者經(jīng)水蒸氣被蒸餾入硼酸溶液中生成硼酸銨，再用硫酸滴定，依據(jù)硫酸消耗量計(jì)算出供試品的含氮量。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)含氮量通常在16%左右，因此凱氏定氮法測得的含氮量乘上系數(shù)6.25，即為該樣品的蛋白質(zhì)含量。凱氏定氮法操作繁瑣，靈敏度較低（毫克級水平），其結(jié)果也易受非蛋白氮的影響。其計(jì)算公式如下：

式（5-1）中， V _x為供試品消耗酸滴定液的體積，ml； V ₀為空白消耗酸滴定液的體積，ml； C為硫酸滴定液的濃度，mol/L； n為供試品稀釋倍數(shù)； V為供試品溶液的體積，ml；14.01為氮的相對原子質(zhì)量。

蛋白質(zhì)含有兩個以上的肽鍵（-CO-NH-），因此有雙縮脲反應(yīng)，在堿性溶液中可形成銅-蛋白質(zhì)復(fù)合物。Folin反應(yīng)是在雙縮脲反應(yīng)基礎(chǔ)上，加入Folin試劑（磷鉬酸-磷鎢酸），產(chǎn)生藍(lán)色化合物。該化合物在650nm處的吸光度與蛋白質(zhì)含量成正比。以人血白蛋白為標(biāo)準(zhǔn)品，以標(biāo)準(zhǔn)曲線的蛋白質(zhì)濃度對應(yīng)其吸光度，求出直線回歸方程，將供試品的吸光度代入，即可得到蛋白含量。該法可用于微量含量測定，操作簡單、靈敏度高，但易受多種物質(zhì)干擾。

依據(jù)蛋白質(zhì)肽鍵在堿性溶液中可與銅形成紫紅色絡(luò)合物，其顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比。利用標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液作對照，采用紫外-可見分光光度法在540nm處測定供試品的蛋白含量。該法靈敏度較低，所需供試品的蛋白含量在1～10mg范圍。其計(jì)算公式如下：

式（5-2）中， A ₁為供試品溶液的吸光度； A ₂為標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液的吸光度； C為標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液的濃度，mg/ml； n為供試品稀釋倍數(shù)。

依據(jù)蛋白質(zhì)分子中酪氨酸與色氨酸殘基的苯環(huán)含有共軛雙鍵，蛋白質(zhì)具有吸收紫外線的性質(zhì)，吸收高峰在280nm處。在此范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)溶液的光吸收值與其含量成正比關(guān)系，可用作定量測定。該方法簡便、靈敏、快速，樣品可回收且不受低濃度鹽類等物質(zhì)干擾，但準(zhǔn)確性較差。其計(jì)算公式如下：

式（5-3）中， A ₂₈₀為280nm處測定的吸收值； A ₂₆₀為260nm處測定的吸收值； n為供試品稀釋倍數(shù)。

A ₂₈₀/ A ₂₆₀的比值反映蛋白的純度，一般比值在1.8～2.0間時，蛋白純度較高。

依據(jù)蛋白質(zhì)濃度在一定范圍內(nèi)，與考馬斯亮藍(lán)G-250結(jié)合，符合比爾定律。通過測定595nm處光吸收的增加量得到與其結(jié)合的蛋白質(zhì)量。以牛血清白蛋白（BSA）為標(biāo)準(zhǔn)蛋白，以蛋白質(zhì)吸光度為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)蛋白含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。將供試品的吸光度代入即可算出對應(yīng)蛋白質(zhì)含量。該方法簡便、靈敏、快速，只需少量蛋白，干擾因素少；但具有不同純化蛋白間有可變性、蛋白不可逆變性等缺點(diǎn)。