第一部分 樣 品

獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運輸技術(shù)規(guī)范（NY/T 541—2016）

1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了獸醫(yī)診斷用樣品的采集、保存與運輸?shù)募夹g(shù)規(guī)范和要求，包括采樣基本原則、采樣前準(zhǔn)備、樣品采集與處理方法、樣品保存包裝與廢棄物處理、采樣記錄和樣品運輸?shù)取?/p>

本標(biāo)準(zhǔn)適用于獸醫(yī)診斷、疫情監(jiān)測、畜禽疫病防控和免疫效果評估及衛(wèi)生認(rèn)證等動物疫病實驗室樣品的采集、保存和運輸。

2 規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB 16548病害動物和病害動物產(chǎn)品生物安全處理規(guī)程

GB/T 16550—2008 新城疫診斷技術(shù)

GB/T 16551—2008 豬瘟診斷技術(shù)

GB/T 18935—2003 口蹄疫診斷技術(shù)

GB/T 18936—2003 高致病性禽流感診斷技術(shù)

NY/T 561—2015動物炭疽診斷技術(shù)

中華人民共和國國務(wù)院令第424號病原微生物實驗室生物安全管理條例

中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第302號獸醫(yī)實驗室生物安全技術(shù)管理規(guī)范

中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第503號高致病性動物病原微生物菌（毒）種或者樣本運輸包裝規(guī)范

3 術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1樣品specimen

取自動物或環(huán)境，擬通過檢驗反映動物個體、群體或環(huán)境有關(guān)狀況的材料或物品。

3.2采樣sample

按照規(guī)定的程序和要求，從動物或環(huán)境取得一定量的樣本，并經(jīng)過適當(dāng)?shù)奶幚?，留作待檢樣品的過程。

3.3抽樣單元sampling unit

同一飼養(yǎng)地、同一飼養(yǎng)條件下的畜禽個體或群體。

3.4隨機抽樣random sampling

按照隨機化的原則（總體中每一個觀察單位都有同等的機會被選入到樣本中），從總體中抽取部分觀察單位的過程。

3.5滅菌sterilization

應(yīng)用物理或化學(xué)方法殺滅物體上所有病原微生物、非病原微生物和芽孢的方法。

4 采樣原則

4.1 先排除后采樣

凡發(fā)現(xiàn)急性死亡的動物，懷疑患有炭疽時，不得解剖。應(yīng)先按NY/T 561—2015中2.1.2的規(guī)定采集血樣，進(jìn)行血液抹片鏡檢。確定不是炭疽后，方可解剖采樣。

4.2合理選擇采樣方法

4.2.1應(yīng)根據(jù)采樣的目的、內(nèi)容和要求合理選擇樣品采集的種類、數(shù)量、部位與抽樣方法。樣品數(shù)量應(yīng)滿足流行病學(xué)調(diào)查和生物統(tǒng)計學(xué)的要求。

4.2.2診斷或被動監(jiān)測時，應(yīng)選擇癥狀典型或病變明顯或有患病征兆的畜禽、疑似污染物；在無法確定病因時，采樣種類應(yīng)盡量全面。

4.2.3主動監(jiān)測時，應(yīng)根據(jù)畜禽日齡、季節(jié)、周邊疫情情況估計其流行率，確定抽樣單元。在抽樣單元內(nèi)，應(yīng)遵循隨機取樣原則。

4.3采樣時限

采集死亡動物的病料，應(yīng)于動物死亡后2h內(nèi)采集。無法完成時，夏天不得超過6h，冬天不得超過24 h。

4.4無菌操作

采樣過程應(yīng)注意無菌操作，刀、剪、鑷子、器皿、注射器、針頭等采樣用具應(yīng)事先嚴(yán)格滅菌，每種樣品應(yīng)單獨采集。

4.5盡量減少應(yīng)激和損害

活體動物采樣時，應(yīng)避免過度刺激或損害動物，也應(yīng)避免對采樣者造成危害。

4.6生物安全防護(hù)

采樣人員應(yīng)加強個人防護(hù)，嚴(yán)格遵守生物安全操作的相關(guān)規(guī)定，嚴(yán)防人畜共患病感染；同時，應(yīng)做好環(huán)境消毒以及動物或組織的無害化處理，避免污染環(huán)境，防止疫病傳播。

5 采樣前準(zhǔn)備

5.1 采樣人員

采樣人員應(yīng)熟悉動物防疫的有關(guān)法律規(guī)定，具有一定的專業(yè)技術(shù)知識，熟練掌握采樣工作程序和采樣操作技術(shù)。采樣前，應(yīng)做好個人安全防護(hù)準(zhǔn)備（穿戴手套、口罩、一次性防護(hù)服、鞋套等，必要時戴護(hù)目鏡或面罩）。

5.2采樣工具和器械

5.2.1應(yīng)根據(jù)所采集樣品種類和數(shù)量的需要，選擇不同的采樣工具、器械及容器等，并進(jìn)行適量包裝。

5.2.2取樣工具和盛樣器具應(yīng)潔凈、干燥，且應(yīng)做滅菌處理：

a）刀、剪、鑷子、穿刺針等用具應(yīng)經(jīng)高壓蒸汽（103.43 kPa）或煮沸滅菌30 min，臨用時用75%酒精擦拭或進(jìn)行火焰滅菌處理；

b）器皿（玻璃制、陶制等）應(yīng)經(jīng)高壓蒸汽（103.43 kPa）30 min或經(jīng)160℃干烤2h滅菌；或置于1%～2%碳酸氫鈉水溶液中煮沸10 min～15 min后，再用無菌紗布擦干，無菌保存?zhèn)溆茫?/p>

c）注射器和針頭應(yīng)放于清潔水中煮沸30 min，無菌保存?zhèn)溆?，也可使用一次性針頭和注射器。

5.3保存液

應(yīng)根據(jù)所采樣品的種類和要求，準(zhǔn)備不同類型并分裝成適量的保存液，如PBS緩沖液、30%甘油磷酸鹽緩沖液、滅菌肉湯（pH 7.2～7.4）和運輸培養(yǎng)基等。

6 樣品采集與處理

6.1血樣

6.1.1 采血部位

6.1.1.1 應(yīng)根據(jù)動物種類確定采血部位。對大型哺乳動物，可選擇頸靜脈、耳靜脈或尾靜脈采血，也可用肱靜脈或乳房靜脈；毛皮動物，少量采血可穿刺耳尖或耳殼外側(cè)靜脈，多量采血可在隱靜脈采集，也可用尖刀劃破趾墊0.5 cm深或剪斷尾尖部采血；嚙齒類動物，可從尾尖采血，也可由眼窩內(nèi)的血管叢采血。

6.1.1.2豬可前腔靜脈或耳靜脈采血；羊常采用頸靜脈或前后肢皮下靜脈采血；犬可選擇前肢隱靜脈或頸靜脈采集；兔可從耳背靜脈、頸靜脈或心臟采血；禽類通常選擇翅靜脈采血，也可心臟采血。

6.1.2采血方法

應(yīng)對動物采血部位的皮膚先剃毛（拔毛），用1%～2%碘酊消毒后，再用75%的酒精棉球由內(nèi)向外螺旋式脫碘消毒，干燥后穿刺采血。采血可用采血器或真空采血管（不適合小靜脈，適用于大靜脈）。少量的血可用三棱針穿刺采集，將血液滴到開口的試管內(nèi)。

6.1.2.1豬耳緣靜脈采血

按壓使豬耳靜脈血管怒張，采樣針頭斜面朝上、呈15°角沿耳緣靜脈由遠(yuǎn)心端向近心端刺入血管，見有血液回流后放松按壓，緩慢抽取血液或接入真空采血管。

6.1.2.2豬前腔靜脈采血

6.1.2.2.1 站立保定采血

將豬的頭頸向斜上方拉至與水平面呈30°以上角度，偏向一側(cè)。選擇頸部最低凹處，使針頭偏向氣管約15°方向進(jìn)針，見有血液回流時，即把針芯向外拉使血液流入采血器或接入真空采血管。

6.1.2.2.2仰臥保定采血

將豬前肢向后方拉直，針頭穿刺部位在胸骨端與耳基部連線上胸骨端旁2 cm的凹陷處，向后內(nèi)方與地面呈60°角刺入2 cm～3 cm，見有血液回流時，即把針芯向外拉使血液流入采血器或接入真空采血管。

6.1.2.3牛尾靜脈采血

將牛尾上提，在離尾根10 cm左右中點凹陷處，將采血器針頭垂直刺入約1 cm，見有血液回流時，即可把針芯向外拉使血液流入采血器或接入真空采血管。

6.1.2.4牛、羊、馬頸靜脈采血

在采血部位下方壓迫頸靜脈血管，使之怒張，針頭與皮膚呈45°角由下向上方刺入血管，見有血液回流時，即可把針芯向外拉使血液流入采血器或接入真空采血管。

6.1.2.5禽翅靜脈采血

壓迫翅靜脈近心端，使血管怒張，針頭平行刺入靜脈，放松對近心端的按壓，緩慢抽取血液；或用針頭刺破消毒過的翅靜脈，將血液滴到直徑為3 mm～4 mm的塑料管內(nèi)，將一端封口。

6.1.2.6禽心臟采血

6.1.2.6.1 雛禽心臟采血

針頭平行頸椎從胸腔前口插入，見有血液回流時，即把針芯向外拉使血液流入采血器。

6.1.2.6.2成年禽心臟采血

右側(cè)臥保定時，在觸及心搏動明顯處，或胸骨脊前端至背部下凹處連線的1/2處，垂直或稍向前方刺入2 cm～3 cm，見有血液回流即可采集。

仰臥保定時，胸骨朝上，壓迫嗉囊，露出胸前口，將針頭沿其鎖骨俯角刺入，順著體中線方向水平刺入心臟，見有血液回流即可采集。

6.1.2.7犬貓前臂頭靜脈采血

壓迫犬貓肘部使前臂頭靜脈怒張，繃緊頭靜脈兩側(cè)皮膚，采樣針頭斜面朝上、呈15°角由遠(yuǎn)心端向近心端刺入靜脈血管，見有血液回流時，緩慢抽取血液或接入真空采血管。

6.1.3血樣的處理

6.1.3.1全血樣品

樣品容器中應(yīng)加0.1%肝素鈉、阿氏液（見A.1，2份阿氏液可抗1份血液）、3.8%～4.0%枸櫞酸鈉（0.1 mL可抗1 mL血液）或乙二胺四乙酸（EDTA，PCR檢測血樣的首選抗凝劑）等抗凝劑，采血后充分混合。

6.1.3.2脫纖血樣品

應(yīng)將血液置入裝有玻璃珠的容器內(nèi)，反復(fù)振蕩，注意防止紅細(xì)胞破裂。待纖維蛋白凝固后，即可制成脫纖血樣品，封存后以冷藏狀態(tài)立即送至實驗室。

6.1.3.3血清樣品

應(yīng)將血樣室溫下傾斜30°靜置2 h～4 h，待血液凝固有血清析出時，無菌剝離血凝塊，然后置4℃冰箱過夜，待大部分血清析出后即可取出血清，必要時可低速離心（1000 g離心10 min～15 min）分離出血清。在不影響檢驗要求原則下，可以根據(jù)需要加入適宜的防腐劑。做病毒中和試驗的血清和抗體檢測的血清均應(yīng)避免使用化學(xué)防腐劑（如疊氮鈉、硼酸、硫柳汞等）。若需長時間保存，應(yīng)將血清置-20℃以下保存，且應(yīng)避免反復(fù)凍融。

采集雙份血清用于比較抗體效價變化的，第一份血清采于疫病初期并做冷凍保存，第二份血清采于第一份血清后3周～4周，雙份血清同時送至實驗室。

6.1.3.4血漿樣品

應(yīng)在樣品容器內(nèi)先加入抗凝劑（見6.1.3.1），采血后充分混合，然后靜置，待紅細(xì)胞自然下沉或離心沉淀后，取上層液體即為血漿。

6.2 一般組織樣品

應(yīng)使用常規(guī)解剖器械剝離動物的皮膚。體腔應(yīng)用消毒器械剝開，所需病料應(yīng)按無菌操作方法從新鮮尸體中采集。剖開腹腔時，應(yīng)注意不要損壞腸道。

6.2.1 病原分離樣品

6.2.1.1所采組織樣品應(yīng)新鮮，應(yīng)盡可能地減少污染，且應(yīng)避免其接觸消毒劑、抗菌、抗病毒等藥物。

6.2.1.2應(yīng)用無菌器械切取做病原（細(xì)菌、病毒、寄生蟲等）分離用組織塊，每個組織塊應(yīng)單獨置于無菌容器內(nèi)或接種于適宜的培養(yǎng)基上，且應(yīng)注明動物和組織名稱以及采樣日期等。

6.2.2 組織病理學(xué)檢查樣品

6.2.2.1樣品應(yīng)保證新鮮。處死或病死動物應(yīng)立刻采樣，應(yīng)選典型、明顯的病變部位。采集包括病灶及臨近正常組織的組織塊，立即放入不低于10倍于組織塊體積的10%中性緩沖福爾馬林溶液（見A.2）中固定，固定時間一般為～16 h24 h。切取的組織塊大小一般厚度不超過0.5 cm，長寬不超過1.5 cm×1.5 cm，固定3 h～4 h后進(jìn)行修塊，修切為厚度0.2 cm、長寬1 cm×1 cm大?。z查狂犬病則需要較大的組織塊）后，更換新的固定液繼續(xù)固定。組織塊切忌擠壓、刮摸和用水洗。如做冷凍切片用，則應(yīng)將組織塊放在0℃～4℃容器中，送往實驗室檢驗。

6.2.2.2對于一些可疑疾病，如檢查癢病、牛海綿狀腦病或其他傳染性海綿狀腦?。?TSEs）時，需要大量的腦組織。采樣時，應(yīng)將腦組織縱向切割，一半新鮮加冰呈送，另一半加10%中性緩沖福爾馬林溶液固定。

6.2.2.3福爾馬林固定組織應(yīng)與新鮮組織、血液和涂片分開包裝。福爾馬林固定組織不能冷凍，固定后可以棄去固定液，應(yīng)保持組織濕潤，送往實驗室。

6.3豬扁桃體樣品

打開豬口腔，將采樣槍的采樣鉤緊靠扁桃體，扣動扳機取出扁桃體組織。

6.4豬鼻腔拭子和家禽咽喉拭子樣品

取無菌棉簽，插入豬鼻腔2 cm～3 cm或家禽口腔至咽的后部直達(dá)喉氣管，輕輕擦拭并慢慢旋轉(zhuǎn)2圈～3圈，沾取鼻腔分泌物或氣管分泌物取出后，立即將拭子浸入保存液或半固體培養(yǎng)基中，密封低溫保存。常用的保存液有pH 7.2～7.4的滅菌肉湯（見A.3）或30%甘油磷酸鹽緩沖液（見A.4）或PBS緩沖液（見A.5），如準(zhǔn)備將待檢標(biāo)本接種組織培養(yǎng)，則保存于含0. 5%乳蛋白水解物的Hank's液（見A.6）中。一般每支拭子需保存5 mL。

6.5牛、羊食道—咽部分泌物（O-P液）樣品

被檢動物在采樣前禁食（可飲水）12 h，以免反芻胃內(nèi)容物嚴(yán)重污染O-P液。采樣用的特制探杯（probang cup）在使用前經(jīng)0.2%檸檬酸或2%氫氧化鈉浸泡，再用自來水沖洗。每采完一頭動物，探杯都要重復(fù)進(jìn)行消毒和清洗。采樣時動物站立保定，操作者左手打開動物口腔，右手握探杯，隨吞咽動作將探杯送入食道上部10 cm～15 cm，輕輕來回移動2次～3次，然后將探杯拉出。如采集的O-P液被反芻內(nèi)容物嚴(yán)重污染，要用生理鹽水或自來水沖洗口腔后重新采樣。在采樣現(xiàn)場將采集到的8 mL～10mL O-P液倒入盛有8 mL～10 mL細(xì)胞培養(yǎng)維持液或0.04 mol/L PBS（pH 7.4）的滅菌容器中，充分混勻后置于裝有冰袋的冷藏箱內(nèi)，送往實驗室或轉(zhuǎn)往-60℃冰箱保存。

6.6胃液及瘤胃內(nèi)容物樣品

6.6.1 胃液樣品

胃液可用多孔的胃管抽取。將胃管送入胃內(nèi)，其外露端接在吸引器的負(fù)壓瓶上，加負(fù)壓后，胃液即可自動流出。

6.6.2瘤胃內(nèi)容物樣品

反芻動物在反芻時，當(dāng)食團從食道逆入口腔時．立即開口拉住舌頭，伸入口腔即可取出少量的瘤胃內(nèi)容物。

6.7腸道組織、腸內(nèi)容物樣品

6.7.1腸道組織樣品

應(yīng)選擇病變最明顯的腸道部分，棄去內(nèi)容物并用滅菌生理鹽水沖洗，無菌截取腸道組織，置于滅菌容器或塑料袋送檢。

6.7.2腸內(nèi)容物樣品

取腸內(nèi)容物時，應(yīng)燒烙腸壁表面，用吸管扎穿腸壁，從腸腔內(nèi)吸取內(nèi)容物放入盛有滅菌的30%甘油磷酸鹽緩沖液（見A．4）或半固體培養(yǎng)基中送檢，或?qū)в屑S便的腸管兩端結(jié)扎，從兩端剪斷送檢。

6.8 糞便和肛拭子樣品

6.8.1 糞便樣品

應(yīng)選新鮮糞便至少10 g，做寄生蟲檢查的糞便應(yīng)裝入容器，在24 h內(nèi)送達(dá)實驗室。如運輸時間超過24 h則應(yīng)進(jìn)行冷凍，以防寄生蟲蟲卵孵化。運送糞便樣品可用帶螺帽容器或滅菌塑料袋，不得使用帶皮塞的試管。

6.8.2肛拭子樣品

采集肛拭子樣品時，取無菌棉拭子插入畜禽肛門或泄殖腔中，旋轉(zhuǎn)2圈～3圈，刮取直腸黏液或糞便，放入裝有30%甘油磷酸鹽緩沖液（見A．4）或半固體培養(yǎng)基中送檢。糞便樣品通常在4℃下保存和運輸。

6.9皮膚組織及其附屬物樣品

對于產(chǎn)生水皰病變或其他皮膚病變的疾病，應(yīng)直接從病變部位采集病變皮膚的碎屑、未破裂水皰的水皰液、水皰皮等作為樣品。

6.9.1 皮膚組織樣品

無菌采取2g感染的上皮組織或水皰皮置于5 mL 30%甘油磷酸鹽緩沖液（見A.4）中送檢。

6.9.2毛發(fā)或絨毛樣品

拔取毛發(fā)或絨毛樣品，可用于檢查體表的螨蟲、跳蚤和真菌感染。用解剖刀片邊緣刮取的表層皮屑用于檢查皮膚真菌，深層皮屑（刮至輕微出血）可用于檢查疥螨。對于禽類，當(dāng)懷疑為馬立克氏病時，可采集羽毛根進(jìn)行病毒抗原檢測。

6.9.3水皰液樣品

水皰液應(yīng)取自未破裂的水皰?？捎脺缇⑸淦骰蚱渌骶呶∷捯?，置于滅菌容器中送檢。

6.10生殖道分泌物和精液樣品

6.10.1 生殖道沖洗樣品

采集陰道或包皮沖洗液。將消毒好的特制吸管插入子宮頸口或陰道內(nèi)，向內(nèi)注射少量營養(yǎng)液或生理鹽水，用吸球反復(fù)抽吸幾次后吸出液體，注入培養(yǎng)液中。用軟膠管插入公畜的包皮內(nèi)，向內(nèi)注射少量的營養(yǎng)液或生理鹽水，多次揉搓，使液體充分沖洗包皮內(nèi)壁，收集沖洗液注入無菌容器中。

6.10.2生殖道拭子樣品

采用合適的拭子采取陰道或包皮內(nèi)分泌物，有時也可采集宮頸或尿道拭子。

6.10.3精液樣品

精液樣品最好用假陰道擠壓陰莖或人工刺激的方法采集。精液樣品精子含量要多，不要加入防腐劑，且應(yīng)避免抗菌沖洗液污染。

6.11腦、脊髓類樣品

應(yīng)將采集的腦、脊髓樣品浸入30%甘油磷酸鹽緩沖液（見A.4）中或?qū)⒄麄€頭部割下，置于適宜容器內(nèi)送檢。

6.11.1 牛、羊腦組織樣品

從延腦腹側(cè)將采樣勺插入枕骨大孔中5 cm～7 cm（采羊腦時插入深度約為4 cm），將勺子手柄向上扳，同時往外取出延腦組織。

6.11.2犬腦組織樣品

取內(nèi)徑0.5 cm的塑料吸管，沿枕骨大孔向一只眼的方向插入，邊插邊輕輕旋轉(zhuǎn)至不能深入為止，捏緊吸管后端并拔出，將含腦組織部分的吸管用剪刀剪下。

6.11.3腦脊液樣品

6.11.3.1頸椎穿刺法

穿刺點為環(huán)樞孔。動物實施站立保定或橫臥保定，使其頭部向前下方屈曲，術(shù)部經(jīng)剪毛消毒，穿刺針與皮膚面呈垂直緩慢刺入。將針體刺入蛛網(wǎng)膜下腔，立即拔出針芯，腦脊液自動流出或點滴狀流出，盛入消毒容器內(nèi)。大型動物頸部穿刺一次采集量為35 mL～70 mL。6.11.3.2腰椎穿刺法

穿刺部位為腰薦孔。動物實施站立保定，術(shù)部剪毛消毒后，用專用的穿刺針刺入，當(dāng)刺入蛛網(wǎng)膜下腔時，且口有脊髓液滴狀滴出或用消毒注射器抽取，盛入消毒容器內(nèi)。腰椎穿刺一次采集量為1 mL～30 mL。

6.12 眼部組織和分泌物樣品

眼結(jié)膜表面用拭子輕輕擦拭后，置于滅菌的30%甘油磷酸鹽緩沖液（見A.4，病毒檢測加雙抗）或運輸培養(yǎng)基中送檢。

6.13胚胎和胎兒樣品

選取無腐敗的胚胎、胎兒或胎兒的實質(zhì)器官，裝入適宜容器內(nèi)立即送檢。如果在24 h內(nèi)不能將樣品送達(dá)實驗室，應(yīng)冷凍運送。

6.14小家畜及家禽樣品

將整個尸體包入不透水塑料薄膜、油紙或油布中，裝入結(jié)實、不透水和防泄漏的容器內(nèi)，送往實驗室。

6.15骨骼樣品

需要完整的骨標(biāo)本時，應(yīng)將附著的肌肉和韌帶等全部除去，表面撒上食鹽，然后包入浸過5%石炭酸溶液的紗布中，裝入不漏水的容器內(nèi)送往實驗室。

6.16液體病料樣品

采集膽汁、膿、黏液或關(guān)節(jié)液等樣品時，應(yīng)采用燙烙法消毒采樣部位，用滅菌吸管、毛細(xì)吸管或注射器經(jīng)燙烙部位插入，吸取內(nèi)部液體病料，然后將病料注入滅菌的試管中，塞好棉塞送檢。也可用接種環(huán)經(jīng)消毒的部位插入，提取病料直接接種在培養(yǎng)基上。

供顯微鏡檢查的膿、血液及黏液抹片的制備方法：先將材料置玻片上，再用一滅菌玻棒均勻涂抹或另用一玻片推抹。用組織塊做觸片時，持小鑷子將組織塊的游離面在玻片上輕輕涂抹即可。

6.17乳汁樣品

乳房應(yīng)先用消毒藥水洗凈，并把乳房附近的毛刷濕，最初所擠3把～4把乳汁棄去，然后再采集10 mL左右乳汁于滅菌試管中。進(jìn)行血清學(xué)檢驗的乳汁不應(yīng)凍結(jié)、加熱或強烈震動。

6.18尿液樣品

在動物排尿時，用潔凈的容器直接接??；也可使用塑料袋，固定在雌畜外陰部或雄畜的陰莖下接取尿液。采取尿液，宜早晨進(jìn)行。

6.19鼻液（唾液）樣品

可用棉花或棉紗拭子采取。采樣前，最好用運輸培養(yǎng)基浸泡拭子。拭子先與分泌物接觸1 min，然后置入該運輸培養(yǎng)基，在4℃條件下立即送往實驗室。應(yīng)用長柄、防護(hù)式鼻咽拭子采集某些疑似病毒感染的樣品。

6.20環(huán)境和飼料樣品

環(huán)境樣品通常采集垃圾、墊草或排泄的糞便或尿液?？捎檬米釉谕L(fēng)道、飼料槽和下水處采樣。這種采樣在有特殊設(shè)備的孵化場、人工授精中心和屠宰場尤其重要。樣品也可在食槽或大容器的動物飼料中采集。水樣樣品可從飼槽、飲水器、水箱或天然及人工供應(yīng)水源中采集。

6.21 其他

對于重大動物疫病如新城疫、口蹄疫、禽流感、豬瘟和高致病性豬藍(lán)耳病，樣品采集應(yīng)按照GB/T 16550—2008中4.1.1、GB/T 18935—2003中附錄A、GB/T 18936—2003中2.1.1、GB/T 16551—2008中3.2.1和3.4.1的規(guī)定執(zhí)行。

7 樣品保存、包裝與廢棄物處理

7.1樣品保存

7.1.1 采集的樣品在無法于12 h內(nèi)送檢的情況下，應(yīng)根據(jù)不同的檢驗要求，將樣品按所需溫度分類保存于冰箱、冰柜中。

7.1.2血清應(yīng)放于-20℃凍存，全血應(yīng)放于4℃冰箱中保存。

7.1.3供細(xì)菌檢驗的樣品應(yīng)于4℃保存，或用滅菌后濃度為30%～50%的甘油生理鹽水4℃保存。

7.1.4供病毒檢驗的樣品應(yīng)在0℃以下低溫保存，也可用滅菌后濃度為30%～50%的滅菌甘油生理鹽水0℃以下低溫保存。長時間-20℃凍存不利于病毒分離。

7.2樣品包裝

7.2.1每個組織樣品應(yīng)仔細(xì)分別包裝，在樣品袋或平皿外貼上標(biāo)簽，標(biāo)簽注明樣品名、樣品編號和采樣日期等，再將各個樣品放到塑料包裝袋中。

7.2.2拭子樣品的小塑料離心管應(yīng)放在規(guī)定離心管塑料盒內(nèi)。

7.2.3 血清樣品裝于小瓶時應(yīng)用鋁盒盛放，盒內(nèi)加填塞物避免小瓶晃動。若裝于小塑料離心管中，則應(yīng)置于離心管塑料盒內(nèi)。

7.2.4包裝袋外、塑料盒及鋁盒應(yīng)貼封條，封條上應(yīng)有采樣人的簽章，并應(yīng)注明貼封日期，標(biāo)注放置方向。

7.2.5重大動物疫病采樣，如高致病性禽流感、口蹄疫、豬瘟、高致病性藍(lán)耳病、新城疫等應(yīng)按照中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第503號的規(guī)定執(zhí)行。

7.3廢棄物處理

7.3.1無法達(dá)到檢測要求的樣品做無害化處理，應(yīng)按照GB 16548、中華人民共和國國務(wù)院令第424號和中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第302號的規(guī)定執(zhí)行。

7.3.2采過病料用完后的器械，如一次性器械應(yīng)進(jìn)行生物安全無害化處理；可重復(fù)使用的器械應(yīng)先消毒后清洗，檢查過疑似牛、羊海綿狀腦病的器械應(yīng)放在2 mol/L的氫氧化鈉溶液中浸泡2h以上，才可再次使用。

8 采樣記錄

8.1 采樣時，應(yīng)清晰標(biāo)識每份樣品，同時在采樣記錄表上填寫采樣的相關(guān)信息。

8.2應(yīng)記錄疫病發(fā)生的地點（如可能，記錄所處的經(jīng)度和緯度）、畜禽場的地址和畜主的姓名、地址、電話及傳真。

8.3應(yīng)記錄采樣者的姓名、通信地址、郵編、E-mail地址、電話及傳真。

8.4應(yīng)記錄畜（禽）場里飼養(yǎng)的動物品種及其數(shù)量。

8.5應(yīng)記錄疑似病種及檢測要求。

8.6應(yīng)記錄采樣動物畜種、品種、年齡和性別及標(biāo)識號。

8.7應(yīng)記錄首發(fā)病例和繼發(fā)病例的日期及造成的損失。

8.8應(yīng)記錄感染動物在畜群中的分布情況。

8.9應(yīng)記錄農(nóng)場的存欄數(shù)、死亡動物數(shù)、出現(xiàn)臨床癥狀的動物數(shù)量及其日齡。

8. 10應(yīng)記錄臨床癥狀及其持續(xù)時間，包括口腔、眼睛和腿部情況，產(chǎn)奶或產(chǎn)蛋的記錄，死亡時間等。

8.11 應(yīng)記錄受檢動物清單、說明及尸檢發(fā)現(xiàn)。

8.12應(yīng)記錄飼養(yǎng)類型和標(biāo)準(zhǔn)，包括飼料種類。

8.13應(yīng)記錄送檢樣品清單和說明，包括病料的種類、保存方法等。

8.14應(yīng)記錄動物的免疫和用藥情況。

8.15應(yīng)記錄采樣及送檢日期。

9 樣品運輸

9.1 應(yīng)以最快最直接的途徑將所采集的樣品送往實驗室。

9.2對于可在采集后24 h內(nèi)送達(dá)實驗室的樣品，可放在4℃左右的容器中冷藏運輸；對于不能在24 h內(nèi)送達(dá)實驗室但不影響檢驗結(jié)果的樣品，應(yīng)以冷凍狀態(tài)運送。

9.3運輸過程中應(yīng)避免樣品泄漏。

9.4制成的涂片、觸片、玻片上應(yīng)注明編號。玻片應(yīng)放入專門的病理切片盒中，在保證不被壓碎的條件下運送。

9.5所有運輸包裝均應(yīng)貼上詳細(xì)標(biāo)簽，并做好記錄。

9.6運送高致病性病原微生物樣品，應(yīng)按照中華人民共和國國務(wù)院令第424號的規(guī)定執(zhí)行。

附 錄 A

（規(guī)范性附錄）

樣品保存液的配制

A.1 阿（Alsever）氏液

葡萄糖 2.05 g

檸檬酸鈉（Na3C6H5O7·2H2O） 0.80 g

氯化鈉（NaCl） 0.42 g

蒸餾水（或無離子水）加至100 mL

調(diào)配方法：溶解后，以10%檸檬酸調(diào)至pH為6.1分裝后，70 kPa、10 min滅菌，冷卻后4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

A.2 10%中性緩沖福爾馬林溶液（pH 7.2～7.4）

A.2.1 配方1：

37%～40%甲醛 100 mL

磷酸氫二鈉（Na2 HPO4） 6.5 g

一水磷酸二氫鈉（NaH2PO4·H2O） 4.0 g

蒸餾水 900 mL

調(diào)配方法：加蒸餾水約800 mL，充分?jǐn)嚢?，溶解無水磷酸氫二鈉6.5 g和一水磷酸二氫鈉4.0 g，將溶解液加入到100 mL 37%～40%的甲醛溶液中，定容到1L。

A.2.2 配方2：

37%～40%甲醛 100 mL

0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液 900 mL

調(diào)配方法：首先稱取8g NaCl、0.2 g KC1、1.44 g Na2HPO4和0.24 g KH2PO4，溶于800 mL蒸餾水中。用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH至7.4，最后加蒸餾水定容至1 L，即為0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液（PBS，pH 7.4）。然后，量取900 mL 0.01 mol/L PBS加入到100 mL 37%～40%的甲醛溶液中。

A.3 肉湯（broth）

牛肉膏 3.50 g

蛋白胨 10.00 g

氯化鈉（NaCl） 5.00 g

調(diào)配方法：充分混合后，加熱溶解，校正pH為7.2～7.4。再用流通蒸汽加熱3 min，用濾紙過濾，獲黃色透明液體，分裝于試管或燒瓶中，以100 kPa、20 min滅菌。保存于冰箱中備用。

A.4 30%甘油磷酸鹽緩沖液（pH 7.6）

甘油 30.00 mL

氯化鈉（NaCl） 4.20 g

磷酸二氫鉀（KH2PO4） 1.00 g

磷酸氫二鉀（K2HPO4） 3.10 g

0.02%酚紅 1.50 m

蒸餾水 加至100 mL

調(diào)配方法：加熱溶化，校正pH為7.6，100 kPa、15 min滅菌，冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

A.5 0.01 mol/L PBS緩沖液（pH 7.4）

磷酸二氫鉀（KH2PO4） 0.27 g

磷酸氫二鈉（Na2HPO4）/12水磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O） 1.42 g/3.58 g

氯化鈉（NaCl） 8.00 g

氯化鉀（KCl） 0.20 g

調(diào)配方法：加去離子水約800 mL，充分?jǐn)嚢枞芙?。然后，用HCl溶液或NaOH溶液校正pH為7.4，最后定容到1L。高溫高壓滅菌后室溫保存。

A.6 0.5%乳蛋白水解物的Hank's液

甲液：

氯化鈉（NaCl） 8.0 g

氯化鉀（KCl） 0.4 g

7水硫酸鎂（MgSO4·7H2O） 0.2 g

氯化鈣（CaCl2）/2水氯化鈣（CaCl2·2H2O） 0.14 g/0. 185 g

置入50 mL的容量瓶中，加40 mL三蒸水充分?jǐn)嚢枞芙猓詈蠖ㄈ葜?0 mL。

乙液：

磷酸氫二鈉（Na2HPO4）/12水磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O） 0.06 g/1.52 g

磷酸二氫鉀（KH2PO4） 0.06 g

葡萄糖 1.0 g

置入50 mL的容量瓶中，加40 mL三蒸水充分?jǐn)嚢枞芙夂?，再?.4%酚紅5mL，混勻，最后定容至50 mL。

調(diào)配方法：取甲液25 mL、乙液25 mL和水解乳蛋白0.5 g，充分混勻，最后加三蒸水定容至500 mL，高壓滅菌后4℃保存?zhèn)溆谩?/p>