高效陽離子交換色譜法測定考來維侖干混懸劑中的7種雜質

薛景巖¹，李志偉^1,2，原現瑞³

（1．河北科技大學化學與制藥工程學院，石家莊 050000；2．河北省國家生物培訓基地，石家莊 050000；
3．河北省分析測試研究中心，石家莊 050000）

醫學上將血脂過高稱作高脂血癥，指各種原因而導致血漿中膽固醇和/或甘油三酯水平升高^[1]。高脂血癥是動脈粥樣硬化的主要發病原因之一，與心腦血管疾病的發生直接相關，常用血脂調節藥主要有他汀類、貝特類、煙酸類、膽酸螯合劑類等^[2]。

考來維侖（Colesevelam）是新型的血脂調節藥膽酸螯合劑類藥物，它具有離子交換樹脂的作用，與膽酸的親和力強^[3]。考來維侖是1-氯-2,3-環氧丙烷，［6-(丙烯氨基)-己基］三甲胺氯化物和N-烯丙基癸胺氯化物的烯丙胺多聚體^[4]。考來維侖是具有親水性而又不溶于水的聚合物，對其質量進行控制一直是個難題，特別是相關雜質的控制。本文針對考來維侖干混懸劑中存在的七種相關雜質（包括工藝雜質和降解雜質），采用兩種不同的高效陽離子交換色譜法方法對它們進行定量分析，試驗結果表明，兩種方法可簡便、靈敏、準確的測定7種相關雜質。

1　材料與方法

1.1　儀器

Dinoex RFIC ICS-2000 色譜系統（美國戴安），采集和處理采用Chromeleon色譜工作站；AL204電子天平（梅特勒）

1.2　試劑

考來維侖干混懸劑，空白輔料以及七種相關雜質由石藥集團提供，七種相關雜質命名為CS0～CS4，CS6和CS7，其他試劑均采用分析純以上化學試劑，蒸餾水是自制高純水。

1.3　溶液的配制

1.3.1　方法Ⅰ

流動相：4.0mmoL/L的硝酸-乙腈（6 : 4，體積比）；稀釋劑：10mmoL/L的鹽酸-乙腈（7 : 3，體積比）。

系統適用性溶液：精密稱取5.0mg各雜質對照品（即CS0、CS2、CS6和CS7）置50ml容量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度。量取5ml該溶液，用稀釋劑稀釋至100ml。

標準溶液：精密稱取5.0mg CS2雜質對照品置50ml容量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度。精密量取該溶液5ml置100ml量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度。

樣品溶液：精密稱取樣品（約相當于鹽酸考來維侖100mg）置小燒杯中，精密加入10ml稀釋劑，攪拌30min，過濾。

1.3.2　方法Ⅱ

流動相：5.0mmol/L硝酸-丙酮-乙腈（5.1 : 4.5 : 4，體積比）；稀釋劑：15mmol/L的鹽酸-乙腈（7 : 3，體積比）。

系統適應性溶液：精確稱取約5mg各雜質對照品（即：CS1、CS3、CS4）置50ml容量瓶中，加稀釋劑溶解并稀釋至刻度，量取5ml此溶液用稀釋劑稀釋到100ml。

標準溶液：精密稱取5mg CS1雜質對照品置50ml容量瓶中。用稀釋劑溶解并稀釋至刻度。精密量取該溶液5ml置100ml量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度。

樣品溶液：精密稱取樣品（約相當于鹽酸考來維侖100mg）置小燒杯中，精密加入10ml稀釋劑，攪拌30min，過濾。

1.4　色譜條件

操作規程按照離子色譜法測定法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅴ J）執行；色譜柱：Metrosep C4-250/4.0，Metrosep C4 Guard/4.0；檢測器：電導檢測器；流速：0.9ml/min；進樣量：100μl；柱溫：30℃。

2　方法學驗證

2.1　系統適用性

精密量取系統適用性溶液100μl注入液相色譜，記錄色譜圖，考察各雜質的分離度；精密量取標準溶液100μl注入液相色譜，重復進樣6次，獲得的雜質峰的峰面積，考察精密度。結果：方法Ⅰ中各個雜質的出峰順序依次為CS7、CS2、CS0、CS6。各雜質峰之間均能有效分離，分離度符合規定。CS2雜質峰峰面積的相對標準偏差為0.2%，符合要求；方法Ⅱ中各個雜質的出峰順序依次為CS3、CS1、CS4。CS1雜質峰峰面積的相對標準偏差為1.1%，符合要求。兩種方法對應的系統適用性色譜圖分別為圖1、圖2。

2.2　專屬性

按照中國藥典規定的實驗方法^[5]，對考來維侖干混懸劑進行強制降解試驗，采用強酸、強堿、氧化、高溫和強光等劇烈條件進行加速破壞試驗后進行有關物質檢測，同時對空白輔料進行破壞，考察檢測方法的專屬性。結果：方法Ⅰ中本品在酸、堿、氧化、光照的強制破壞試驗中未產生明顯的降解雜質；在高溫及氧化破壞試驗中，已有雜質稍有增大，未產生新的降解雜質；試驗結果未發現對特定雜質CS7、CS2、CS0、CS6產生干擾的雜質，且空白輔料對特定雜質CS7、CS2、CS0、CS6的檢測沒有產生影響；方法Ⅱ中本品在酸、堿、高溫、氧化、光照等條件下進行強制破壞，除樣品本身的雜質CS1及CS3外，只有高溫破壞條件下產生一新的降解雜質。各雜質均能有效分離，輔料和溶劑對特定雜質CS3、CS1、CS4的檢測沒有影響。故采用這兩種離子色譜法對考來維侖干混懸劑雜質進行檢測專屬性較高。

2.3　線性

將7種有機雜質CS0、CS1、CS2、CS3、CS4、CS6、CS7對照品分別配制成系列濃度的對照品溶液，分別進樣分析，以各個雜質的濃度及相應的峰面積進行線性回歸分析。結果見表1。

2.4　檢測限

取CS0、CS2、CS6、CS7對照品適量，精密稱定，加稀釋劑溶解并逐級稀釋，精密量取各稀釋后的溶液100μl注入液相色譜儀，當信噪比為3 : 1時的濃度為檢測限。結果見表2。

2.5　重復性與溶液穩定性

精密量取樣品溶液100μl，連續進樣6次，雜質峰面積的RSD小于10%，檢測重復性良好，樣品溶液穩定。

2.6　回收率

取按本品處方量混合的空白輔料粉末適量，精密稱定，共9份，分別精密加入一定量的混合對照品儲備液，制備成高、中、低3個濃度（分別相當于各雜質限度濃度的50%，100%，150%）的供試品溶液，每個濃度配制3份，分別進樣測定，按外標法以峰面積計算各雜質含量，將所得含量與加入的標準量進行比較，計算回收率。各樣品的回收率和RSD值分別為：CS7，102.46%，3.26%；CS2，101.23%，4.51%；CS0，99.80%，3.29%；CS6，101.43%，3.86%；CS3，99.36%，2.56%；CS4，102.14%，1.23%；CS1，103.64%，2.52%。符合驗證要求，證明該方法準確度高。

2.7　耐用性

將色譜條件作微小變化（微調流速、柱溫及流動相中硝酸濃度）后，測定結果基本不受影響，各雜質峰之間均能有效分離，表明方法耐用性良好。

3　結論

本文采用兩種高效離子交換色譜法對考來維侖干混懸劑中的7種雜質進行定量分析，為考來維侖干混懸劑的雜質分析提供了分析方法和判斷標準，能夠更好的其進行合理有效的質量控制，從而提高考來維侖干混懸劑的生產工藝水平和內在質量。

參考文獻

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[2] 陳敏, 鄭璇, 黃旭慧. 福建醫藥雜志, 2009, 3: 130-132.

[3] 梁引庫, 吳三橋, 徐仲陽.食品與發酵工業, 2012, 38(9): 94-98.

[4] 張偉, 任連杰, 周長明, 等. 中國生化藥物雜志, 2014, 08: 170-175.

[5] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典[S]. 北京: 化學工業出版社, 2010: 193.