第七章　內(nèi)臟系統(tǒng)藥物實驗

第一節(jié)　硝酸甘油的擴張血管作用

【實驗?zāi)康摹?/span>

觀察硝酸甘油對血管的擴張作用，了解其臨床用途。

【實驗原理】

硝酸酯類藥物能舒張全身靜脈和動脈，使心臟前、后負荷降低，心肌耗氧量減少；還能選擇性舒張冠狀動脈的輸送血管和側(cè)支血管，改善缺血區(qū)的血液供應(yīng)，用于治療心絞痛。因硝酸甘油脂溶性高，故本實驗通過直接經(jīng)皮膚用藥，觀察其對兔耳血管的擴張作用。

【實驗動物】

家兔（以白色皮毛為佳）。

【實驗條件】

1.藥品

硝酸甘油注射液、生理鹽水。

2.器材

兔固定器、注射器、棉簽、手電筒、測量尺。

【實驗方法】

1.取家兔1只，放入兔固定器內(nèi)。在手電筒光的透照下，用測量尺分別測定家兔兩側(cè)耳部某一選定血管（以較明顯、粗大血管為好）的寬度。

2.用注射器吸取硝酸甘油注射液，滴涂2～3滴在上述一側(cè)選定血管周圍，并用棉簽均勻涂抹。2分鐘后用測量尺測定其寬度。

3.用同樣方法將生理鹽水滴涂在另一側(cè)選定血管周圍，并用棉簽均勻涂抹。2分鐘后用測量尺測定其寬度。

【實驗結(jié)果】

見表1-7-1-1。

【注意事項】

測定血管寬度時最好由同一人操作，以免誤差太大。

【思考題】

1.硝酸甘油在臨床上有哪些用途？

2.硝酸甘油為什么常常舌下給藥？

第二節(jié)　強心苷對離體蛙心的強心作用

【實驗?zāi)康摹?/span>

1.學習離體蛙心灌注技術(shù)。

2.觀察強心苷對離體蛙心的強心作用及其與鈣離子的協(xié)同作用。

【實驗原理】

強心苷是一類選擇性作用于心臟的藥物，具有正性肌力作用。強心苷類與心肌細胞膜上的Na+-K+-ATP酶結(jié)合后，使酶活性下降，使細胞內(nèi)Na+增加，通過Na+-Ca2+交換，使細胞內(nèi)Ca2+增加，從而增強心肌的收縮力。

【實驗動物】

青蛙。

【實驗條件】

1.藥品

0.025%毒毛花苷K、任氏液、低鈣任氏液、1%氯化鈣溶液。

2.器材

BL-420生物功能實驗系統(tǒng)、張力傳感器、探針、蛙板、蛙心夾、斯氏蛙心插管、鐵架臺、雙凹夾、試管夾、手術(shù)器械、燒杯（5mL、50mL）、注射器（1mL）、吸管。

【實驗方法】

1.離體蛙心標本制備

（1）取青蛙1只，用探針破壞腦和脊髓，仰位固定于蛙板之上。剪開胸廓、心包膜暴露心臟，穿線結(jié)扎右主動脈，于左主動脈穿線備用。

（2）在左主動脈上剪一“V”形小口，將有任氏液的蛙心插管插入，并在心臟收縮時（主動脈瓣開放）通過主動脈球，轉(zhuǎn)向左后方插入心室，見到插管內(nèi)的液面隨著心搏上下波動后，將松結(jié)扎緊并固定于套管小鉤上。用滴管吸去套管內(nèi)血液，換2～3次任氏液至洗凈余血，以防止套管堵塞。

（3）剪斷兩根動脈，持套管提起心臟，從靜脈竇以下把其余血管一起結(jié)扎，分離周圍組織，在結(jié)扎處下剪斷血管，使心臟離體。用任氏液連續(xù)換洗直至無血色，套管內(nèi)保留1.5mL左右的任氏液。

2.固定離體蛙心

將蛙心套管固定于鐵架臺，用系有長線的蛙心夾夾住心尖，線的另一端連接張力傳感器，打開BL-420生物功能實驗系統(tǒng)，適當調(diào)節(jié)張力，描記正常的心臟搏動曲線。

3.給藥并觀察

待心臟活動穩(wěn)定后，依次加入下列藥物，注意觀察心率、振幅、節(jié)律的變化。

（1）套管內(nèi)換入等容積低鈣任氏液，制作心功能不全的病理模型。

（2）當心肌收縮顯著減弱時，向套管內(nèi)滴加0.025%毒毛花苷K0.1～0.2mL，并觀察其正性肌力作用。

（3）作用明顯時，再向插管內(nèi)加入1%氯化鈣0.1mL。

（4）待作用穩(wěn)定后，每隔30秒向插管內(nèi)加0.025%毒毛花苷K0.1mL，直至心臟停搏。

【實驗結(jié)果】

見表1-7-2-1。

【注意事項】

1.制備標本時，應(yīng)小心插管，避免損傷心臟（包括靜脈竇）。

2.勿混用加藥滴管，加藥量根據(jù)反應(yīng)敏感情況，應(yīng)由小到大，加藥后立即用滴管攪勻。

3.隨時滴加任氏液于心臟表面，以保持心肌細胞存活。

【思考題】

1.強心苷增強心肌收縮力的機制是什么？

2.強心苷有哪些臨床用途？

第三節(jié)　利多卡因的抗心律失常作用

【實驗?zāi)康摹?/span>

1.觀察利多卡因?qū)β然^誘發(fā)的心律失常的對抗作用。

2.聯(lián)系利多卡因的臨床用途。

【實驗原理】

氯化鋇增加浦氏纖維Na+內(nèi)向電流，提高舒張期去極化的速率，從而誘發(fā)異位節(jié)律。利多卡因通過阻滯心肌細胞膜Na+通道而產(chǎn)生抗心律失常作用。

【實驗動物】

家兔。

【實驗條件】

1.藥品

3%戊巴比妥鈉溶液、0.4%氯化鋇溶液、0.5%利多卡因溶液。

2.器材

心電圖機、BL-420生物功能實驗系統(tǒng)、電子秤、兔手術(shù)臺、注射器。

【實驗方法】

1.取家兔1只，稱重，3%戊巴比妥鈉溶液1mL/kg靜脈注射麻醉，仰位固定于手術(shù)臺上。

2.麻醉兔后將針形電極分別插入兔四肢前側(cè)皮下，然后啟動BL-420生物功能實驗系統(tǒng)，信號輸入心電通道，選擇Ⅱ?qū)?lián)，調(diào)定顯速為25mm/s，增益為1/4mV/cm，監(jiān)視心電圖變化，待穩(wěn)定后給藥。

3.靜脈注射氯化鋇4mg/kg，做好給藥標記，記錄心律變化，注意是否出現(xiàn)期前收縮或室性心動過速。

4.當出現(xiàn)心律失常時，立即緩慢靜脈注射0.5%利多卡因5mg/kg，記錄給藥時間和心電圖變化，觀察心律失常有無改善。若10分鐘內(nèi)無明顯改善，可再次緩慢靜脈注射半量利多卡因。

【實驗結(jié)果】

見表1-7-3-1。

【注意事項】

1.針形電極一定要插在皮下，針形電極按紅（右上肢）—黃（左上肢）—綠（左下肢）—黑（右下肢）分別插入四肢皮下并與1通道連接。

2.利多卡因濃度不得高于0.5%，且應(yīng)緩慢靜脈注射，否則可引起利多卡因中毒，造成動物死亡。

3.氯化鋇誘發(fā)心律失常為低鉀所致雙相性心動過速、室性期前收縮，持續(xù)約15分鐘。

【思考題】

1.利多卡因抗心律失常的機制是什么？

2.利多卡因在臨床上有哪些用途？

第四節(jié)　呋塞米的利尿作用

【實驗?zāi)康摹?/span>

1.觀察呋塞米的利尿作用。

2.初步掌握外科手術(shù)尿管的插法。

【實驗原理】

呋塞米是高效利尿藥，可抑制腎小管髓袢升支粗段Na+-K+-2Cl-共轉(zhuǎn)運體，增高腎小管液中Na+、K+、Cl-濃度，降低腎臟的稀釋功能；同時髓質(zhì)間液高滲狀態(tài)下降，使腎臟的濃縮功能也下降，導致排出大量近似等滲的尿液。

【實驗動物】

家兔（體重2～3kg）。

【實驗條件】

1.藥品

1%呋塞米注射液、生理鹽水。

2.器材

兔手術(shù)臺、電子秤、開口器、導尿管、注射器、膠布、量筒、燒杯。

【實驗方法】

1.每組取體重相近的健康雄性家兔2只，稱重并做好標記。用溫水按30mL/kg灌胃后，仰位固定于兔手術(shù)臺上。

2.先將導尿管用液體石蠟潤濕，自尿道口輕輕插入，當導尿管進入膀胱后，可見尿液滴出。將導尿管固定，輕壓腹部使膀胱內(nèi)積存的尿液全部排出。分別收集兩只家兔用藥前30分鐘內(nèi)的尿液。然后，甲兔經(jīng)耳緣靜脈注射生理鹽水0.5mL/kg，乙兔經(jīng)耳緣靜脈注射呋塞米0.5mL/kg，收集用藥后30分鐘的尿液。

【實驗結(jié)果】

見表1-7-4-1。

【注意事項】

家兔在實驗前24小時應(yīng)供給充足的飲水量或用青飼料喂養(yǎng)。

【思考題】

1.呋塞米的利尿作用機制、利尿特點是什么？

2.呋塞米的臨床用途及不良反應(yīng)有哪些？

第五節(jié)　硫酸鎂中毒的解救

【實驗?zāi)康摹?/span>

1.觀察鎂鹽的急性中毒反應(yīng)及鈣劑的解救作用。

2.掌握家兔注射給藥方法。

【實驗原理】

大劑量的硫酸鎂通過拮抗Ca2+起到阻斷神經(jīng)肌肉接頭作用，從而使興奮的傳遞受阻，肌肉松弛麻痹。

【實驗動物】

家兔。

【實驗條件】

1.藥品

25%硫酸鎂溶液、5%氯化鈣溶液。

2.器材

電子秤、注射器（5mL、10mL）、針頭（5號）、乙醇棉球。

【實驗方法】

1.取家兔1只，稱重，觀察正常活動及肌張力情況。

2.由耳緣靜脈快速注射25%硫酸鎂溶液2.0mL/kg，觀察家兔活動情況的變化。

3.當家兔出現(xiàn)行走困難、肌肉松弛無力、低頭臥倒時，立即由耳靜脈緩慢注射5%氯化鈣溶液4～8mL，觀察家兔活動情況的變化。

【實驗結(jié)果】

見表1-7-5-1。

【注意事項】

1.由于Mg2+具有中樞作用，耳緣靜脈注射硫酸鎂不易掌控，也可改為肌內(nèi)注射25%硫酸鎂溶液2.5mL/kg，5～30分鐘后，可緩慢出現(xiàn)中毒現(xiàn)象。

2.也可使用其他鈣劑，如葡萄糖酸鈣等。

【思考題】

1.解救過程中，如果使用鈣劑過量會導致什么樣的后果？

2.如果鈣劑過量中毒，可以用硫酸鎂解救嗎？為什么？

第六節(jié)　肝素的抗凝作用

【實驗?zāi)康摹?/span>

1.觀察并比較肝素、雙香豆素、枸櫞酸鈉的抗凝作用特點。

2.掌握肝素的藥理作用，學會使用肝素的抗凝作用。

【實驗原理】

肝素在體內(nèi)、體外均具有強大的抗凝作用，能通過激活抗凝血酶Ⅲ來發(fā)揮作用；口服給藥無效，須注射給藥。雙香豆素為口服的體內(nèi)抗凝藥，其結(jié)構(gòu)與維生素K相似，能在肝臟中競爭性抑制維生素K，從而起到抗凝血的作用。枸櫞酸鈉為體外抗凝藥，能與血液中的Ca2+形成難解離的可溶性絡(luò)合物，使血中Ca2+濃度降低，從而起到抗凝作用；由于大劑量注射可干擾體內(nèi)Ca2+濃度，故不用于體內(nèi)抗凝。

【實驗動物】

小鼠（約20g）、家兔。

【實驗條件】

1.藥品

0.2%肝素鈉溶液、0.1%雙香豆素溶液、生理鹽水、0.25%肝素鈉溶液、3.8%枸櫞酸鈉溶液、0.1%氯化鈉溶液。

2.器材

電子秤、1mL注射器、5號針頭、燒杯、棉球、75%乙醇、小鼠灌胃器、毛細玻璃管（1mm內(nèi)徑）、試管、1mL吸管。

【實驗方法】

1.體內(nèi)抗凝實驗

（1）取小鼠3只，標記、稱重。

（2）給藥：甲鼠腹腔注射0.2%肝素鈉溶液0.5mL，乙鼠腹腔注射生理鹽水0.5mL做對照，丙鼠于實驗前3天以0.1%雙香豆素溶液0.5mL/10g灌胃，實驗時腹腔可注射等量生理鹽水（甲乙鼠也可在實驗前3天灌胃等量生理鹽水）。

（3）取血并記錄凝血時間：給藥后20分鐘分別以毛細玻璃管眼眶取血，3分鐘后，折斷毛細玻璃管一小段，以后每隔30秒折斷一次，當折斷時看到有黏絲狀物出現(xiàn)，即表示血液凝固，分別記錄凝血時間。

2.體外抗凝實驗

（1）取清潔干燥試管4支，編號。

（2）分別在①號試管加入0.25%肝素鈉溶液；②號試管加入0.1%雙香豆素溶液；③號試管加入3.8%枸櫞酸鈉溶液；④號試管加入生理鹽水，各0.25mL。

（3）從家兔耳緣靜脈抽取血液，每試管0.5～1mL，使其充分混合。

（4）每隔30秒傾倒一次，觀察各個試管內(nèi)血液變化。

（5）記錄各個試管凝血時間。

【實驗結(jié)果】

1.體內(nèi)抗凝實驗（表1-7-6-1）

2.體外抗凝實驗（表1-7-6-2）

【注意事項】

1.眼眶采血難度較大，注意固定小鼠頭部的手指，以免被咬傷。

2.向試管中加入血液或藥液時，勿滴落到試管壁上。

第七節(jié)　縮宮素對離體子宮的興奮作用

【實驗?zāi)康摹?/span>

1.觀察縮宮素對離體子宮的興奮作用。

2.學習離體子宮平滑肌運動的描記方法。

【實驗原理】

縮宮素能興奮子宮平滑肌，不同劑量的縮宮素對子宮產(chǎn)生的興奮作用及其作用特點不同。

【實驗動物】

家兔。

【實驗條件】

1.藥品

縮宮素（0.02U/mL、0.2U/mL、2U/mL）、樂氏液。

2.器材

BL-420生物功能實驗系統(tǒng)、手術(shù)器械、數(shù)顯恒溫肌槽、滴管、溫度計、玻璃皿、手術(shù)剪、鑷子、平皿、針、線、燒杯、“Z”形管。

【實驗方法】

1.空氣栓塞法處死家兔，剖腹取出子宮，立即置于盛有樂氏液的玻璃皿中，取出一條子宮角，兩端分別用線結(jié)扎，備用。

2.將家兔子宮一端系于“Z”形管的彎鉤上，并放入數(shù)顯恒溫肌槽，另一端與BL-420生物功能實驗系統(tǒng)換能器上的小鉤相連，緩慢通入空氣。

3.在BL-420生物功能實驗系統(tǒng)中依次選擇“實驗項目”→“消化實驗”→“消化道平滑肌生理特性”。

4.記錄子宮正常收縮曲線5分鐘。

5.加入0.02U/mL縮宮素0.2mL，待作用明顯后，描記子宮收縮曲線，記錄后用樂氏液沖洗3遍。

6.分別加入0.2U/mL與2U/mL縮宮素0.2mL進行實驗，實驗方法同上。

【實驗結(jié)果】

見表1-7-7-1。

【注意事項】

1.把子宮一角取出及固定時不要損傷或過度牽拉子宮。

2.嚴格按照實驗指導的給藥順序給藥。

【思考題】

縮宮素對子宮作用的特點是什么？