4.2 植物材料的消毒滅菌

4.2.1 消毒殺菌劑的配制

植物材料消毒滅菌的要求是應(yīng)該把附著于材料表面的微生物殺死，同時又盡量不傷害植物材料中的活細(xì)胞。常用的消毒劑有乙醇、次氯酸鹽、升汞（HgCl2）等。70%～75%（V/V）乙醇的殺菌力和穿透力強(qiáng)，但處理時間要短，控制在30～60s以內(nèi)，否則容易殺死植物細(xì)胞。次氯酸鹽殺菌劑常用的有漂白粉，即次氯酸鈣[Ca（ClO）2]，使用20%（m/V）澄清水溶液；也可用次氯酸鈉（NaClO）水溶液。一般市售商品漂白劑含5.25% NaClO，加水稀釋至10倍（約0.5%）用作消毒液。0.1%（m/V）HgCl2消毒液殺菌力比NaClO強(qiáng)，但附著在植物材料上的汞離子不易洗脫，消毒后的植物材料必須用無菌水多洗幾次。HgCl2有劇毒，消毒后的廢液容易污染環(huán)境，若非必須應(yīng)盡量少用。

有些植物器官表面有濃密的表皮毛，或者表面有脂類物質(zhì)或蠟質(zhì)，那就要在水溶性消毒液中加幾滴洗滌劑，減少表面張力，以利于浸濕帶有表皮毛、脂類物質(zhì)或蠟質(zhì)的植物材料的表面。

4.2.2 植物材料消毒

向裝有洗凈的植物材料的燒杯內(nèi)倒入70%～75%乙醇，浸沒材料不超過1min，傾去乙醇，換上NaClO水溶液消毒（在此過程中將植物材料連同消毒液轉(zhuǎn)移至無菌燒杯中并放進(jìn)超凈工作臺內(nèi)）15～20min后，傾去消毒液，用無菌水洗3次，每次2min。對于污染嚴(yán)重的植物材料，可選用0.1% HgCl2消毒，也可連續(xù)兩次使用NaClO消毒，或一次NaClO消毒后再用HgCl2消毒（可靈活掌握，適當(dāng)縮短滅菌時間）。注意防止消毒過度損傷植物組織；用HgCl2消毒后，需經(jīng)無菌水洗滌5次。

使用消毒液的種類和處理的時間因植物種類、器官類型和生長狀況而異。對于有保護(hù)結(jié)構(gòu)的植物材料，如帶有鱗片的芽、覆蓋著花冠的雄蕊和雌蕊、干燥種子，可適當(dāng)延長處理時間；桉樹種子對HgCl2敏感，極易大幅度降低萌發(fā)率，應(yīng)降低其使用濃度至0.05%或改用NaClO水溶液消毒。