1.1.1 ELISA技術(shù)的實驗原理

ELISA包括直接法、間接法、雙抗夾心法、競爭法及抗酶抗體法等幾種類型。本節(jié)主要介紹比較常用的間接法、雙抗夾心法和競爭法的基本原理。

1．間接法

該法是用來檢測待測抗體最常用的方法。具體原理為將已知抗原吸附于固相載體上，加入待測樣品（如含有待測抗體的動物血清），待測抗體與抗原結(jié)合，洗滌未結(jié)合抗體，再加入酶標(biāo)二抗（用酶標(biāo)記的能夠特異性識別結(jié)合待測抗體的第二抗體），形成抗原-待測抗體-酶標(biāo)二抗復(fù)合物，當(dāng)進(jìn)一步在反應(yīng)體系中加入酶的反應(yīng)底物后，有色產(chǎn)物的形成量與待測抗體的量成正比。實驗原理如圖1-1所示。

圖1-1 間接法ELISA實驗原理

資料來源：錢旻主編《免疫學(xué)原理與技術(shù)》

2．雙抗夾心法

此法用于檢測待測抗原。假設(shè)待測抗原表面有多個抗原決定簇A、B、C等，首先將能特異性結(jié)合待測抗原上A抗原決定簇的抗體（簡稱抗體A）包被于固相載體，然后加入待測樣品（如含有待測抗原的動物組織或器官的組織勻漿液），使抗原抗體特異性識別結(jié)合，洗滌未結(jié)合的無關(guān)抗原后，再加入酶標(biāo)記的能特異性識別結(jié)合待測抗原上B抗原決定簇的抗體（簡稱抗體B），形成“抗體A-待測抗原-酶標(biāo)抗體B”共同構(gòu)成的復(fù)合物。當(dāng)加入酶反應(yīng)的底物后，有色產(chǎn)物的形成量與待測抗原的量成正比，如圖1-2所示。

圖1-2 雙抗夾心法ELISA實驗原理

資料來源：錢旻主編《免疫學(xué)原理與技術(shù)》

3．競爭法

競爭法既可用于檢測抗原，又可用于檢測抗體。以檢測抗原為例，將能與待測抗原特異性結(jié)合的抗體包被于固相載體上，加入待測抗原和一定量的已知酶標(biāo)抗原，使二者競爭性地與包被的抗體結(jié)合，如待測抗原的量大于酶標(biāo)抗原，酶標(biāo)抗原與包被的抗體結(jié)合得少，進(jìn)而形成的標(biāo)記復(fù)合物也少，反之亦然，因此最終有色產(chǎn)物的形成量與待測抗原含量成反比，如圖1-3所示。

圖1-3 競爭法ELISA實驗原理

資料來源：錢旻主編《免疫學(xué)原理與技術(shù)》