高效液相色譜法測定酸漿飲料中維生素C的含量

魏靜元^*

（遼寧省標(biāo)準(zhǔn)化體系建設(shè)工程技術(shù)研究中心遼寧省分析科學(xué)研究院，沈陽 110015）

酸漿亦稱紅菇娘，為茄科多年生草本植物，全草可入藥，具有清熱、解毒、利尿、降壓、強(qiáng)心、抑菌等功能^[1]。酸漿果實營養(yǎng)豐富而全面，除含有蛋白質(zhì)、糖、酸和脂肪等一般營養(yǎng)成分外，還含有生理活性較強(qiáng)的甾體類化合物酸漿苦素類。其漿果含有19 種以上無機(jī)元素，其中人體所需無機(jī)元素K、P、Ca、Mg 和Na 的含量最高，占所測無機(jī)元素的95%以上，其中鈣的含量是西紅柿的73倍、胡蘿卜的13倍。

此外，酸漿果實還含有玉蜀黍黃素、樹脂、果膠、鞣質(zhì)、黏液質(zhì)、胡蘿卜素、槲皮素、咖啡酸、桂皮酸、阿魏酸、甘醇酸、多糖、有機(jī)酸類、香豆素類及維生素A、B、C、D、E 等8 種維生素，其獨特的風(fēng)味和豐富的營養(yǎng)，是開發(fā)功能食品的優(yōu)質(zhì)原料。

酸漿果實維生素C的含量是西紅柿的6倍、胡蘿卜的5倍，用高效液相色譜法測定維生素C的含量，具有高效、快速、穩(wěn)定、可靠等特點^[2-4]。

1　實驗部分

1.1　材料和試劑

Agilent 1200S液相色譜（安捷倫）；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純。酸漿飲料來自生產(chǎn)企業(yè)。

1.2　色譜條件

色譜柱：Agilent C18柱(150mm×4.6mm, 5.0μm)；

流動相：A. 0.1mol/L KH₂PO₄ (pH=7)，B.甲醇，以體積比A : B=88 : 12等度洗脫；流速為0.6ml/min，柱溫25℃。檢測波長245nm，進(jìn)樣量20μl。

1.3　樣品的制備

以固相萃取來提取飲料中的維生素C，同時除去大多數(shù)的干擾物質(zhì)。向一份10ml飲料中加入四份的水40ml，稀釋，混合物在中等速度下攪拌1min，離心分離10min，14000g。固相萃取柱依次用10ml甲醇和10ml水（用0.01pH值mol/L HCl調(diào)pH值至4.2）沖洗活化。加入混合樣品，離心5min，然后樣品依次用5ml的水（pH=4.2）和10ml的甲醇淋洗溶出。溶出液在氮氣流下干燥后重新溶解于1ml的流動相中，超聲10min，離心5min，取上層溶液20μl注入HPLC系統(tǒng)。

1.4　標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密稱取0.10g維生素C對照品，用流動相溶液溶解并定容至100ml，得1mg/ml的儲備液，避光保存。稀釋儲備液的濃度（μg/ml）分別為20、40、80、160、240的溶液，用0.45μm濾膜過濾，進(jìn)行HPLC色譜分析。以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，以濃度為橫坐標(biāo)(X)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計算相關(guān)系數(shù)，見圖1。維生素C的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y=79460X?71510（R²=0.9997，n=6）。維生素C在10～140μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2　結(jié)果與討論

2.1　色譜條件的優(yōu)化

比較了甲醇水體系發(fā)現(xiàn)，當(dāng)甲醇水比例為88 : 12時，維生素C峰形好、對稱，且能有效分離雜質(zhì)。比較了檢測波長，以245nm最好。

2.2　精密度試驗

取維生素C標(biāo)準(zhǔn)曲線項下低（30μg/ml）、中（40μg/ml）、高（50μg/ml）系列濃度，分別連續(xù)進(jìn)樣3次；日間精密度分別于第1、3、5天測定，各進(jìn)樣3次。結(jié)果維生素C三種濃度的日內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為0.26%、0.57%和0.41%，日間RSD分別為2.98%、2.06%和2.78%。

2.3　回收率試驗

在一組容量瓶中，分別加入等量的酸漿樣品，然后再分別加入不同量的維生素C 標(biāo)準(zhǔn)溶液20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml、320μg/ml，搖勻，測定其回收率，實驗結(jié)果見表1。

2.4　穩(wěn)定性試驗

取維生素C對照品儲備液，以流動相稀釋成濃度為20.0μg/ml的溶液，分別在0、1h、2h、3h、4h、5h、6h進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果0～4h，RSD為1.67%，4h后峰面積明顯減小。

2.5　重復(fù)性試驗

取同一批號的樣品5份，按含量測定的方法進(jìn)行重復(fù)性試驗，記錄維生素C色譜峰面積。結(jié)果RSD為1.9%。

2.6　樣品含量測定

進(jìn)樣3個不同批次的樣品含量，結(jié)果以標(biāo)示量計，3批樣品批示量含量分別為：100.4%、101.37%、102.01%，均在95%～110%之間。見圖2。

3　結(jié)論

本實驗考察了不同流動相的組成及不同濃度，不同pH值及溫度等對分離效果的影響。結(jié)果確定柱溫為25℃，以0.1mol/L（pH=7）磷酸二氫鉀為為流動相，流速為0.6ml/min。

該方法具有靈敏、準(zhǔn)確、高效的特點，適用于飲料中維生素C的快速測定。

參考文獻(xiàn)

[1]許亮, 孫鵬, 王冰, 等. 中醫(yī)藥學(xué)刊, 2005, (5): 908-909.

[2] 陸道禮, 李國文, 陳庶來, 等. 食品研究與開發(fā), 2004, 25(6): 121-123.

[3] 王艷穎, 姜國斌, 胡文忠, 等. 大連大學(xué)學(xué)報, 2006, 27(2): 21-23.

[4] 周曉霞. 飲料工業(yè), 2003, 6(1): 43-46.