第1章 免疫標記技術

1.1 酶免疫技術

酶免疫分析法（Enzyme Immunoassay, EIA）是以酶標記的抗體（或抗原）作為主要試劑，將抗原抗體反應的特異性和酶催化底物反應的高效性、專一性結合起來的一種標記免疫檢測技術。該法將具有高效催化活性的酶分子通過化學方法與抗體（或抗原）相結合，使其同時具備化學反應性，當與待測抗原（或抗體）結合后，通過酶催化底物產生肉眼可見的顏色反應，從而達到免疫檢測的目的。該方法是一種特異而敏感的技術，檢測靈敏度可達到每毫升微克（μg）甚至納克（ng）級別。

該方法試劑穩定、無放射性污染，且通過與其他先進儀器及技術結合使其分析形式日趨多樣化，簡易靈活，因而在食品、醫學、生物研究等多領域中廣泛應用于已知或未知抗原（或抗體）的定性、定量分析。

酶免疫測定技術根據抗原抗體發生特異性識別結合反應后，是否需要分離結合的與游離的酶標記物，分為均相測定法（Homogenous）和異相測定法（Heterogeneous）。如果反應后不需要進行分離而直接檢測，則為均相測定法；如果需要進行分離后分別檢測，則為異相測定法。根據發生反應所依托的介質，異相測定法又可以分為液相和固相兩種。

目前最為常用的酶免疫技術為固相異相測定法中的酶聯免疫吸附試驗（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）。該法將抗原或抗體吸附于固相載體上，檢測過程中將待測抗體（或抗原）及酶標記物按先后順序依次加入反應體系中，使其與固相載體上的抗原（或抗體）反應形成抗原抗體復合物，然后洗去未結合的游離酶標記物及游離抗原（或抗體），測定已結合的酶標記物的酶活性，從而確定樣品中待測抗體（或抗原）的含量。