4.3 接種

接種前1h打開接種室或超凈工作臺內的紫外燈，照射30min。紫外燈開啟后人必須離開，因為強烈的紫外線傷害人的眼睛和皮膚，紫外線照射氧氣產生的臭氧（O3）傷害呼吸系統。紫外燈開啟后也不能將植物材料放在它照射的范圍內，以免引起突變。關閉紫外燈后，打開超凈工作臺的氣泵吹風15min以除去紫外線照射所產生的O3并使無菌空氣充滿超凈工作臺。準備進行接種的工作人員必須先用肥皂洗手，接著用70%～75%乙醇浸濕的棉球將手擦凈，然后再用浸透0.1%的苯扎溴銨（benzalkonium bromide）溶液的紗布擦拭超凈工作臺的臺面，再接著用浸透70%～75%乙醇的脫脂棉擦拭。隨后將實驗所需各類無菌器材擺放于不影響無菌過濾空氣通道的側面，為無菌操作做好準備。在無菌操作期間必須使氣泵連續工作。

將經過消毒和無菌水洗滌的植物材料放置于墊有濾紙的無菌培養皿中，加少許無菌水潤濕濾紙。取一50mL的無菌燒杯，倒入半杯無菌水，用于冷卻操作過程中燒熱的鑷子和解剖刀。在接種室或超凈臺上用無菌鑷子取出已消毒并用無菌水洗滌過的植物材料，放入墊有濾紙的無菌培養皿內。在酒精燈火焰上灼燒解剖刀，用無菌水降溫后切去末端切口附近被消毒劑浸透的部分。再根據需要將植物材料切成小塊。用無菌鑷子將這些小塊轉移到含培養基的培養皿或錐形瓶內，這些用作培養物的小塊就是外植體。給培養皿或錐形瓶加封口膜后放置于培養架上。根據外植體的種類和特性放于光照下或暗處培養。

接種時仍然要嚴防污染。要注意無菌空氣的吹向，在進風口不能存放非無菌器皿；操作者最好戴上口罩，以免呼吸道排出的微生物進入培養皿；注意培養基表面不能積水，防止微生物隨水流擴散。每切割幾次或轉移幾塊材料后須灼燒解剖刀或鑷子。灼燒要到火候，特別是第一次接種時，凡伸入培養瓶的部分都必須充分灼燒。