第1章 免疫標(biāo)記技術(shù)

1.1 酶免疫技術(shù)

酶免疫分析法（Enzyme Immunoassay, EIA）是以酶標(biāo)記的抗體（或抗原）作為主要試劑，將抗原抗體反應(yīng)的特異性和酶催化底物反應(yīng)的高效性、專(zhuān)一性結(jié)合起來(lái)的一種標(biāo)記免疫檢測(cè)技術(shù)。該法將具有高效催化活性的酶分子通過(guò)化學(xué)方法與抗體（或抗原）相結(jié)合，使其同時(shí)具備化學(xué)反應(yīng)性，當(dāng)與待測(cè)抗原（或抗體）結(jié)合后，通過(guò)酶催化底物產(chǎn)生肉眼可見(jiàn)的顏色反應(yīng)，從而達(dá)到免疫檢測(cè)的目的。該方法是一種特異而敏感的技術(shù)，檢測(cè)靈敏度可達(dá)到每毫升微克（μg）甚至納克（ng）級(jí)別。

該方法試劑穩(wěn)定、無(wú)放射性污染，且通過(guò)與其他先進(jìn)儀器及技術(shù)結(jié)合使其分析形式日趨多樣化，簡(jiǎn)易靈活，因而在食品、醫(yī)學(xué)、生物研究等多領(lǐng)域中廣泛應(yīng)用于已知或未知抗原（或抗體）的定性、定量分析。

酶免疫測(cè)定技術(shù)根據(jù)抗原抗體發(fā)生特異性識(shí)別結(jié)合反應(yīng)后，是否需要分離結(jié)合的與游離的酶標(biāo)記物，分為均相測(cè)定法（Homogenous）和異相測(cè)定法（Heterogeneous）。如果反應(yīng)后不需要進(jìn)行分離而直接檢測(cè)，則為均相測(cè)定法；如果需要進(jìn)行分離后分別檢測(cè)，則為異相測(cè)定法。根據(jù)發(fā)生反應(yīng)所依托的介質(zhì)，異相測(cè)定法又可以分為液相和固相兩種。

目前最為常用的酶免疫技術(shù)為固相異相測(cè)定法中的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）。該法將抗原或抗體吸附于固相載體上，檢測(cè)過(guò)程中將待測(cè)抗體（或抗原）及酶標(biāo)記物按先后順序依次加入反應(yīng)體系中，使其與固相載體上的抗原（或抗體）反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物，然后洗去未結(jié)合的游離酶標(biāo)記物及游離抗原（或抗體），測(cè)定已結(jié)合的酶標(biāo)記物的酶活性，從而確定樣品中待測(cè)抗體（或抗原）的含量。