5.9　紅茂草生物堿化學(xué)成分的分離與鑒定

5.9.1　材料與方法

（1）材料

①藥材來源及鑒定

紅茂草原植物2008年5月采自甘肅，由蘭州大學(xué)馬志剛教授鑒定為原植物，植物標(biāo)本（No.ZY200802）保存于中國科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所，甘肅省天然藥物研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

②測試儀器及試劑

a.儀器：

熔點(diǎn)（mp）　X-4數(shù)字顯微熔點(diǎn)測定儀（Varian Inova-400）；

旋光　341（Perkin Eimer）旋光儀，溶劑為甲醇；

紫外UV　Shimadzu UV-240紫外儀；

紅外IR　Nicolet NEXUS 670 FT-IR；

核磁1D NMR和2D NMR　Varian INOVA-400MHz核磁共振儀，溶劑為CDCl3或DMSO-d6；

高分辨質(zhì)譜HR-ESI-MS　Bruker APEX II；

X-射線衍射　Bruker D8 SMART APEX II。

b.試劑：

石油醚（60～90℃）、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇為重蒸工業(yè)試劑；水為自制蒸餾水。柱色譜硅膠（200～300目）、薄層色譜硅膠（GF254）均為青島海洋化工廠產(chǎn)品，所用試劑均為分析純。

（2）方法

①生物堿的提取分離

取干燥紅茂草（5.0kg）粉碎，用95%乙醇提取3次（每次7d），減壓回收溶劑，得浸膏200.0g。浸膏混懸于2000mL 2%H2SO4水溶液中，依次氯仿萃取部分FA（12g），水溶液pH值用氨水調(diào)制9，氯仿萃取，萃取物FB（25g），F(xiàn)B用硅膠25g拌樣，500g硅膠上柱，氯仿-甲醇-三乙胺（10∶1∶0.1到2∶1∶0.1）梯度洗脫，流速，10mL/min，薄層色譜檢測，合并相同組分，得4個組分，F(xiàn)B1（5000mL，4.0g，100∶1），F(xiàn)B2（4000mL，4.0g，50∶1），F(xiàn)B3（5000mL，2.0g，25∶1）和FB4（3000mL，3.5g，5∶1）；FB1以40g硅膠，氯仿-甲醇-三乙胺（20∶1∶0.1）為洗脫液，上柱洗脫，得化合物1（6mg）和化合物2（8mg）；FB2以50g硅膠，氯仿-甲醇-三乙胺（10∶1∶0.1）為洗脫液重新柱色譜分離得到化合物3（10mg），化合物10（12mg）和4（7mg）；FB3以30g硅膠，氯仿-甲醇-三乙胺（8∶1∶0.1）為洗脫液重新柱色譜分離得到化合物5（34mg），化合物6（9mg）和化合物7（11mg）；FB4以50g硅膠，氯仿-甲醇-三乙胺（6∶1∶0.1）為洗脫液重新柱色譜分離得到化合物7（10mg），化合物8、9（12mg）和11（10mg）。

②異紫堇堿（化合物5）單晶衍射（X-Ray）實(shí)驗(yàn)

a.原料　柱色譜分離得到異紫堇堿純品15mg，經(jīng)TLC和NMR鑒別為單一純凈目標(biāo)化合物。

b.單晶培養(yǎng)條件　10mL青霉素小瓶，用3mL甲醇，加入0.1mL氫溴酸，將異紫堇堿溶解，半開口放置于4℃冰箱中30d形成棱柱狀單晶。

c.單晶衍射實(shí)驗(yàn)　用Bruker APEX Ⅱ面探測儀收集衍射強(qiáng)度數(shù)據(jù)，MoKα輻射，石墨單色器，晶體與IP板距離d=100mm，管壓50kV，管流20mA，ω掃描，最大2θ角為50.0°，掃描范圍為0～180°，回擺角度為5°，間隔為5°，掃描速度為1.5°/min，獨(dú)立衍射點(diǎn)為11009個，可觀察點(diǎn)（|F|2≥3σ|F|2）為3925個。在微機(jī)上用直接法解析晶體結(jié)構(gòu)，從E圖上獲得全部非氫原子位置，使用最小二乘法修正結(jié)構(gòu)參數(shù)和判別原子種類，使用幾何計(jì)算法和差值Fourier法獲得全部氫原子位置。

5.9.2　結(jié)果與分析

（1）紅茂草全草中分離的生物堿成分

紅茂草全草中分離的生物堿成分的中英文名見表5-29，化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖5-37。

（2）各化合物的物理常數(shù)和譜學(xué)數(shù)據(jù)

化合物1：無色結(jié)晶，1H-NMR（400MHz，CDCl3），δ：7.66（1H，d，J=8.4Hz，H-11），7.65（1H，s，H-4），7.47（1H，d，J=8.4Hz，H-12），7.28（1H，d，J=8.0Hz，H-10），7.09（1H，s，H-1），6.83（1H，d，J=8.0Hz，H-9），6.03（4H，d，J=5.2Hz，—O—CH2—O—），4.19（2H，s，H-6），2.61（3H，s，H—N—CH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3），δ：104.3（C-1），148.1（C-2），147.5（C-3），100.7（C-4），126.5（C-4a），142.5（C-4b），48.4（C-6），113.6（C-6a），144.6（C-7），147.1（C-8），107.2（C-9），116.2（C-10），127.2（C-10a），124.4（C-10b），120.3（C-11），124.0（C-12），130.8（C-12a），101.0（2，3-OCH2O—），101.3（7，8-OCH2O—），41.5（N—CH3）。

化合物2：無色結(jié)晶，1H-NMR（400MHz，CDCl3），δ：7.67（1H，d，J=8.8Hz，H-11），7.51（1H，s，H-4），7.46（1H，d，J=8.8Hz，H-12），7.31（1H，d，J=8.0Hz，H-10），7.09（1H，s，H-1），6.84（1H，d，J=8.0Hz，H-9），6.03（4H，d，J=5.2Hz，—O—CH2—O—），4.85（2H，dd，J=4.0，10.4Hz，H-6），2.62（3H，s，HNCH3），2.61（1H，dd，J=4.0，10.4Hz，H-1'a），2.30（1H，dd，J=4.0，10.4Hz，H-1'b），2.04（3H，s，3'-CH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3），δ：104.2（C-1），148.2（C-2），147.6（C-3），100.6（C-4），127.4（C-4a），139.4（C-4b），54.4（C-6），116.0（C-6a），144.2（C-7），147.1（C-8），107.6（C-9），116.4（C-10），125.6（C-10a），123.4（C-10b），120.0（C-11），124.0（C-12），131.0（C-12a），101.0（2，3-OCH2O—），100.5（7，8-OCH2O—），46.6（C-1'），207.3（2'-CO—），43.0（N—CH3），31.3（3'-CH3）。

化合物3：白色柱狀晶體，mp218～219℃，UV λmax（MeOH）（nm）：281，IR νmax（KBr） （cm-1）：3520，1882，1647，1628，1299；1H-NMR（400MHz，CDCl3），δ：7.65（1H，s，H-5），6.83（1H，d，J=8.0Hz，H-2），6.64（1H，d，J=8.0Hz），6.20（1H，s，H-8），3.82（3H，s，3-OCH3），3.78（1H，d，J=5.2Hz，H-9），3.82（3H，s，6-OCH3），3.34（1H，d，J=17.6Hz，H-10b），2.93（1H，dd，J=17.6，5.6Hz，H-10a），2.56（1H，dd，J=12.5，3.0Hz，H-16a），2.42（1H，dd，J=12.5，3.0Hz，H-16b），2.38（3H，s，N—CH3），2.34（1H，m，H-15），1.72（1H，m，H-15）；13C-NMR[100MHz，CO（CD3）2]，δ：1118.5（C-1），110.0（C-2），146.2（C-3），143.9（C-4），120.6（C-5），150.8（C-6），80.3（C-7），121.7（C-8），60.6（C-9），32.2（C-10），129.6（C-11），124.3（C-12），43.4（C-13），161.8（C-14），37.2（C-15），46.7（C-16），55.6（3-OCH3），53.9（6-OCH3），40.8（N—CH3）。

化合物4：紫紅色無定形粉末（甲醇），mp198～200℃；UV λmax（MeOH） （nm）：225，281，328；IR νmax（KBr） （cm-1）：2922，1640，1603，1564，1511，1087，1031，816；HRESI-MS m/z：354.1335[M]+（計(jì)算值C20H20NO5為354.1336）；1H-NMR（400MHz，CDCl3），δ：6.94（1H，s，H-3），3.16（2H，t，J=6.4Hz，H-4），3.50（2H，t，J=6.4Hz，H-5），6.96（1H，s，H-8），5.91（1H，s，H-10），3.19（3H，s，N-CH3），3.98（3H，s，1-OCH3），3.88（3H，s，2-OCH3），3.95（3H，s，11-OCH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3），δ：144.0（C-1），126.9（C-1a），119.4（C-1b），152.2（C-2），112.9（C-3），128.3（C-3a），29.3（C-4），50.3（C-5），150.3（C-6a），186.5（C-7），118.1（C-7a），98.3（C-8），178.4（C-9），105.2（C-10），163.9（C-11），136.5（C-11a），60.7（1-OCH3），56.5（2-OCH3），56.4（11-OCH3），40.2（N—CH3）。

化合物5：無色棱柱狀結(jié)晶，185～186℃，Dragendorff試劑顯橙紅色；1H-NMR（400MHz，CDCl3），δ：6.66（1H，s，H-3），3.00（2H，m，H-4），2.43（2H，m，H-5），2.67（1H，dd，J=16.4，3.6Hz，H-6a），2.82（1H，m，H-7），3.11（1H，dd，J=16.4，3.6Hz，H-7），6.79（1H，d，J=8.0Hz，H-8），6.82（1H，d，J=8.0Hz，H-9），2.49（3H，s，N—CH3），3.67（3H，s，1-OCH3），3.91（3H，s，2-OCH3），3.88（3H，s，10-OCH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3），δ：142.0（C-1），125.8（C-1a），129.9（C-1b），151.2（C-2），111.0（C-3），129.2（C-3a），29.3（C-4），52.7（C-5），62.0（C-6a），35.9（C-7），129.9（C-7a），118.9（C-8），110.8（C-9），149.4（C-10），143.9（C-11），120.1（C-11a），62.8（1-OCH3），55.8（2-OCH3），55.4（11-OCH3），43.9（N—CH3）。

化合物6：白色柱狀結(jié)晶，Dragendorff試劑顯橙紅色；1H-NMR（400MHz，CDCl3），δ：6.95（1H，s，H-3），3.00（2H，m，H-4），2.62（2H，m，H-5），3.69（1H，dd，J=16.4，3.6Hz，H-6a），3.16（1H，m，H-7α），3.11（1H，dd，J=16.4，3.6Hz，H-7β），6.88（1H，d，J=8.0Hz，H-8），6.98（1H，d，J=8.0Hz，H-9），3.15（3H，s，N—CH3），3.64（3H，s，2-OCH3），3.79（3H，s，10-OCH3），3.85（3H，s，11-OCH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3），δ：143.7（C-1），122.9（C-1a），124.7（C-1b），152.4（C-2），111.6（C-3），126.2（C-3a），25.5（C-4），51.2（C-5），62.0（C-6a），31.7（C-7），126.9（C-7a），118.8（C-8），111.4（C-9），144.0（C-10），148.7（C-11），118.9（C-11a），61.6（2-OCH3），55.9（10-OCH3），61.2（11—OCH3），43.4（N—CH3）。

化合物7：白色結(jié)晶，Dragendorff試劑顯橙紅色；1H-NMR（400MHz，DMSO-d6），δ：6.62（1H，s，H-3），3.17（2H，m，H-4），3.03（2H，m，H-5），2.29（1H，t，J=13.2，2.0Hz，H-6a），3.16（1H，m，H-7α），2.67（1H，dd，J=13.2，2.0Hz，H-7β），6.77（1H，d，J=8.0Hz，H-8），6.63（1H，d，J=8.0Hz，H-9），2.61（3H，s，N—CH3），3.72（6H，s，1，11-OCH3）；13C-NMR（100MHz，DMSO-d6），δ：144.2（C-1），121.8（C-1a），125.4（C-1b），149.0（C-2），110.0（C-3），128.3（C-3a），27.1（C-4），52.1（C-5），62.5（C-6a），34.0 （C-7），120.9（C-7a），116.7（C-8），110.3（C-9），149.0（C-10），145.9（C-11），120.4（C-11a），55.7（1-OCH3），55.5（11-OCH3），42.2（N—CH3）。

化合物8：白色粉末，Dragendorff試劑顯橙紅色；化合物8、9為一對應(yīng)異構(gòu)體，在1H-NMR譜中可以清晰看到二者的比例關(guān)系為1∶2，兩個化合物在C-14位存在順反異構(gòu)，二者沒有在TLC中得到分離，為一混合物，其HR-ESI-MS m/z 354.1174[M]+（計(jì)算值C20H20NO5為354.1336）；1H-NMR（400MHz，CDCl3），δ：7.08（1H，s，H-1），6.83（1H，s，H-4），3.66（2H，m，H-5），3.89（2H，m，H-6），4.05（2H，d，J=17.6Hz，H-8），6.90（1H，d，J=8.4Hz，H-11），6.73（1H，d，J=8.4Hz，H-12），3.64（2H，m，H-13），6.05（4H，d，J=8.8Hz，H-15，16-OCH2O—），2.92（3H，s，N—CH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3），δ：105.5（C-1），146.4（C-2），147.1（C-3），109.1（C-4），125.5（C-4a），22.9（C-5），52.5（C-6），54.2（C-8），62.4（C-8a），142.0（C-9），146.4（C-10），108.5（C-11），121.4（C-12），122.6（C-12a），38.5（C-13），92.4（C-14），127.4（C-14a），101.6（C-15，16），44.0（N—CH3）。

化合物9：化合物9與化合物8為一對應(yīng)異構(gòu)體；1H-NMR（400MHz，CDCl3），δ：7.33（1H，s，H-1），6.89（1H，s，H-4），3.66（2H，m，H-5），3.86（2H，m，H-6），4.54（2H，d，J=6.4Hz，H-8），6.98（1H，d，J=8.4Hz，H-11），6.82（1H，d，J=8.4Hz，H-12），3.64（2H，m，H-13），6.08（4H，d，J=8.8Hz，H-15，16-OCH2O—），3.32（3H，s，N—CH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3），δ：106.2（C-1），147.0（C-2），148.1（C-3），108.1（C-4），123.2（C-4a），23.3（C-5），53.3（C-6），54.7（C-8），108.4（C-8a），143.5（C-9），145.6（C-10），108.2（C-11），121.9（C-12），122.2（C-12a），34.3（C-13），91.6（C-14），125.5（C-14a），101.8（C-15，16），42.1（N—CH3）。

化合物10：無色結(jié)晶，mp208～209℃，EI-MSm/z：353[M]+；IR νmax（KBr） （cm-1）：2789，1673，1613，1508，1084；1H-NMR（400MHz，CDCl3），δ：6.88（1H，s，H-4），6.65（1H，d，J=8.4，Hz，H-11），6.64（1H，d，J=8.4Hz，H-12），6.62（1H，s，H-1），5.92（2H，s，—OCH2O—），5.90（2H，s，—OCH2O—），1.89（3H，s，N—CH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3），δ：110.6（C-1），148.0（C-2），146.3（C-3），108.1（C-4），136.1（C-4a），31.7（C-5），57.8（C-6），50.8（C-8），117.8（C-8a），146.0（C-9），145.9（C-10），106.7（C-11），125.0（C-12），128.9（C-12a），46.4（C-13），194.1（C-14），132.7（C-14a），101.2（2，3-OCH2O—），100.8（9，10-OCH2O—），41.4（N—CH3）。

化合物11：白色結(jié)晶，mp162～165℃，IR νmax（KBr） （cm-1）：3423，2893，2788，1658，1620，1596，1501，1433，1340，1296；ESI-MS m/z：370[M+H]+；1H-NMR（400MHz，CDCl3），δ：6.93（1H，s，H-4），6.89（1H，d，J=8.4，Hz，H-11），6.77（1H，d，J=8.4Hz，H-12），6.61（1H，s，H-1），5.92（2H，s，—OCH2O—），3.83（3H，s，10-OCH3），3.76（3H，s，9-OCH3），3.60（2H，s，H-8），3.32～3.46（2H，m，H-6），3.45～2.78（2H，m，H-5），1.90（2H，s，H-13），1.86（3H，s，N—CH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3），δ：110.3（C-1），148.0（C-2），146.1（C-3），109.2（C-4），135.7（C-4a），32.2（C-5），57.4（C-6），50.3（C-8），128.4（C-8a），151.5（C-9），147.3（C-10），110.6（C-11），127.6（C-12），129.3（C-12a），46.0（C-13），192.8（C-14），132.6（C-14a），101.2（—OCH2O—），60.7（—OCH3），55.6（—OCH3），41.2（N—CH3）。

（3）異紫堇堿（化合物5）X-Ray實(shí)驗(yàn)結(jié)果

化合物5的單晶呈無色透明柱狀，衍射實(shí)驗(yàn)用晶體體積大小為0.28mm×0.27mm×0.24mm，屬正交晶系，空間群為P212121，晶胞參數(shù)：a=6.896（5）?，b=11.586（8）?，c=26.490（18）?。晶胞體積V=2116（2）?3，晶胞內(nèi)分子數(shù)z=4。最終可靠因子Rf =0.0563，Rw =0.0915（w=1/σ|F|2）。最終確定不對稱單位化學(xué)計(jì)量式為C20H23BrNO5，計(jì)算相對分子質(zhì)量為437.30，計(jì)算晶體密度1.372mg/m3。異紫堇堿的X-Ray衍射晶體結(jié)構(gòu)和晶胞堆積圖，如圖5-38、圖5-39所示。其原子坐標(biāo)參數(shù)及等價溫度因子，以及成鍵參數(shù)見表5-30～表5-32。

5.9.3　結(jié)論

通過一系列檢測，最終從紅茂草藥物中分離鑒定出11種生物堿：二氫血根堿、6-丙酮基-二氫血根堿、青風(fēng)藤堿、禿瘡花堿、異紫堇堿、紫堇堿、N-甲基蓮葉桐文堿、反式普羅托品季銨鹽、順式普羅托品季銨鹽、原阿片堿、別隱品堿。

化合物1：無色結(jié)晶，易溶于氯仿、丙酮。δH6.85（d，J=8.0，1H）、7.30（d，J=8.0，1H）、7.68（d，J=8.4，2H）、7.48（d，J=8.4，2H）表明化合物1具有2個苯環(huán)片段。由13C-NMR、DEPT可知化合物1有20個碳原子，3個亞甲基，11個季碳。故化合物1含20個碳原子，3個亞甲基，10個季碳。化合物核磁共振數(shù)據(jù)見表5-33，化合物1確定為二氫血根堿。

化合物2：無色結(jié)晶，噴改良的碘化鉍鉀后顯示為橘紅色斑點(diǎn)，有可能為生物堿類化合物。在δ2.61處一個單峰且包含3個氫，表明含有CH3，在d6.03處有1組峰且含4個氫，故可能為2組—OCH2O—，在d6.8～d7.7處為芳環(huán)上氫的特征信號：由δ6.85（1H，d，J=8.0Hz），δ7.30（1H，d，J=8.4Hz），δ7.46（1H，d，J=8.8Hz），δ7.68（1H，d，J=8.4Hz）可知芳環(huán)上有2組氫處于鄰位。由13C-NMR及DEPT可知，該化合物含有3個亞甲基，10個季碳。該化合物的1H-NMR、13C-NMR測量值表5-34。

化合物2的骨架和二氫血根堿的骨架結(jié)構(gòu)很相似，故通過與二氫血根堿13C-NMR文獻(xiàn)值比較，即可確定化合物2中大部分碳所對應(yīng)的化學(xué)位移值。其中C-6由于從CH2變?yōu)榱薈H，且受羰基吸電子效應(yīng)的影響，故其化學(xué)位移向低場。2-羰基丁酮中3位上碳的化學(xué)位移為d45.2，化合物2的丙酮基中的仲碳（—CH2CO）所處位置與2-羰基丁酮3位上的碳類似，故其化學(xué)位移應(yīng)為d46.6。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)一致，化合物2確定為6-丙酮基-5，6-二氫血根堿。

化合物3（圖5-40）　白色柱狀晶體，mp218～219℃；碘-碘化鉍鉀生物堿試劑反應(yīng)陽性；UV在242nm，281nm有最大吸收，IR顯示在3525cm-1，1882cm-1，1646cm-1處有最大吸收波長，提示該化合物帶有酚羥基和羰基以及苯環(huán)管能團(tuán)，13C-NNR高場區(qū)給出19個碳信號，DEPT區(qū)分該化合物具有3個亞甲基（CH2）信號，1個氮甲基信號（40.8），2個甲氧基信號，1個次甲基（CH）信號（60.6）和1個季碳信號（43.4），低場區(qū)4個芳環(huán)碳信號和7個芳環(huán)季碳信號，其中季碳信號中有1個為羰基碳信號，據(jù)此可以推斷該化合物不具有兩個芳香環(huán)骨架，所以可以推斷該化合物不屬于阿普菲類和芐基異喹啉類生物堿，可能屬于防己堿或青風(fēng)藤堿，不飽和區(qū)有2個共軛雙鍵可以確定該化合物為青風(fēng)藤堿。1H-NMR譜中低場區(qū)有1對偶合的芳環(huán)質(zhì)子信號（6.83，1H，d，J=8.0Hz）和6.65，1H，d，J=8.0Hz，和2個單峰不飽和質(zhì)子信號7.64（1H，s），6.20（1H，s）；其1H-NMR，13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)中青風(fēng)藤堿的數(shù)據(jù)完全一致，故該化合物鑒定為青風(fēng)藤堿，該化合物為首次從該屬植物中分離得到（表5-35）。

化合物4　紫紅色粉末狀固體，碘-碘化鉍鉀生物堿試劑反應(yīng)陽性，高分辨質(zhì)譜HRESI-MS給出分子式C20H19NO5（質(zhì)荷比m/z為354.1335[M+H]+，計(jì)算值為C20H20NO5：354.1336）；紅外光譜給出芳環(huán)官能團(tuán)（1603cm-1，1564cm-1），碳氮雙鍵伸縮振動（CN）信號為1680cm-1，共軛羰基官能團(tuán)信號1640cm-1；紫外光譜在225（3.55）nm，281（2.78）nm和328（3.01）nm處有最大吸收波長，提示該化合物為阿普菲類生物堿類化合物。化合物4的1H-NMR提示有3個單峰芳香質(zhì)子信號6.96（H-8），6.94（H-3），5.91（H-11），分別歸屬為H-8，3和H-11，三個甲氧基質(zhì)子信號3.98（s，3H），3.95（s，3H）3.88（s，3H）和一個氮取代甲基信號3.19（s，3H），通過二維gCOSY譜可以確定有兩個相鄰的亞甲基質(zhì)子信號化學(xué)位移分別在3.16和3.50，每組信號為3重峰，積分為2，提示有2個氫，偶合常數(shù)為6.4Hz，13C-NMR（表5-36）提示化合物除含有三個甲氧基和一個氮甲基信號（40.2）外，還有20個碳原子；化合物碳譜中低場區(qū)有一羰基碳信號186.5，提示該化合物羰基阿普菲類生物堿類化合物；在二維HMBC譜中甲氧基質(zhì)子信號3.98，3.88和3.95與C-1（144.0），C-2（152.2）和C-11（163.9）有遠(yuǎn)程相關(guān)，故可以確定甲氧基的連接位置。H-3質(zhì)子信號和2位甲氧基質(zhì)子信號的NOESY相關(guān)可以確定C-2位的甲氧基連接位置，B環(huán)中碳氮雙鍵的連接位置（CN）由H-5和C-3a，C-6a位置碳和氮甲基質(zhì)子與C-5、C-6a位碳的HMBC遠(yuǎn)程相關(guān)確定；1H-NMR譜中在9～10位置沒有羥基質(zhì)子信號，IR譜中沒有羥基伸縮振動峰，高分辨質(zhì)譜都說明化合物1中C-9位羥基以及負(fù)離子形式存在；1H-NMR譜中C-10質(zhì)子信號為5.91，比普通芳環(huán)質(zhì)子處在較高場區(qū)，說明C-9位羥基副離子的供電子效應(yīng)，H-10位質(zhì)子信號位置可以由H-10和11-OMe質(zhì)子的NOESY相關(guān)和H-10與C-10，9，11a的HMBC相關(guān)譜進(jìn)一步確定；B環(huán)中C-4、5的連接位置由H-4與C-3a、3、1b以及H-5與C-3a、6a的HMBC相關(guān)確定；C-7位羰基的位置有H-8與C-7a、7的HMBC遠(yuǎn)程相關(guān)確定。這樣化合物4的分子結(jié)構(gòu)得以確定，命名為禿瘡花堿，該化合物為一新化合物。其主要的HMBC和NOESY相關(guān)如圖5-41所示。

化合物5（圖5-42）　無色柱狀結(jié)晶，mp185℃，碘-碘化鉍鉀生物堿試劑反應(yīng)陽性，提示該化合物為一生物堿，13C-NMR提供20個碳信號，DEPT譜區(qū)分3個亞甲基信號（CH2），1個氮取代甲基信號（N—CH3），3個甲氧基信號（CH3O），1個次甲基信號（CH），3個氫取代芳香碳信號和9個取代芳香環(huán)碳信號，1H-NMR低場區(qū)給出一對偶合的芳環(huán)質(zhì)子信號和一個單峰芳環(huán)質(zhì)子信號，結(jié)合1H-NMR，13C-NMR、DEPT可以確定化合物分子式為C20H23NO4，其1H-NMR，13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)中異紫堇堿數(shù)據(jù)完全一致（表5-37），通過X-Ray單晶衍射實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證化合物5為異紫堇堿（圖5-38、圖5-39），故化合物5鑒定為異紫堇堿。

化合物6（圖5-43）　白色柱狀結(jié)晶，碘-碘化鉍鉀生物堿試劑反應(yīng)陽性，提示該化合物為一生物堿，13C-NMR提供20個碳信號，DEPT譜區(qū)分3個亞甲基信號（CH2），1個氮取代甲基信號（N—CH3），3個甲氧基信號（CH3O），1個次甲基信號（CH），3個氫取代芳香碳信號和9個取代芳香環(huán)碳信號，1H-NMR低場區(qū)給出一對偶合的芳環(huán)質(zhì)子信號和一個單峰芳環(huán)質(zhì)子信號，結(jié)合1H-NMR，13C-NMR、DEPT可以確定化合物分子式為C20H23NO4，其1H-NMR，13C-NMR譜圖與化合物5極為相似，可見化合物3也為阿普菲類生物堿，其1H-NMR，13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)中紫堇堿數(shù)據(jù)完全一致（表5-38），故化合物6鑒定為紫堇堿。

化合物7：白色結(jié)晶，dragendorff試劑顯橙紅色顯示該化合物可能為生物堿類化合物；由1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）、13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）和DEPT譜圖可知，該化合物分子中含有21個碳、2個亞甲基、2個甲氧基。該化合物的1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）、13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）該化合物的實(shí)際測量值見表5-39，數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)基本一致，該化合物7確定為N-甲基蓮葉桐文堿。

化合物8：白色粉末，dragendorff試劑顯橙紅色；化合物8與化合物9為一對應(yīng)異構(gòu)體，在1H-NMR譜中可以清晰地看到二者的比例關(guān)系為1∶2，兩個化合物在C-14位存在順反異構(gòu)體，二者沒有在TLC中得到分離，為一混合物，其HRESI-MS m/z 354.1174[M]+（計(jì)算值C20H20NO5為354.1336）；與原阿片堿的1H-NMR（CDCl3 400MHz）和13C-NMR（CDCl3 100MHz）比較及文獻(xiàn)，將各個峰歸屬如下，δ：7.08（1H，s，H-1），6.83（1H，s，H-4），3.66（2H，m，H-5），3.89（2H，m，H-6），4.05（2H，d，J=17.6Hz，H-8），6.90（1H，d，J=8.4Hz，H-11），6.73（1H，d，J=8.4Hz，H-12），3.64（2H，m，H-13），6.05（4H，d，J=8.8Hz，H-15，16，—OCH2O—），2.92（3H，s，N—CH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3）：105.5（C-1），146.4（C-2），147.1（C-3），109.1（C-4），125.5（C-4a），22.9（C-5），52.5（C-6），54.2（C-8），62.4（C-8a），142.0（C-9），146.4（C-10），108.5（C-11），121.4（C-12），122.6（C-12a），38.5（C-13），92.4（C-14），127.4（C-14a），101.6（C-15，16），44.0（N—CH3）。化合物8確定為順式普羅托品季銨鹽。

化合物9：化合物9與化合物8為一對應(yīng)異構(gòu)體混合物；譜圖上各個峰的歸屬：1H-NMR（CDCl3 400MHz），δ：7.33（1H，s，H-1），6.89（1H，s，H-4），3.66（2H，m，H-5），3.86（2H，m，H-6），4.54（2H，d，J=6.4Hz，H-8），6.98（1H，d，J=8.4Hz，H-11），6.82（1H，d，J=8.4Hz，H-12），3.64（2H，m，H-13），6.08（4H，d，J=8.8Hz，H-15，16，—OCH2O—），3.32（3H，s，N—CH3）；13C-NMR（100MHz，CDCl3），δ：106.2（C-1），147.0（C-2），148.1（C-3），108.1（C-4），123.2（C-4a），23.3（C-5），53.3（C-6），54.7（C-8），108.4（C-8a），143.5（C-9），145.6（C-10），108.2（C-11），121.9（C-12），122.2（C-12a），34.3（C-13），91.6（C-14），125.5（C-14a），101.8（C-15，16），42.1（N—CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)一致，鑒定化合物9為反式普羅托品季銨鹽。

化合物10（圖5-44）：白色晶體，mp208～209℃，碘-碘化鉍鉀生物堿試劑反應(yīng)陽性，提示該化合物為一生物堿，熔點(diǎn)mp204～206℃。13C-NMR提供20個碳信號，DEPT提示高場區(qū)1個氮甲基信號（41.4），4個亞甲基信號，低場區(qū)有4個氧取代芳環(huán)碳信號和4個未取代芳環(huán)碳信號，以及4個碳取代芳環(huán)碳信號以及1個羰基碳信號，1H-NMR中芳環(huán)質(zhì)子有1對偶合和2個單峰信號，由1H-NMR，13C-NMR以及DEPT譜可以確定化合物10的分子式為C20H19NO5，其NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)中原阿片堿（普羅托品）的數(shù)據(jù)基本一致，故化合物10鑒定為原阿片堿（普羅托品）。

化合物11（圖5-45）：無色柱晶，mp162～165℃，碘-碘化鉍鉀生物堿試劑反應(yīng)陽性，提示該化合物為一生物堿；13C-NMR提供21個碳信號，DEPT提示高場區(qū)1個氮甲基信號（41.2），3個亞甲基信號，低場區(qū)有4個氧取代芳環(huán)碳信號和4個未取代芳環(huán)碳信號，以及4個碳取代芳環(huán)碳信號及1個羰基碳信號，1H-NMR中芳環(huán)質(zhì)子有1對偶合和2個單峰信號，由1H-NMR，13C-NMR及DEPT譜可以確定化合物4的分子式為C21H23NO5；其NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)完全一致（表5-40），故化合物11鑒定為別隱品堿。