第五節　負載納豆激酶的淀粉納米顆粒（納豆激酶-NP）

將100mg淀粉納米顆粒（Ani-NPs）分散在100mL含有納豆激酶0.1mg/mL的磷酸鹽緩沖液（PBS）中，攪拌0.5h，在4℃下載藥2天，冷凍干燥得負載納豆激酶的淀粉納米顆粒。

將新鮮的雞血置于室溫，形成血栓后切成長8 mm、直徑4 mm的圓柱狀，取其中一塊轉移至含有負載納豆激酶的Ani-NPs的PBS溶液（20mL，1mg/mL, pH=7.4，I=0.1 mol/L）[4]1中，37℃下進行體外溶栓實驗。間隔一定時間取出血栓，用濾紙吸去其表面游離水后稱量。以游離納豆激酶的磷酸鹽緩沖液（20mL，0.1mg/mL, pH=7.4，I=0.1 mol/L）和磷酸鹽緩沖液（pH=7.4，I=0.1 mol/L）中的溶栓狀態為空白對照，平行測定三次。血栓溶解量計算公式：

Wthr（wt%）=（m0-mt）/m0×100%

m0代表血栓初始質量（g），mt代表溶解t時刻血栓的質量（g）。結果見圖4-23。[49]

圖4-23（a）所示，在最開始的2.5h內，血栓在游離的納豆激酶和納豆激酶-OS（負載納豆激酶的可溶性原淀粉）溶液中分別溶解22%和25%，而含等量納豆激酶的納豆激酶-NP的磷酸鹽緩沖液僅溶解15%的血栓，生理鹽水中的血栓基本不發生溶解。這說明，納豆激酶-NP對納豆激酶具有一定的緩釋作用。納豆激酶-NP能通過靜電吸引負載納豆激酶。這種負載作用不但可以降低納豆激酶在體內的降解速率、延長其在體內的循環時間，還能控制釋放納豆激酶，因而降低血栓溶解速率，防止常用溶栓藥因溶栓速率太快而導致的大出血的發生。2.5h后，含游離納豆激酶溶液中的血塊溶解率開始下降，與生理鹽水中血栓的溶解率基本相同。由于可溶性原淀粉不帶負電荷，與納豆激酶之間的相互作用較弱，納豆激酶因裸露在淀粉顆粒表面而易失活，使納豆激酶-OS溶液的溶栓行為與游離納豆激酶相似。隨著溶栓時間的延長，納豆激酶-NP溶液中的血塊溶解率仍呈上升趨勢，其原因是陰離子型淀粉納米顆粒負載納豆激酶后對納豆激酶起到了一定的保護、緩釋作用。

（a）處理時間為24h；（b）處理時間為60h

■，納豆激酶-NP；▼，負載納豆激酶的可溶性原淀粉（納豆激酶-OS）；

〇，游離納豆激酶；△，對血栓的體外溶解行為

圖4-23（b）所示，當時間延長到60h，大部分血塊均已溶解。相反，由于陰離子淀粉納米顆粒對納豆激酶的保護和緩釋作用，納豆激酶-NP溶液中的血塊呈現出更快的溶解速率。

圖4-24[49]為納豆激酶-NP和游離納豆激酶在溶栓0.5h后的數碼照片。可以看出：兩試管中溶液均呈現血紅色，但含游離納豆激酶的溶液顏色更深，說明游離納豆激酶的溶栓速率更快，進一步證實了以上結論。因此，納豆激酶-NP能有效地提高納豆激酶的穩定性，延長納豆激酶在體內的循環時間，降低因溶栓速率過快對人體造成的不良反應。[49]