- 基因工程藥物研究與應用
- 李校堃主編
- 875字
- 2021-04-16 15:28:36
五、其他工具酶
Bal.31核酸酶分離自海洋細菌埃氏替單胞菌( Altreromonas espejiana),具有單鏈特異性的核酸內切酶活性,也具有雙鏈特異性核酸外切酶活性。其可控制的3'-5'外切酶可產生3'端呈梯度切除的一系列DNA分子;此外該酶還具有核糖核酸酶活性,可催化核糖體和tRNA的降解,但不具雙鏈特異的核酸外切酶活性。
S1核酸酶(S1 nuclease)是一種對單鏈高度特異的核酸內切酶,可催化RNA和單鏈DNA分子降解成為5'單核苷酸,也能作用于雙鏈核酸分子的單鏈區,于此處切斷核酸分子,單鏈區可小至僅有一個堿基。該酶在分子生物學中的主要用途是給RNA分子定位;也可用于檢測核酸雜交程度、雙鏈DNA二級結構差異,削平限制性內切酶切割產生的黏末端;還可以打開雙鏈cDNA合成過程形成的發夾結構。
綠豆核酸酶(mung bean nuclease)來源于綠豆芽,降解單鏈DNA或RNA,產生帶5'磷酸基的產物,在高濃度下也能自兩端降解雙鏈DNA,用于去除DNA突出末端。
核糖核酸酶(ribonuclease RNase)是水解核糖-磷酸主鏈中磷酸二酯鍵而降解核糖核酸的酶類。一些RNA酶只作用特異結構部位,如發夾、嘌呤堿基或嘧啶堿基,從而產生特異的RNA片段。RNA酶A來源于牛胰,為內切核糖核酸酶,作用于RNA嘧啶核苷酸的3'端磷酸,并切割磷酸二酯鍵;RNA酶T1分離自米曲霉,它特異作用于鳥苷酸3'端磷酸,并切割與相鄰核苷酸相連的磷酸二酯鍵。這類酶在提取質粒DNA時用于除去RNA;從DNA-RNA雜交鏈中除去未雜交的RNA。
脫氧核糖核酸酶Ⅰ(DNaseⅠ)為內切核酸酶,優先作用于嘧啶核苷酸位置酶切單鏈或雙鏈DNA,主要用于缺口平移法標記DNA、對蛋白-DNA復合物進行足跡法分析等。
核酸外切酶(exonuclease)是一類從線性DNA分子一端向另一端連續切割的酶,包括5'-3'外切酶和3'-5'外切酶,它們分別從5'端向3'端切割或者從3'端向5'端切割,每次只切去一個核苷酸,也可以類似方式切割RNA。
核酸外切酶Ⅲnew能專一從雙鏈DNA3'端去除核苷酸,該酶有多種活性,對無嘌呤DNA特異的核酸內切酶活性、3'磷酸酶活性、3'核酸外切酶活性、RNase H活性。該酶可催化雙鏈DNA從3'-OH端逐一釋放5'單核苷酸。主要用于:在以Klenow酶制備特異探針時,通過其3'-5'外切酶活性使雙鏈DNA產生單鏈區,作為標記的底物制備單向缺失DNA分子進行平末端連接克??;在定點誘變時,用于特異降解模板鏈,提高突變率。