高效液相色譜法對5種羥基化多溴聯苯醚的測定

徐銘澤，李亮亮，吳正超

（沈陽農業大學分析測試中心，沈陽 110866）

多溴聯苯醚（PBDEs，見圖1）是一種廣泛應用于電子電器產品、泡沫塑料及石油產業中的溴系阻燃劑有機污染物。進入生物體內的PBDEs經細胞色素酶P450（CYP）作用可生成一系列代謝產物羥基化多溴聯苯醚（OH-PBDEs），OH-PBDEs^[1-2]具有特殊的毒理學特征，包括：影響類固醇，影響酶的活性，從而影響基因的表達；與甲狀腺激素轉移蛋白結合使得人體內的甲狀腺激素失去平衡；對生殖發育系統的影響，導致系列發育缺陷。因此對OH-PBDEs的檢測成為研究熱點。

目前階段文獻報道的檢測PBDEs和OH-PBDEs的主要方法有氣相色譜法^[3-5]，氣相色譜-電子轟擊源質譜聯用法^[6-7]（GC-EI/MS），氣相色譜-負化學源質譜質譜聯用法（GC-ENCI/MS），高效液相色譜法（HPLC）^[8-9]，高效液相色譜-質譜聯用法（HPLC-MS）^[10-12]。本文通過高效液相色譜法對有機污染物PBDEs的代謝產物（OH-PBDEs4'-OH-BDE-17、4-OH-BDE-42、2'-OH-BDE-3、3'-OH-BDE-7和5-OH-BDE-47）進行了分離檢測，簡化操作步驟，測定結果回收率在95.57%～101.90%之間，方法線性關系良好，精密度高。

1　實驗部分

1.1　實驗儀器

島津LC-20A高效液相色譜儀（帶自動進樣器，日本島津公司），色譜柱：Discovery反相酰胺C16高效液相色譜柱（5μm,15cm×4.6mm）；ProMax針頭式過濾器（孔徑0.22μm）；超聲波清洗器；旋轉蒸發儀。

1.2　主要實驗試劑

2'-OH-BDE-3，3'-OH-BDE-7，4'-OH-BDE-17，5-OH-BDE-47（50μg/ml），4-OH-BDE-42（10μg/ml）；乙腈（色譜純，國藥集團化學試劑），正己烷（分析純，西隴化工），甲基叔丁基醚、四氫呋喃（分析純），二氯甲烷（分析純，西隴化工），甲苯（分析純），二次水。

1.3　實驗方法

流動相為乙腈-水（95 : 5，體積比），流速0.75ml/min，色譜柱溫25℃，將配置好的標準溶液用0.45μm的過濾膜過濾后裝于自動進樣瓶中，進樣量10μl，在226nm處測定。

2　結果與討論

2.1 OH-PBDEs的保留時間與紫外特征吸收值

在色譜柱溫為25℃，流動相流速0.75ml/min的色譜條件下，確定了5種OH-PBDEs標準樣品的保留時間和紫外特征吸收值，結果見表1。

2.2　實驗色譜條件的優化選擇

2.2.1　流動相流速的選擇

實驗發現在0.75ml/min流速下，泵壓力較平穩，5種樣品能夠得到較好分離，且各物質的峰形較好，因此選用0.75ml/min為后面測定的色譜流動相流速。

2.2.2　色譜柱溫度的優化選擇

考查不同溫度下，五種樣品的分離情況，結果發現25℃的分離情況較好，且較接近室溫，因此，選擇25℃為檢測的最優溫度。

2.3　標準曲線與方法檢出限

2.3.1　標準曲線

實驗可知在1～50μg/ml的濃度范圍內，2'-OH-BDE-3、3'-OH-BDE-7和5-OH-BDE-47的峰面積與濃度具有良好的線性關系，線性回歸方程分別為y=36168x+2891，y=35924x–12744和y=35885x–330；在1～10μg/ml的范圍內4'-OH-BDE-17和4-OH-BDE-42的峰面積與濃度存在良好線性關系，線性回歸方程分別為y=33736x–3173和y=32058x+2827。

2.3.2　方法檢出限

進行11次的空白實驗平行檢測，得到峰面積，以3倍信噪比背景下計算出方法檢出限。2'-OH-BDE-3、3'-OH-BDE-7、5-OH-BDE-47、4'-OH-BDE-17和4-OH-BDE-42的檢出限依次為0.1528μg/ml、0.1592μg/ml、0.1638μg/ml、0.1819μg/ml、0.1547μg/ml。

2.4　樣品分析測定

將采集自桂林漓江的水樣與桂林高新工業園區郊外采集的水樣靜置，取100ml過濾，加入10ml的正己烷-甲基叔丁基醚（9 : 1，體積比）提取液，超聲提取后，離心并旋轉蒸發近干，加入乙腈復溶，待測。

塑料樣品的處理：取網線的外殼適量，先將樣品剪切成小塊，低溫粉碎機粉碎，取粉末2g，使用有機溶劑浸泡（聚氯乙烯類-四氫呋喃），用二氯甲烷-甲苯（1 : 1，體積比）超聲提取，70℃蒸發濃縮，準確取200μl用乙腈定容至1ml，待測。

實驗發現，在三個樣品的色譜圖里未檢測到與標準樣品相對應的特征吸收值和保留時間。在加標回收率的實驗測定中，樣品加標量為0.400μg，平行測定五次，計算回收率以及RSD，結果見表2。

3　結論

本文通過高效液相色譜法，經過優化色譜實驗條件，建立了測定3種不同樣品中的OH-PBDEs的方法，該方法操作簡便。在檢測水樣和塑料樣品中均沒有檢測出目標5種OH-PBDEs，原因可能是標準對照樣品數量不夠，并且OH-PBDEs是PBDEs的代謝產物，所測的樣品中缺少必要的代謝環境。該方法，線性關系良好，方法靈敏度高，選擇性好。

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