第一部分 樣 品

獸醫診斷樣品采集、保存與運輸技術規范（NY/T 541—2016）

1 范圍

本標準規定了獸醫診斷用樣品的采集、保存與運輸的技術規范和要求，包括采樣基本原則、采樣前準備、樣品采集與處理方法、樣品保存包裝與廢棄物處理、采樣記錄和樣品運輸等。

本標準適用于獸醫診斷、疫情監測、畜禽疫病防控和免疫效果評估及衛生認證等動物疫病實驗室樣品的采集、保存和運輸。

2 規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB 16548病害動物和病害動物產品生物安全處理規程

GB/T 16550—2008 新城疫診斷技術

GB/T 16551—2008 豬瘟診斷技術

GB/T 18935—2003 口蹄疫診斷技術

GB/T 18936—2003 高致病性禽流感診斷技術

NY/T 561—2015動物炭疽診斷技術

中華人民共和國國務院令第424號病原微生物實驗室生物安全管理條例

中華人民共和國農業部公告第302號獸醫實驗室生物安全技術管理規范

中華人民共和國農業部公告第503號高致病性動物病原微生物菌（毒）種或者樣本運輸包裝規范

3 術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

3.1樣品specimen

取自動物或環境，擬通過檢驗反映動物個體、群體或環境有關狀況的材料或物品。

3.2采樣sample

按照規定的程序和要求，從動物或環境取得一定量的樣本，并經過適當的處理，留作待檢樣品的過程。

3.3抽樣單元sampling unit

同一飼養地、同一飼養條件下的畜禽個體或群體。

3.4隨機抽樣random sampling

按照隨機化的原則（總體中每一個觀察單位都有同等的機會被選入到樣本中），從總體中抽取部分觀察單位的過程。

3.5滅菌sterilization

應用物理或化學方法殺滅物體上所有病原微生物、非病原微生物和芽孢的方法。

4 采樣原則

4.1 先排除后采樣

凡發現急性死亡的動物，懷疑患有炭疽時，不得解剖。應先按NY/T 561—2015中2.1.2的規定采集血樣，進行血液抹片鏡檢。確定不是炭疽后，方可解剖采樣。

4.2合理選擇采樣方法

4.2.1應根據采樣的目的、內容和要求合理選擇樣品采集的種類、數量、部位與抽樣方法。樣品數量應滿足流行病學調查和生物統計學的要求。

4.2.2診斷或被動監測時，應選擇癥狀典型或病變明顯或有患病征兆的畜禽、疑似污染物；在無法確定病因時，采樣種類應盡量全面。

4.2.3主動監測時，應根據畜禽日齡、季節、周邊疫情情況估計其流行率，確定抽樣單元。在抽樣單元內，應遵循隨機取樣原則。

4.3采樣時限

采集死亡動物的病料，應于動物死亡后2h內采集。無法完成時，夏天不得超過6h，冬天不得超過24 h。

4.4無菌操作

采樣過程應注意無菌操作，刀、剪、鑷子、器皿、注射器、針頭等采樣用具應事先嚴格滅菌，每種樣品應單獨采集。

4.5盡量減少應激和損害

活體動物采樣時，應避免過度刺激或損害動物，也應避免對采樣者造成危害。

4.6生物安全防護

采樣人員應加強個人防護，嚴格遵守生物安全操作的相關規定，嚴防人畜共患病感染；同時，應做好環境消毒以及動物或組織的無害化處理，避免污染環境，防止疫病傳播。

5 采樣前準備

5.1 采樣人員

采樣人員應熟悉動物防疫的有關法律規定，具有一定的專業技術知識，熟練掌握采樣工作程序和采樣操作技術。采樣前，應做好個人安全防護準備（穿戴手套、口罩、一次性防護服、鞋套等，必要時戴護目鏡或面罩）。

5.2采樣工具和器械

5.2.1應根據所采集樣品種類和數量的需要，選擇不同的采樣工具、器械及容器等，并進行適量包裝。

5.2.2取樣工具和盛樣器具應潔凈、干燥，且應做滅菌處理：

a）刀、剪、鑷子、穿刺針等用具應經高壓蒸汽（103.43 kPa）或煮沸滅菌30 min，臨用時用75%酒精擦拭或進行火焰滅菌處理；

b）器皿（玻璃制、陶制等）應經高壓蒸汽（103.43 kPa）30 min或經160℃干烤2h滅菌；或置于1%～2%碳酸氫鈉水溶液中煮沸10 min～15 min后，再用無菌紗布擦干，無菌保存備用；

c）注射器和針頭應放于清潔水中煮沸30 min，無菌保存備用，也可使用一次性針頭和注射器。

5.3保存液

應根據所采樣品的種類和要求，準備不同類型并分裝成適量的保存液，如PBS緩沖液、30%甘油磷酸鹽緩沖液、滅菌肉湯（pH 7.2～7.4）和運輸培養基等。

6 樣品采集與處理

6.1血樣

6.1.1 采血部位

6.1.1.1 應根據動物種類確定采血部位。對大型哺乳動物，可選擇頸靜脈、耳靜脈或尾靜脈采血，也可用肱靜脈或乳房靜脈；毛皮動物，少量采血可穿刺耳尖或耳殼外側靜脈，多量采血可在隱靜脈采集，也可用尖刀劃破趾墊0.5 cm深或剪斷尾尖部采血；嚙齒類動物，可從尾尖采血，也可由眼窩內的血管叢采血。

6.1.1.2豬可前腔靜脈或耳靜脈采血；羊常采用頸靜脈或前后肢皮下靜脈采血；犬可選擇前肢隱靜脈或頸靜脈采集；兔可從耳背靜脈、頸靜脈或心臟采血；禽類通常選擇翅靜脈采血，也可心臟采血。

6.1.2采血方法

應對動物采血部位的皮膚先剃毛（拔毛），用1%～2%碘酊消毒后，再用75%的酒精棉球由內向外螺旋式脫碘消毒，干燥后穿刺采血。采血可用采血器或真空采血管（不適合小靜脈，適用于大靜脈）。少量的血可用三棱針穿刺采集，將血液滴到開口的試管內。

6.1.2.1豬耳緣靜脈采血

按壓使豬耳靜脈血管怒張，采樣針頭斜面朝上、呈15°角沿耳緣靜脈由遠心端向近心端刺入血管，見有血液回流后放松按壓，緩慢抽取血液或接入真空采血管。

6.1.2.2豬前腔靜脈采血

6.1.2.2.1 站立保定采血

將豬的頭頸向斜上方拉至與水平面呈30°以上角度，偏向一側。選擇頸部最低凹處，使針頭偏向氣管約15°方向進針，見有血液回流時，即把針芯向外拉使血液流入采血器或接入真空采血管。

6.1.2.2.2仰臥保定采血

將豬前肢向后方拉直，針頭穿刺部位在胸骨端與耳基部連線上胸骨端旁2 cm的凹陷處，向后內方與地面呈60°角刺入2 cm～3 cm，見有血液回流時，即把針芯向外拉使血液流入采血器或接入真空采血管。

6.1.2.3牛尾靜脈采血

將牛尾上提，在離尾根10 cm左右中點凹陷處，將采血器針頭垂直刺入約1 cm，見有血液回流時，即可把針芯向外拉使血液流入采血器或接入真空采血管。

6.1.2.4牛、羊、馬頸靜脈采血

在采血部位下方壓迫頸靜脈血管，使之怒張，針頭與皮膚呈45°角由下向上方刺入血管，見有血液回流時，即可把針芯向外拉使血液流入采血器或接入真空采血管。

6.1.2.5禽翅靜脈采血

壓迫翅靜脈近心端，使血管怒張，針頭平行刺入靜脈，放松對近心端的按壓，緩慢抽取血液；或用針頭刺破消毒過的翅靜脈，將血液滴到直徑為3 mm～4 mm的塑料管內，將一端封口。

6.1.2.6禽心臟采血

6.1.2.6.1 雛禽心臟采血

針頭平行頸椎從胸腔前口插入，見有血液回流時，即把針芯向外拉使血液流入采血器。

6.1.2.6.2成年禽心臟采血

右側臥保定時，在觸及心搏動明顯處，或胸骨脊前端至背部下凹處連線的1/2處，垂直或稍向前方刺入2 cm～3 cm，見有血液回流即可采集。

仰臥保定時，胸骨朝上，壓迫嗉囊，露出胸前口，將針頭沿其鎖骨俯角刺入，順著體中線方向水平刺入心臟，見有血液回流即可采集。

6.1.2.7犬貓前臂頭靜脈采血

壓迫犬貓肘部使前臂頭靜脈怒張，繃緊頭靜脈兩側皮膚，采樣針頭斜面朝上、呈15°角由遠心端向近心端刺入靜脈血管，見有血液回流時，緩慢抽取血液或接入真空采血管。

6.1.3血樣的處理

6.1.3.1全血樣品

樣品容器中應加0.1%肝素鈉、阿氏液（見A.1，2份阿氏液可抗1份血液）、3.8%～4.0%枸櫞酸鈉（0.1 mL可抗1 mL血液）或乙二胺四乙酸（EDTA，PCR檢測血樣的首選抗凝劑）等抗凝劑，采血后充分混合。

6.1.3.2脫纖血樣品

應將血液置入裝有玻璃珠的容器內，反復振蕩，注意防止紅細胞破裂。待纖維蛋白凝固后，即可制成脫纖血樣品，封存后以冷藏狀態立即送至實驗室。

6.1.3.3血清樣品

應將血樣室溫下傾斜30°靜置2 h～4 h，待血液凝固有血清析出時，無菌剝離血凝塊，然后置4℃冰箱過夜，待大部分血清析出后即可取出血清，必要時可低速離心（1000 g離心10 min～15 min）分離出血清。在不影響檢驗要求原則下，可以根據需要加入適宜的防腐劑。做病毒中和試驗的血清和抗體檢測的血清均應避免使用化學防腐劑（如疊氮鈉、硼酸、硫柳汞等）。若需長時間保存，應將血清置-20℃以下保存，且應避免反復凍融。

采集雙份血清用于比較抗體效價變化的，第一份血清采于疫病初期并做冷凍保存，第二份血清采于第一份血清后3周～4周，雙份血清同時送至實驗室。

6.1.3.4血漿樣品

應在樣品容器內先加入抗凝劑（見6.1.3.1），采血后充分混合，然后靜置，待紅細胞自然下沉或離心沉淀后，取上層液體即為血漿。

6.2 一般組織樣品

應使用常規解剖器械剝離動物的皮膚。體腔應用消毒器械剝開，所需病料應按無菌操作方法從新鮮尸體中采集。剖開腹腔時，應注意不要損壞腸道。

6.2.1 病原分離樣品

6.2.1.1所采組織樣品應新鮮，應盡可能地減少污染，且應避免其接觸消毒劑、抗菌、抗病毒等藥物。

6.2.1.2應用無菌器械切取做病原（細菌、病毒、寄生蟲等）分離用組織塊，每個組織塊應單獨置于無菌容器內或接種于適宜的培養基上，且應注明動物和組織名稱以及采樣日期等。

6.2.2 組織病理學檢查樣品

6.2.2.1樣品應保證新鮮。處死或病死動物應立刻采樣，應選典型、明顯的病變部位。采集包括病灶及臨近正常組織的組織塊，立即放入不低于10倍于組織塊體積的10%中性緩沖福爾馬林溶液（見A.2）中固定，固定時間一般為～16 h24 h。切取的組織塊大小一般厚度不超過0.5 cm，長寬不超過1.5 cm×1.5 cm，固定3 h～4 h后進行修塊，修切為厚度0.2 cm、長寬1 cm×1 cm大?。z查狂犬病則需要較大的組織塊）后，更換新的固定液繼續固定。組織塊切忌擠壓、刮摸和用水洗。如做冷凍切片用，則應將組織塊放在0℃～4℃容器中，送往實驗室檢驗。

6.2.2.2對于一些可疑疾病，如檢查癢病、牛海綿狀腦病或其他傳染性海綿狀腦?。?TSEs）時，需要大量的腦組織。采樣時，應將腦組織縱向切割，一半新鮮加冰呈送，另一半加10%中性緩沖福爾馬林溶液固定。

6.2.2.3福爾馬林固定組織應與新鮮組織、血液和涂片分開包裝。福爾馬林固定組織不能冷凍，固定后可以棄去固定液，應保持組織濕潤，送往實驗室。

6.3豬扁桃體樣品

打開豬口腔，將采樣槍的采樣鉤緊靠扁桃體，扣動扳機取出扁桃體組織。

6.4豬鼻腔拭子和家禽咽喉拭子樣品

取無菌棉簽，插入豬鼻腔2 cm～3 cm或家禽口腔至咽的后部直達喉氣管，輕輕擦拭并慢慢旋轉2圈～3圈，沾取鼻腔分泌物或氣管分泌物取出后，立即將拭子浸入保存液或半固體培養基中，密封低溫保存。常用的保存液有pH 7.2～7.4的滅菌肉湯（見A.3）或30%甘油磷酸鹽緩沖液（見A.4）或PBS緩沖液（見A.5），如準備將待檢標本接種組織培養，則保存于含0. 5%乳蛋白水解物的Hank's液（見A.6）中。一般每支拭子需保存5 mL。

6.5牛、羊食道—咽部分泌物（O-P液）樣品

被檢動物在采樣前禁食（可飲水）12 h，以免反芻胃內容物嚴重污染O-P液。采樣用的特制探杯（probang cup）在使用前經0.2%檸檬酸或2%氫氧化鈉浸泡，再用自來水沖洗。每采完一頭動物，探杯都要重復進行消毒和清洗。采樣時動物站立保定，操作者左手打開動物口腔，右手握探杯，隨吞咽動作將探杯送入食道上部10 cm～15 cm，輕輕來回移動2次～3次，然后將探杯拉出。如采集的O-P液被反芻內容物嚴重污染，要用生理鹽水或自來水沖洗口腔后重新采樣。在采樣現場將采集到的8 mL～10mL O-P液倒入盛有8 mL～10 mL細胞培養維持液或0.04 mol/L PBS（pH 7.4）的滅菌容器中，充分混勻后置于裝有冰袋的冷藏箱內，送往實驗室或轉往-60℃冰箱保存。

6.6胃液及瘤胃內容物樣品

6.6.1 胃液樣品

胃液可用多孔的胃管抽取。將胃管送入胃內，其外露端接在吸引器的負壓瓶上，加負壓后，胃液即可自動流出。

6.6.2瘤胃內容物樣品

反芻動物在反芻時，當食團從食道逆入口腔時．立即開口拉住舌頭，伸入口腔即可取出少量的瘤胃內容物。

6.7腸道組織、腸內容物樣品

6.7.1腸道組織樣品

應選擇病變最明顯的腸道部分，棄去內容物并用滅菌生理鹽水沖洗，無菌截取腸道組織，置于滅菌容器或塑料袋送檢。

6.7.2腸內容物樣品

取腸內容物時，應燒烙腸壁表面，用吸管扎穿腸壁，從腸腔內吸取內容物放入盛有滅菌的30%甘油磷酸鹽緩沖液（見A．4）或半固體培養基中送檢，或將帶有糞便的腸管兩端結扎，從兩端剪斷送檢。

6.8 糞便和肛拭子樣品

6.8.1 糞便樣品

應選新鮮糞便至少10 g，做寄生蟲檢查的糞便應裝入容器，在24 h內送達實驗室。如運輸時間超過24 h則應進行冷凍，以防寄生蟲蟲卵孵化。運送糞便樣品可用帶螺帽容器或滅菌塑料袋，不得使用帶皮塞的試管。

6.8.2肛拭子樣品

采集肛拭子樣品時，取無菌棉拭子插入畜禽肛門或泄殖腔中，旋轉2圈～3圈，刮取直腸黏液或糞便，放入裝有30%甘油磷酸鹽緩沖液（見A．4）或半固體培養基中送檢。糞便樣品通常在4℃下保存和運輸。

6.9皮膚組織及其附屬物樣品

對于產生水皰病變或其他皮膚病變的疾病，應直接從病變部位采集病變皮膚的碎屑、未破裂水皰的水皰液、水皰皮等作為樣品。

6.9.1 皮膚組織樣品

無菌采取2g感染的上皮組織或水皰皮置于5 mL 30%甘油磷酸鹽緩沖液（見A.4）中送檢。

6.9.2毛發或絨毛樣品

拔取毛發或絨毛樣品，可用于檢查體表的螨蟲、跳蚤和真菌感染。用解剖刀片邊緣刮取的表層皮屑用于檢查皮膚真菌，深層皮屑（刮至輕微出血）可用于檢查疥螨。對于禽類，當懷疑為馬立克氏病時，可采集羽毛根進行病毒抗原檢測。

6.9.3水皰液樣品

水皰液應取自未破裂的水皰?？捎脺缇⑸淦骰蚱渌骶呶∷捯?，置于滅菌容器中送檢。

6.10生殖道分泌物和精液樣品

6.10.1 生殖道沖洗樣品

采集陰道或包皮沖洗液。將消毒好的特制吸管插入子宮頸口或陰道內，向內注射少量營養液或生理鹽水，用吸球反復抽吸幾次后吸出液體，注入培養液中。用軟膠管插入公畜的包皮內，向內注射少量的營養液或生理鹽水，多次揉搓，使液體充分沖洗包皮內壁，收集沖洗液注入無菌容器中。

6.10.2生殖道拭子樣品

采用合適的拭子采取陰道或包皮內分泌物，有時也可采集宮頸或尿道拭子。

6.10.3精液樣品

精液樣品最好用假陰道擠壓陰莖或人工刺激的方法采集。精液樣品精子含量要多，不要加入防腐劑，且應避免抗菌沖洗液污染。

6.11腦、脊髓類樣品

應將采集的腦、脊髓樣品浸入30%甘油磷酸鹽緩沖液（見A.4）中或將整個頭部割下，置于適宜容器內送檢。

6.11.1 牛、羊腦組織樣品

從延腦腹側將采樣勺插入枕骨大孔中5 cm～7 cm（采羊腦時插入深度約為4 cm），將勺子手柄向上扳，同時往外取出延腦組織。

6.11.2犬腦組織樣品

取內徑0.5 cm的塑料吸管，沿枕骨大孔向一只眼的方向插入，邊插邊輕輕旋轉至不能深入為止，捏緊吸管后端并拔出，將含腦組織部分的吸管用剪刀剪下。

6.11.3腦脊液樣品

6.11.3.1頸椎穿刺法

穿刺點為環樞孔。動物實施站立保定或橫臥保定，使其頭部向前下方屈曲，術部經剪毛消毒，穿刺針與皮膚面呈垂直緩慢刺入。將針體刺入蛛網膜下腔，立即拔出針芯，腦脊液自動流出或點滴狀流出，盛入消毒容器內。大型動物頸部穿刺一次采集量為35 mL～70 mL。6.11.3.2腰椎穿刺法

穿刺部位為腰薦孔。動物實施站立保定，術部剪毛消毒后，用專用的穿刺針刺入，當刺入蛛網膜下腔時，且口有脊髓液滴狀滴出或用消毒注射器抽取，盛入消毒容器內。腰椎穿刺一次采集量為1 mL～30 mL。

6.12 眼部組織和分泌物樣品

眼結膜表面用拭子輕輕擦拭后，置于滅菌的30%甘油磷酸鹽緩沖液（見A.4，病毒檢測加雙抗）或運輸培養基中送檢。

6.13胚胎和胎兒樣品

選取無腐敗的胚胎、胎兒或胎兒的實質器官，裝入適宜容器內立即送檢。如果在24 h內不能將樣品送達實驗室，應冷凍運送。

6.14小家畜及家禽樣品

將整個尸體包入不透水塑料薄膜、油紙或油布中，裝入結實、不透水和防泄漏的容器內，送往實驗室。

6.15骨骼樣品

需要完整的骨標本時，應將附著的肌肉和韌帶等全部除去，表面撒上食鹽，然后包入浸過5%石炭酸溶液的紗布中，裝入不漏水的容器內送往實驗室。

6.16液體病料樣品

采集膽汁、膿、黏液或關節液等樣品時，應采用燙烙法消毒采樣部位，用滅菌吸管、毛細吸管或注射器經燙烙部位插入，吸取內部液體病料，然后將病料注入滅菌的試管中，塞好棉塞送檢。也可用接種環經消毒的部位插入，提取病料直接接種在培養基上。

供顯微鏡檢查的膿、血液及黏液抹片的制備方法：先將材料置玻片上，再用一滅菌玻棒均勻涂抹或另用一玻片推抹。用組織塊做觸片時，持小鑷子將組織塊的游離面在玻片上輕輕涂抹即可。

6.17乳汁樣品

乳房應先用消毒藥水洗凈，并把乳房附近的毛刷濕，最初所擠3把～4把乳汁棄去，然后再采集10 mL左右乳汁于滅菌試管中。進行血清學檢驗的乳汁不應凍結、加熱或強烈震動。

6.18尿液樣品

在動物排尿時，用潔凈的容器直接接取；也可使用塑料袋，固定在雌畜外陰部或雄畜的陰莖下接取尿液。采取尿液，宜早晨進行。

6.19鼻液（唾液）樣品

可用棉花或棉紗拭子采取。采樣前，最好用運輸培養基浸泡拭子。拭子先與分泌物接觸1 min，然后置入該運輸培養基，在4℃條件下立即送往實驗室。應用長柄、防護式鼻咽拭子采集某些疑似病毒感染的樣品。

6.20環境和飼料樣品

環境樣品通常采集垃圾、墊草或排泄的糞便或尿液。可用拭子在通風道、飼料槽和下水處采樣。這種采樣在有特殊設備的孵化場、人工授精中心和屠宰場尤其重要。樣品也可在食槽或大容器的動物飼料中采集。水樣樣品可從飼槽、飲水器、水箱或天然及人工供應水源中采集。

6.21 其他

對于重大動物疫病如新城疫、口蹄疫、禽流感、豬瘟和高致病性豬藍耳病，樣品采集應按照GB/T 16550—2008中4.1.1、GB/T 18935—2003中附錄A、GB/T 18936—2003中2.1.1、GB/T 16551—2008中3.2.1和3.4.1的規定執行。

7 樣品保存、包裝與廢棄物處理

7.1樣品保存

7.1.1 采集的樣品在無法于12 h內送檢的情況下，應根據不同的檢驗要求，將樣品按所需溫度分類保存于冰箱、冰柜中。

7.1.2血清應放于-20℃凍存，全血應放于4℃冰箱中保存。

7.1.3供細菌檢驗的樣品應于4℃保存，或用滅菌后濃度為30%～50%的甘油生理鹽水4℃保存。

7.1.4供病毒檢驗的樣品應在0℃以下低溫保存，也可用滅菌后濃度為30%～50%的滅菌甘油生理鹽水0℃以下低溫保存。長時間-20℃凍存不利于病毒分離。

7.2樣品包裝

7.2.1每個組織樣品應仔細分別包裝，在樣品袋或平皿外貼上標簽，標簽注明樣品名、樣品編號和采樣日期等，再將各個樣品放到塑料包裝袋中。

7.2.2拭子樣品的小塑料離心管應放在規定離心管塑料盒內。

7.2.3 血清樣品裝于小瓶時應用鋁盒盛放，盒內加填塞物避免小瓶晃動。若裝于小塑料離心管中，則應置于離心管塑料盒內。

7.2.4包裝袋外、塑料盒及鋁盒應貼封條，封條上應有采樣人的簽章，并應注明貼封日期，標注放置方向。

7.2.5重大動物疫病采樣，如高致病性禽流感、口蹄疫、豬瘟、高致病性藍耳病、新城疫等應按照中華人民共和國農業部公告第503號的規定執行。

7.3廢棄物處理

7.3.1無法達到檢測要求的樣品做無害化處理，應按照GB 16548、中華人民共和國國務院令第424號和中華人民共和國農業部公告第302號的規定執行。

7.3.2采過病料用完后的器械，如一次性器械應進行生物安全無害化處理；可重復使用的器械應先消毒后清洗，檢查過疑似牛、羊海綿狀腦病的器械應放在2 mol/L的氫氧化鈉溶液中浸泡2h以上，才可再次使用。

8 采樣記錄

8.1 采樣時，應清晰標識每份樣品，同時在采樣記錄表上填寫采樣的相關信息。

8.2應記錄疫病發生的地點（如可能，記錄所處的經度和緯度）、畜禽場的地址和畜主的姓名、地址、電話及傳真。

8.3應記錄采樣者的姓名、通信地址、郵編、E-mail地址、電話及傳真。

8.4應記錄畜（禽）場里飼養的動物品種及其數量。

8.5應記錄疑似病種及檢測要求。

8.6應記錄采樣動物畜種、品種、年齡和性別及標識號。

8.7應記錄首發病例和繼發病例的日期及造成的損失。

8.8應記錄感染動物在畜群中的分布情況。

8.9應記錄農場的存欄數、死亡動物數、出現臨床癥狀的動物數量及其日齡。

8. 10應記錄臨床癥狀及其持續時間，包括口腔、眼睛和腿部情況，產奶或產蛋的記錄，死亡時間等。

8.11 應記錄受檢動物清單、說明及尸檢發現。

8.12應記錄飼養類型和標準，包括飼料種類。

8.13應記錄送檢樣品清單和說明，包括病料的種類、保存方法等。

8.14應記錄動物的免疫和用藥情況。

8.15應記錄采樣及送檢日期。

9 樣品運輸

9.1 應以最快最直接的途徑將所采集的樣品送往實驗室。

9.2對于可在采集后24 h內送達實驗室的樣品，可放在4℃左右的容器中冷藏運輸；對于不能在24 h內送達實驗室但不影響檢驗結果的樣品，應以冷凍狀態運送。

9.3運輸過程中應避免樣品泄漏。

9.4制成的涂片、觸片、玻片上應注明編號。玻片應放入專門的病理切片盒中，在保證不被壓碎的條件下運送。

9.5所有運輸包裝均應貼上詳細標簽，并做好記錄。

9.6運送高致病性病原微生物樣品，應按照中華人民共和國國務院令第424號的規定執行。

附 錄 A

（規范性附錄）

樣品保存液的配制

A.1 阿（Alsever）氏液

葡萄糖 2.05 g

檸檬酸鈉（Na3C6H5O7·2H2O） 0.80 g

氯化鈉（NaCl） 0.42 g

蒸餾水（或無離子水）加至100 mL

調配方法：溶解后，以10%檸檬酸調至pH為6.1分裝后，70 kPa、10 min滅菌，冷卻后4℃保存備用。

A.2 10%中性緩沖福爾馬林溶液（pH 7.2～7.4）

A.2.1 配方1：

37%～40%甲醛 100 mL

磷酸氫二鈉（Na2 HPO4） 6.5 g

一水磷酸二氫鈉（NaH2PO4·H2O） 4.0 g

蒸餾水 900 mL

調配方法：加蒸餾水約800 mL，充分攪拌，溶解無水磷酸氫二鈉6.5 g和一水磷酸二氫鈉4.0 g，將溶解液加入到100 mL 37%～40%的甲醛溶液中，定容到1L。

A.2.2 配方2：

37%～40%甲醛 100 mL

0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液 900 mL

調配方法：首先稱取8g NaCl、0.2 g KC1、1.44 g Na2HPO4和0.24 g KH2PO4，溶于800 mL蒸餾水中。用HCl調節溶液的pH至7.4，最后加蒸餾水定容至1 L，即為0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液（PBS，pH 7.4）。然后，量取900 mL 0.01 mol/L PBS加入到100 mL 37%～40%的甲醛溶液中。

A.3 肉湯（broth）

牛肉膏 3.50 g

蛋白胨 10.00 g

氯化鈉（NaCl） 5.00 g

調配方法：充分混合后，加熱溶解，校正pH為7.2～7.4。再用流通蒸汽加熱3 min，用濾紙過濾，獲黃色透明液體，分裝于試管或燒瓶中，以100 kPa、20 min滅菌。保存于冰箱中備用。

A.4 30%甘油磷酸鹽緩沖液（pH 7.6）

甘油 30.00 mL

氯化鈉（NaCl） 4.20 g

磷酸二氫鉀（KH2PO4） 1.00 g

磷酸氫二鉀（K2HPO4） 3.10 g

0.02%酚紅 1.50 m

蒸餾水 加至100 mL

調配方法：加熱溶化，校正pH為7.6，100 kPa、15 min滅菌，冰箱保存備用。

A.5 0.01 mol/L PBS緩沖液（pH 7.4）

磷酸二氫鉀（KH2PO4） 0.27 g

磷酸氫二鈉（Na2HPO4）/12水磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O） 1.42 g/3.58 g

氯化鈉（NaCl） 8.00 g

氯化鉀（KCl） 0.20 g

調配方法：加去離子水約800 mL，充分攪拌溶解。然后，用HCl溶液或NaOH溶液校正pH為7.4，最后定容到1L。高溫高壓滅菌后室溫保存。

A.6 0.5%乳蛋白水解物的Hank's液

甲液：

氯化鈉（NaCl） 8.0 g

氯化鉀（KCl） 0.4 g

7水硫酸鎂（MgSO4·7H2O） 0.2 g

氯化鈣（CaCl2）/2水氯化鈣（CaCl2·2H2O） 0.14 g/0. 185 g

置入50 mL的容量瓶中，加40 mL三蒸水充分攪拌溶解，最后定容至50 mL。

乙液：

磷酸氫二鈉（Na2HPO4）/12水磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O） 0.06 g/1.52 g

磷酸二氫鉀（KH2PO4） 0.06 g

葡萄糖 1.0 g

置入50 mL的容量瓶中，加40 mL三蒸水充分攪拌溶解后，再加0.4%酚紅5mL，混勻，最后定容至50 mL。

調配方法：取甲液25 mL、乙液25 mL和水解乳蛋白0.5 g，充分混勻，最后加三蒸水定容至500 mL，高壓滅菌后4℃保存備用。