第一節(jié) 如何使用本書

《免疫檢測(cè)原理與應(yīng)用》一書蘊(yùn)含了免疫檢測(cè)及其應(yīng)用的全面信息。本節(jié)介紹了本書是如何構(gòu)成的，以方便讀者查詢所需要的信息。

一、使用索引

在索引中，如果頁面索引為粗體形式，則相應(yīng)主題通常會(huì)有更詳細(xì)地介紹。

二、本書的結(jié)構(gòu)

本書的內(nèi)容分為若干部分，每一部分都建立在前面的知識(shí)體系之上。

第一部分：免疫檢測(cè)的基本原理

第一節(jié) 如何使用本書。

第二節(jié) 免疫檢測(cè)入門簡(jiǎn)介。本節(jié)對(duì)于免疫檢測(cè)領(lǐng)域的入門者來說是個(gè)很好的起點(diǎn)，介紹了免疫檢測(cè)的基本原理。

第三節(jié) 免疫檢測(cè)性能指標(biāo)。本節(jié)介紹了定義免疫檢測(cè)性能的術(shù)語和方法。

第二部分：免疫檢測(cè)的分類

第一節(jié) 競(jìng)爭(zhēng)性和非競(jìng)爭(zhēng)性免疫測(cè)定（ELISA）的原理：從分類上來說，幾乎所有的免疫檢測(cè)都是競(jìng)爭(zhēng)性的或非競(jìng)爭(zhēng)性的。之所以在同一章節(jié)中對(duì)它們進(jìn)行介紹是因?yàn)樗鼈兙哂幸恍┕餐奶卣鳌Ｃ嘎?lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是非競(jìng)爭(zhēng)性免疫測(cè)定方法的一個(gè)亞類，盡管有時(shí)該術(shù)語被不恰當(dāng)?shù)兀ɑ虿徽_地）用于描述各種免疫檢測(cè)方法，非競(jìng)爭(zhēng)性免疫測(cè)定通常被稱為夾心測(cè)定法，這是因?yàn)榉治鑫锉粖A在兩個(gè)抗體（捕獲和標(biāo)記抗體）之間。

第二節(jié) 均相免疫測(cè)定：通常的免疫檢測(cè)是異相的，依賴于將結(jié)合到抗體上的物質(zhì)與未結(jié)合的物質(zhì)進(jìn)行分離，只有結(jié)合的部分才可以通過標(biāo)記得到可測(cè)量的信號(hào)。均相免疫分析的目的是通過一系列巧妙的方法，在不需要分離的情況下，將結(jié)合和未結(jié)合的標(biāo)記物區(qū)分開。這樣簡(jiǎn)化了檢測(cè)自動(dòng)化。均相免疫分析可以是競(jìng)爭(zhēng)性的，也可以是非競(jìng)爭(zhēng)性的。這是一個(gè)具有創(chuàng)新性的領(lǐng)域，正受到許多研究者的高度關(guān)注。

第三節(jié) 側(cè)向?qū)恿髅庖邫z測(cè)系統(tǒng)：該種類型的免疫檢測(cè)應(yīng)用廣泛，值得用一個(gè)章節(jié)專門進(jìn)行介紹。眾所周知的一個(gè)例子就是家用妊娠測(cè)試。該種類型的檢測(cè)用于即時(shí)診斷、法醫(yī)、環(huán)境和食品應(yīng)用。主要特點(diǎn)是所有的操作步驟包括分離，都是通過毛細(xì)管作用在惰性試紙上完成的，不需要使用者的介入。這是一個(gè)具有高度發(fā)展活躍度的學(xué)科領(lǐng)域。

第四節(jié) 游離分析物免疫檢測(cè)：這是檢測(cè)模式中一個(gè)特殊的類型，目的是測(cè)量血液樣本中游離的分析物，如未與載體蛋白相結(jié)合的部分。如果游離分析物是代謝活性部分的話，那么對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)就很重要。游離甲狀腺素就是典型的例子，其游離部分只占總甲狀腺素的0.02%。

第五節(jié) 定性免疫檢測(cè)的特點(diǎn)和設(shè)計(jì)：當(dāng)免疫檢測(cè)已經(jīng)發(fā)展到能滿足特定的臨床需求時(shí)，給出是或否結(jié)果的定性檢測(cè)變得越來越普遍。家用妊娠測(cè)試和一些血液篩查測(cè)試一樣都是定性的，這類檢測(cè)法有時(shí)在陽性和陰性分類區(qū)域之間也會(huì)有一個(gè)灰區(qū)。雖然定性免疫檢測(cè)對(duì)于使用者來說很簡(jiǎn)單，但它有獨(dú)特的設(shè)計(jì)要求，這是因?yàn)槎ㄐ詸z測(cè)給出了臨床解釋，而不僅僅是分析物濃度。

第六節(jié) 傳染病相關(guān)抗體的檢測(cè)：傳統(tǒng)的免疫檢測(cè)利用抗體來“捕獲”互補(bǔ)的抗原，即目標(biāo)分析物。當(dāng)抗體是目標(biāo)分析物的時(shí)候，也可以運(yùn)用相同的原理，將抗原作為“誘餌（bait）”捕獲抗體，然而實(shí)際上抗體檢測(cè)有其特有的挑戰(zhàn)性。在傳統(tǒng)的免疫檢測(cè)中，開發(fā)人員可以選擇單個(gè)克隆抗體或者多個(gè)抗體的混合物，通過設(shè)計(jì)來達(dá)到所需的檢測(cè)性能特征。然而在抗體檢測(cè)中，不同樣本間的抗體群體可能存在很大的差異。

第七節(jié) 以微球?yàn)榛A(chǔ)的多重免疫檢測(cè)——利用Luminex? xMAP?技術(shù)的開發(fā)和應(yīng)用：Luminex開創(chuàng)性地使用了抗體包被的微球和細(xì)胞分選技術(shù)，現(xiàn)在已經(jīng)成為免疫檢測(cè)中一個(gè)重要的類別，具有許多的應(yīng)用。

第八節(jié) 芯片上的實(shí)驗(yàn)室，微/納米免疫檢測(cè)系統(tǒng)、微陣列芯片：本節(jié)介紹了當(dāng)檢測(cè)越來越小型化時(shí)，物理作用力之間的關(guān)系是如何變化的，如表面張力的影響越大，同時(shí)重力的影響就會(huì)越小。設(shè)備的樣本加載模塊需要匹配人體尺寸，這使得檢測(cè)模塊在尺寸上就會(huì)顯得相形見絀。免疫檢測(cè)的每一個(gè)方面都需要重新設(shè)計(jì)以實(shí)現(xiàn)小型化，這是一個(gè)非常有趣的科學(xué)和工程領(lǐng)域。

第九節(jié) 表面等離激元共振在結(jié)合位點(diǎn)、動(dòng)力學(xué)和濃度分析中的應(yīng)用：表面等離激元共振是一種經(jīng)過改良的生物傳感器技術(shù)，可以深入研究一對(duì)抗體-抗原間的結(jié)合動(dòng)力學(xué)，這是每一個(gè)免疫檢測(cè)的核心。本節(jié)介紹了結(jié)合常數(shù)和解離常數(shù)的重要性，以及它們的作用是如何實(shí)現(xiàn)可視化的。

第十節(jié) 使用數(shù)字ELISA方法測(cè)定單個(gè)蛋白質(zhì)分子：這是一種令人興奮的全新的單分子檢測(cè)類型，已經(jīng)取得了顯著的成果，可以精確地測(cè)量極低濃度的多肽。

第十一節(jié) 免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)：免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)與免疫檢測(cè)密切相關(guān)，因此本書也包括與其相關(guān)的內(nèi)容。在蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域，利用這些技術(shù)研究細(xì)胞中具有科學(xué)意義的蛋白質(zhì)，發(fā)現(xiàn)它們位于何處，比較疾病細(xì)胞和正常細(xì)胞，為尋找原因和可能的治療方法提供線索，并且利用這些技術(shù)可以在細(xì)胞水平上評(píng)價(jià)一種治療方法相較于另外一種方法的效果。

第三部分：免疫檢測(cè)的組成

免疫檢測(cè)的方法有多種組合排列，但是它們都具有共同的元素。一旦了解了基本的成分，就更容易理解任何新的免疫檢測(cè)系統(tǒng)。

第一節(jié) 抗體：大多數(shù)免疫檢測(cè)使用抗體作為最關(guān)鍵的試劑（某些免疫檢測(cè)相反，使用抗原來測(cè)試樣本中是否含有特異性抗體）。本節(jié)介紹了抗體作為需要精挑細(xì)選的試劑組分應(yīng)該如何使用以及目前可用的重組技術(shù)。所述的一些技術(shù)也正在促進(jìn)制藥業(yè)的變革，如通過使用人源化單克隆抗體作為治療藥物等。

第二節(jié) 信號(hào)生成和檢測(cè)系統(tǒng)：為了量化抗體和目標(biāo)分析物的結(jié)合，需要一個(gè)信號(hào)。本節(jié)介紹了最常見的信號(hào)生成系統(tǒng)，以及它們各自的優(yōu)勢(shì)和局限性。

第三節(jié) 固相和其他分離系統(tǒng)：分離過程去除掉多余的、未結(jié)合的能夠產(chǎn)生信號(hào)的物質(zhì)，以便只測(cè)量結(jié)合的信號(hào)。分離過程直接影響免疫檢測(cè)的靈敏度。本節(jié)介紹了如何使用固相載體來固定捕獲抗體，雖然這樣簡(jiǎn)化了分離的過程，但可能會(huì)影響抗體反應(yīng)和檢測(cè)動(dòng)力學(xué)。

第四節(jié) 偶聯(lián)方法：免疫定量分析法中，在分析物存在的情況下會(huì)形成的抗體-分析物-抗體復(fù)合物，如果沒有信號(hào)生成的實(shí)體來量化它，那么這個(gè)復(fù)合物是沒有用的。在大多數(shù)免疫檢測(cè)中，都會(huì)涉及將其中一種抗體偶聯(lián)到分子標(biāo)記物上，該偶聯(lián)產(chǎn)物可以參與到信號(hào)生成系統(tǒng)中。在ELISA中，標(biāo)記物就是一種酶。這是免疫檢測(cè)中抗原或者抗體需要與另外一個(gè)分子通過化學(xué)方式偶聯(lián)在一起的幾種情況之一。偶聯(lián)是免疫檢測(cè)中一個(gè)專業(yè)的領(lǐng)域，將在本節(jié)中進(jìn)行介紹。

第五節(jié) 標(biāo)準(zhǔn)化和校準(zhǔn)：免疫檢測(cè)是一種間接的測(cè)量系統(tǒng)，需要通過校準(zhǔn)來給出有意義的濃度估計(jì)值。在某些情況下，校準(zhǔn)可以追溯到一個(gè)具有確定意義測(cè)量單位的標(biāo)準(zhǔn)品，如摩爾或克，這種追溯是可以被驗(yàn)證的，但是在其他情況下，標(biāo)準(zhǔn)化是溯源到任意指定的單位。本節(jié)介紹了免疫檢測(cè)是如何標(biāo)準(zhǔn)化和校準(zhǔn)的。

第六節(jié) 校準(zhǔn)曲線擬合：本節(jié)介紹了計(jì)算機(jī)在讀取未知樣本濃度的過程中所使用的模型和算法，樣本濃度來自于標(biāo)準(zhǔn)品或校準(zhǔn)品。

第四部分：免疫檢測(cè)的開發(fā)

第一節(jié) ELISA開發(fā)實(shí)用指南：使用“實(shí)驗(yàn)室自建”的免疫檢測(cè)可以既簡(jiǎn)單又廉價(jià)地篩查數(shù)以千計(jì)的樣本，這是免疫檢測(cè)的一大吸引力。本節(jié)是ELISA開發(fā)實(shí)用指南，用來指導(dǎo)研究人員和那些資源有限的人員。

第二節(jié) 方法評(píng)價(jià)-實(shí)用指南：本節(jié)是指導(dǎo)商業(yè)化產(chǎn)品的用戶如何對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行初步評(píng)價(jià)的指南。

第三節(jié) 免疫檢測(cè)中的干擾：許多潛在的原因會(huì)造成免疫檢測(cè)中的干擾，這些干擾可能來源于樣本和其他來源。本節(jié)是對(duì)干擾的類型以及如何檢測(cè)和防止干擾的全面性的指南。

第四節(jié) 體外診斷行業(yè)中免疫檢測(cè)的開發(fā)：本節(jié)是業(yè)內(nèi)人士所撰寫的關(guān)于商業(yè)化免疫檢測(cè)開發(fā)的綜述。

第五部分：免疫檢測(cè)的實(shí)施

第一節(jié) 樣本采集，包括受試者的準(zhǔn)備和樣本的處理：本節(jié)給出了關(guān)于項(xiàng)目的準(zhǔn)備、樣本的采集以及其他相關(guān)主題的全面性建議。覆蓋了血液和其他類型的樣本，并延伸到唾液采集。

第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證：本節(jié)是免疫診斷實(shí)驗(yàn)室建立安全質(zhì)量體系的指南。

第三節(jié) 即時(shí)檢測(cè)（床旁檢測(cè)）：本節(jié)涵蓋了臨床實(shí)踐中即時(shí)檢測(cè)的管理以及決策者在決定是否使用即時(shí)檢測(cè)時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng)。

第四節(jié) 免疫檢測(cè)問題原因分析指南：本節(jié)是一個(gè)全面的和系統(tǒng)性的指南，用來確認(rèn)免疫檢測(cè)相關(guān)問題的根本原因。

第六部分：免疫檢測(cè)在臨床化學(xué)之外的應(yīng)用

第一節(jié) 免疫檢測(cè)在獸醫(yī)診斷中的應(yīng)用：本節(jié)提供了免疫檢測(cè)在獸醫(yī)領(lǐng)域用于控制和診斷傳染病，以及評(píng)估代謝和生殖狀況的全面情況。介紹了獸醫(yī)免疫檢測(cè)的技術(shù)和科學(xué)，包括貓、犬、豬、馬、牛和禽類的應(yīng)用。

第二節(jié) 配體結(jié)合檢測(cè)在藥物開發(fā)中的應(yīng)用：本節(jié)描述了制藥工業(yè)在藥物研發(fā)、藥物代謝動(dòng)力學(xué)、毒理學(xué)和臨床研究的不同階段是如何應(yīng)用免疫檢測(cè)的。

第七部分：免疫檢測(cè)的臨床應(yīng)用

第一節(jié) 臨床概念：臨床測(cè)試應(yīng)用于診斷、患者管理和篩查的原則，以及免疫檢測(cè)設(shè)計(jì)的結(jié)果。

第二節(jié)至第二十三節(jié) 臨床章節(jié)：本書最后的一個(gè)部分由22節(jié)組成，各節(jié)以一致的格式概述了免疫檢測(cè)所應(yīng)用的主要臨床領(lǐng)域，包括正常身體功能的描述、相關(guān)臨床疾病，以及在各領(lǐng)域中可能用到的每一種免疫檢測(cè)分析物的介紹。本書的這一部分描述了免疫檢測(cè)的臨床應(yīng)用。為了體現(xiàn)其科學(xué)價(jià)值，在這些章節(jié)給出了參考區(qū)間，但是由于參考區(qū)間在不同方法和患者人群中有所不同，因此該參考區(qū)間不得用于任何臨床情況。臨床內(nèi)容如下：

（1）甲狀腺；

（2）腎上腺皮質(zhì)；

（3）骨和鈣代謝；

（4）不孕不育；

（5）體外受精和胚胎移植（IVF-ET）；

（6）女性多毛和男性化；

（7）妊娠；

（8）生長(zhǎng)和生長(zhǎng)激素缺乏癥；

（9）糖尿病；

（10）血液學(xué)；

（11）心肌標(biāo)志物；

（12）腫瘤標(biāo)志物；

（13）變態(tài)反應(yīng)；

（14）自身免疫性疾病；

（15）胃腸道；

（16）肝炎；

（17）人類免疫缺陷病毒（HIV）；

（18）病毒性疾病（不包括肝炎和HIV）；

（19）細(xì)菌性疾病；

（20）寄生蟲和真菌；

（21）治療藥物監(jiān)測(cè)；

（22）藥物濫用。

（陳清　楊薇　譯，何建文　審）