3.4　特點(diǎn)與應(yīng)用

3.4.1　特點(diǎn)

熒光分析法是根據(jù)物質(zhì)的熒光光譜進(jìn)行定性，根據(jù)熒光強(qiáng)度進(jìn)行定量的一種分析方法。熒光分析法具有靈敏度高，選擇性好，工作曲線線性范圍寬，且能夠提供激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、發(fā)光強(qiáng)度、發(fā)光壽命、量子產(chǎn)率、熒光偏振等諸多信息等特點(diǎn)。

3.4.2　應(yīng)用

熒光分析法主要用于分子的定性和定量分析，由于自身能夠產(chǎn)生強(qiáng)熒光的物質(zhì)比較少，熒光分析法的應(yīng)用不如紫外-可見分光光度法廣泛。但由于它的高靈敏度以及許多生物物質(zhì)都具有熒光性質(zhì)，所以該方法在環(huán)境、生物化學(xué)分析、生理醫(yī)學(xué)研究、臨床和藥物分析領(lǐng)域具有重要意義。

（1）無機(jī)化合物的熒光分析

在紫外線或可見光照射下會(huì)直接產(chǎn)生熒光的無機(jī)化合物很少，所以能直接應(yīng)用無機(jī)化合物自身的熒光進(jìn)行測(cè)定的物質(zhì)很少。但許多無機(jī)化合物能與有機(jī)試劑發(fā)生作用，生成配合物。在輻射光的作用下，這些配合物能發(fā)出不同波長(zhǎng)的熒光，由其熒光強(qiáng)度的變化可測(cè)定元素的含量。目前可采用與有機(jī)試劑作用進(jìn)行熒光分析的元素已有70余種。

（2）有機(jī)化合物的熒光分析

芳香族有機(jī)化合物因具有共軛不飽和體系，易于吸光，其中分子龐大而結(jié)構(gòu)復(fù)雜的芳香族有機(jī)化合物多數(shù)能產(chǎn)生熒光，可以直接用熒光法測(cè)定。有時(shí)為了提高測(cè)定方法的靈敏度和選擇性，常使弱熒光性的芳香族有機(jī)化合物與某種有機(jī)試劑作用使其生成強(qiáng)熒光的產(chǎn)物，然后再進(jìn)行測(cè)定。對(duì)于具有致癌活性的多環(huán)芳烴，熒光分析法已成為最主要的測(cè)定方法。

對(duì)于自身不產(chǎn)生熒光的有機(jī)化合物（如脂肪族化合物，醇、醛和酮類，酸類，糖類等），其熒光分析主要依賴它們與某種有機(jī)試劑的反應(yīng)，可用于定性和定量分析。

應(yīng)用示例：分子熒光光譜法測(cè)定食品接觸材料中熒光增白劑。

熒光增白劑是一種在紙制品、塑料制品、洗滌制品等中應(yīng)用廣泛的化學(xué)物質(zhì)。熒光增白劑的不合理使用會(huì)對(duì)人體健康造成危害。通過分子熒光光譜法既可對(duì)熒光增白劑進(jìn)行定性分析，也可對(duì)其進(jìn)行定量分析。

F-7000型分子熒光光度計(jì)，設(shè)定儀器分析條件為激發(fā)光狹縫（EX slit）5nm，發(fā)射光狹縫（EX slit）5nm，光電倍增管檢測(cè)器電壓（PMT Voltage）400 V。

選用一較低的激發(fā)波長(zhǎng)，發(fā)射波長(zhǎng)在350～600nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，可獲取不同熒光增白劑的最大發(fā)射波長(zhǎng)，在最大發(fā)射波長(zhǎng)條件下，設(shè)定激發(fā)波長(zhǎng)200～400nm范圍進(jìn)行掃描，可獲取不同熒光增白劑的最大激發(fā)波長(zhǎng)。單獨(dú)采用最大激發(fā)波長(zhǎng)或最大發(fā)射波長(zhǎng)不能很好地對(duì)一些熒光增白劑進(jìn)行定性鑒別，但是利用最大激發(fā)波長(zhǎng)和最大發(fā)射波長(zhǎng)組合，大大提高了定性鑒別性能。如圖3-5和圖3-6所示，分別為BA、VBL、CXT三種熒光增白劑的最大發(fā)射波長(zhǎng)和最大激發(fā)波長(zhǎng)圖。圖3-7為BA、VBL、CXT三種熒光增白劑的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

圖3-5　BA、VBL、CXT三種熒光增白劑的最大發(fā)射波長(zhǎng)

圖3-6　BA、VBL、CXT三種熒光增白劑的最大激發(fā)波長(zhǎng)

另外，可選取305nm為激發(fā)波長(zhǎng)，442nm為發(fā)射波長(zhǎng)，對(duì)BA、VBL、CXT三種熒光增白劑進(jìn)行定量分析，標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖3-7所示。

圖3-7　VBL、BA、CXT三種熒光增白劑的標(biāo)準(zhǔn)曲線