- 植物學實驗技術教程:組織培養(yǎng)、細胞化學和染色體技術
- 尤瑞麟
- 1099字
- 2019-11-26 14:26:20
2 組織培養(yǎng)實驗室及儀器設備和器具的洗滌、滅菌
2.1 組織培養(yǎng)實驗室
組織培養(yǎng)實驗室[1][2]與微生物實驗室總體上相似。它需要具備培養(yǎng)用具的洗滌和滅菌、培養(yǎng)基的配制和滅菌、外植體的處理和接種、為培養(yǎng)物提供無菌操作的條件和相對穩(wěn)定的生長環(huán)境。為此可以根據實際,分別建立幾個功能實驗室,或在一個大實驗室內劃分出幾個功能區(qū)。
2.1.1 化學實驗室
化學實驗室是組織培養(yǎng)實驗室最基本的設施,應安裝有自來水、洗物池和通風櫥,并還需配備:藥品柜、藥品架(各種化學藥品、洗滌劑、消毒劑);玻璃器皿(燒杯、量筒、容量瓶、滴瓶、錐形瓶、洗液缸、移液管、培養(yǎng)皿、試管、離心管等)、蒸餾水;常用儀器如天平、pH計、冰箱、微波爐、高壓滅菌鍋(圖2-1)、電爐、濾器及微孔濾膜(圖2-2)、離心機、電動攪拌器等。這些都是很普通的和常見的,為植物材料洗滌、培養(yǎng)基配制和消毒滅菌所需。

圖2-1 高壓滅菌鍋
A.人工監(jiān)控的舊式滅菌鍋;B.自動控制的高壓滅菌鍋

圖2-2 濾器及微孔濾膜
A.不銹鋼濾網;B.自制玻璃漏斗及塑料濾網;
C.國產濾器及微孔濾膜;D.用于收集濾液的細口瓶
2.1.2 接種室
接種室內最主要的是無菌操作間(sterile room),配備超凈工作臺(laminar air-flow cabi-net)(圖2-3)、紫外燈、消毒酒精瓶、消毒液(NaClO、升汞)、無菌水、接種器具(包括鑷子、剪刀、解剖刀、刮鏟、接種針等)(圖2-4)。

圖2-3 超凈工作臺

圖2-4 接種器具
A.解剖刀;B.刮鏟;C1.中部彎曲鑷子;C2.彎尖鑷子;C3.直尖鑷子;D.藥勺(清除污染用); E.剪刀
無菌操作間應建在清潔、干燥的地方,工作時不能有流動的空氣,以免微生物及其孢子傳播造成污染。最好在無菌操作間入口處設置緩沖間,并配有潔凈的工作服和工作帽。選擇超凈工作臺時要注意經過濾的清潔空氣的送風方向:從接種者前方來風者最好,便于安放各種用具;若遇頂部送風或左邊送風者,要調整用具安放位置,保證靠近來風方向有一個不受干擾的無菌操作區(qū)。新購的及已經使用了一年以上的超凈工作臺使用前要進行污染率測試。方法是:選用一組具有含糖的基本培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿放入已經完成基本消毒程序的超凈工作臺內,打開培養(yǎng)皿蓋,分別經5、10、15和20min后蓋好,放入25~37℃恒溫箱,數日后記錄菌落數。經過比較,污染率低的超凈工作臺可以立即使用,污染率高的超凈工作臺要請生產廠家更換空氣過濾板后再經測試合格才能使用。超凈工作臺可以單獨放置在不易受到氣流干擾的實驗室的一角,也可以放置在無菌操作間內,這樣雙重保護可以大大減少來自空氣的污染,對原生質體培養(yǎng)和細胞的顯微操作有利。
2.1.3 培養(yǎng)室
培養(yǎng)室配備有培養(yǎng)架(圖2-5),架上安裝熒光燈管;光強度為300~3000lx,溫度控制在25~28℃。一般熒光燈管發(fā)射的光譜偏藍色光,培養(yǎng)植物還需要配合使用一定數量發(fā)射偏紅色光的燈管,以符合植物光合作用的要求。

圖2-5 培養(yǎng)架