第二節(jié)　研究方法及臨床應(yīng)用

病理學(xué)從研究方法上可分為人體病理學(xué)研究方法和實(shí)驗(yàn)病理學(xué)研究方法兩部分。前者通過(guò)尸體剖驗(yàn)、活體組織檢查和細(xì)胞學(xué)檢查等所獲得的材料對(duì)疾病做出最后診斷；后者則以疾病的動(dòng)物模型或在體外培養(yǎng)的組織或細(xì)胞為材料進(jìn)行醫(yī)學(xué)研究。

一、人體病理學(xué)研究方法

1．尸體剖驗(yàn)

尸體剖驗(yàn)（autopsy）簡(jiǎn)稱尸檢，是指對(duì)死亡者的遺體進(jìn)行病理解剖，其主要方法是通過(guò)大體和組織學(xué)觀察死亡者全身各組織器官，結(jié)合生前的各種醫(yī)學(xué)信息做出全面、準(zhǔn)確的病理診斷，查明死因。尸檢在臨床醫(yī)學(xué)和法醫(yī)學(xué)方面都具有十分重要的意義，體現(xiàn)在：①驗(yàn)證臨床診斷與治療的正確性，總結(jié)經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)，提高醫(yī)療技術(shù)水平；②積累大量而系統(tǒng)的病理資料，為科研、教學(xué)和臨床服務(wù)；③深入認(rèn)識(shí)疾病（某些傳染病、地方病、流行病等）和發(fā)現(xiàn)新的病種；④確定死亡原因、判斷死亡時(shí)間。由此可見(jiàn)，尸檢是研究、認(rèn)識(shí)和診斷疾病的重要手段和方法，也是法醫(yī)學(xué)常用的偵破手段。但目前我國(guó)的尸檢率還不高，而且有進(jìn)一步下降的趨勢(shì)，十分不利于我國(guó)病理學(xué)和整個(gè)醫(yī)學(xué)科學(xué)的發(fā)展，因此要提高對(duì)尸檢的認(rèn)識(shí)，以更有利于疾病的研究和發(fā)展。

2．活體組織檢查

活體組織檢查（biopsy）簡(jiǎn)稱活檢，是指通過(guò)局部手術(shù)切除、內(nèi)鏡鉗取和穿刺吸取等方法取出患者病變部位的組織進(jìn)行病理檢查（圖1-1）。近年來(lái)由于各種內(nèi)鏡（如纖維胃鏡、纖維結(jié)腸鏡、纖維支氣管鏡等）和影像診斷技術(shù)的不斷改進(jìn)，不但可以直接觀察某些體內(nèi)腫瘤的外觀形態(tài)，還可在其指引下準(zhǔn)確地取材，進(jìn)一步提高了早期診斷的陽(yáng)性率。活體組織檢查對(duì)及時(shí)診斷疾病、評(píng)價(jià)療效、分析預(yù)后等都具有重要作用，尤其是對(duì)良、惡性腫瘤及某些疑難疾病的鑒別診斷具有決定性作用。必要時(shí)可做冷凍切片，快速診斷，為臨床醫(yī)生決定手術(shù)方式提供依據(jù)。因此，活體組織檢查目前仍然是臨床上重要的、常用的診斷方法之一。

★考點(diǎn)提示：臨床上常用的檢查方法

3．細(xì)胞學(xué)檢查

細(xì)胞學(xué)檢查是通過(guò)各種方法采集人體病變部位的細(xì)胞，制成細(xì)胞涂片，利用顯微鏡進(jìn)行病理學(xué)觀察，并做出細(xì)胞學(xué)診斷。常用的細(xì)胞學(xué)檢查如下。

①脫落細(xì)胞學(xué)檢查：如痰涂片，尿沉渣涂片，胸腔積液、腹水涂片及陰道分泌物涂片等。

②刷刮細(xì)胞學(xué)檢查：如支氣管內(nèi)鏡刷片、子宮頸刮片、食管拉網(wǎng)等涂片。

③穿刺細(xì)胞學(xué)檢查：如甲狀腺腫塊穿刺、肝穿刺、淋巴結(jié)穿刺涂片。

④印片細(xì)胞學(xué)檢查：如體表潰瘍、新鮮切取組織等用玻璃片直接粘取病變細(xì)胞進(jìn)行檢查。

細(xì)胞學(xué)檢查主要用于疾病診斷、健康普查、激素水平測(cè)定及為細(xì)胞培養(yǎng)提供標(biāo)本等。

★考點(diǎn)提示：細(xì)胞學(xué)檢查的概念

二、實(shí)驗(yàn)病理學(xué)研究方法

1．動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是指在各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物身上復(fù)制某些人類疾病的模型，有針對(duì)性地研究疾病的病因、發(fā)病機(jī)制及治療效果等，動(dòng)態(tài)觀察其形態(tài)、功能和代謝的改變以及疾病的整個(gè)發(fā)展過(guò)程和臨床表現(xiàn)，驗(yàn)證治療效果等（圖1-2）。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)可以彌補(bǔ)人體觀察的不足和局限性，提供豐富的研究資料，為人類醫(yī)學(xué)的發(fā)展作出了重要貢獻(xiàn)。但是，由于動(dòng)物和人類之間的存在差異，因此不能把動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果簡(jiǎn)單地運(yùn)用于人體。

2．組織培養(yǎng)和細(xì)胞培養(yǎng)

將人體或動(dòng)物體內(nèi)取出的某種組織或細(xì)胞，在體外適宜的環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)，動(dòng)態(tài)地觀察在各種因素作用下細(xì)胞、組織發(fā)生的變化，來(lái)研究疾病的病因、發(fā)病機(jī)制、病理變化、治療效果、預(yù)后等（圖1-3）。近年來(lái)通過(guò)體外培養(yǎng)建立了不少人體和動(dòng)物腫瘤的細(xì)胞系，對(duì)研究腫瘤細(xì)胞的分子生物學(xué)特性起到了重要作用。這種研究方法的優(yōu)點(diǎn)是周期短、見(jiàn)效快、節(jié)省開(kāi)支，體外實(shí)驗(yàn)條件容易控制，可以避免體內(nèi)復(fù)雜因素的干擾。缺點(diǎn)是孤立的體外環(huán)境與復(fù)雜的體內(nèi)整體環(huán)境有很大的不同，故不能將體外研究結(jié)果與體內(nèi)過(guò)程簡(jiǎn)單地等同看待。

三、病理學(xué)常用的觀察方法

1．大體觀察

大體觀察也稱肉眼觀察，是主要通過(guò)肉眼、各種衡量器具對(duì)所檢標(biāo)本的大小、形狀、色澤、重量、質(zhì)地、表面及切面、病灶特性及與周圍組織的關(guān)系等進(jìn)行細(xì)致的觀察及檢測(cè)的方法（圖1-4）。大體觀察能夠了解病變的整體形態(tài)，是病理學(xué)檢查必不可少的步驟，有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師往往能夠通過(guò)對(duì)病變部位的大體觀察即可初步確定病變性質(zhì)。

★考點(diǎn)提示：肉眼觀察的方法

2．組織學(xué)觀察

組織學(xué)觀察也稱鏡下觀察，是指從大體標(biāo)本具有代表性的病變部位切取組織，制作成厚3～5μm的組織切片，并經(jīng)過(guò)HE或特殊染色后，用光學(xué)顯微鏡觀察其病變（圖1-5）。組織學(xué)觀察雖然是傳統(tǒng)的病理學(xué)研究方法，但是到目前為止仍然是最基本、最可靠、最常用的病理學(xué)研究和診斷方法，具有不可替代的地位。

3．超微結(jié)構(gòu)觀察

運(yùn)用透射、掃描電子顯微鏡對(duì)細(xì)胞的內(nèi)部及表面超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行更加細(xì)微的觀察，即從亞細(xì)胞（細(xì)胞器）和大分子水平上了解細(xì)胞的病變。

4．組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)觀察

運(yùn)用化學(xué)試劑與組織、細(xì)胞中某種化學(xué)成分起特異性反應(yīng)而顯色的方法，從而顯示組織細(xì)胞中的化學(xué)成分，如蛋白質(zhì)、酶類、核酸、糖類以及脂類等。組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)觀察對(duì)某些疾病有一定的診斷價(jià)值。

5．免疫組織化學(xué)檢查

免疫組織化學(xué)檢查是最近十多年來(lái)迅速發(fā)展起來(lái)的一門(mén)新興技術(shù)，已被廣泛運(yùn)用于腫瘤研究和診斷。其原理是利用抗原與抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)來(lái)檢測(cè)組織中的未知抗原或者抗體，主要是腫瘤相關(guān)抗原（腫瘤分化抗原和腫瘤胚胎抗原），借以判斷腫瘤的來(lái)源和分化程度，協(xié)助腫瘤的病理診斷和鑒別診斷。目前已廣泛用于疾病的診斷與鑒別診斷。

6．分子生物學(xué)技術(shù)

十余年來(lái)分子生物學(xué)腫瘤研究領(lǐng)域引起了一場(chǎng)革命。重組DNA技術(shù)、核酸分子雜交技術(shù)、聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）和DNA測(cè)序等新技術(shù)在腫瘤的基因分析和基因診斷上已經(jīng)開(kāi)始應(yīng)用。例如對(duì)惡性淋巴瘤，利用Southern印跡雜交技術(shù)和PCR方法，可以對(duì)樣本淋巴組織中是否存在單克隆性的增生作出判斷，從而協(xié)助形態(tài)學(xué)診斷。這些技術(shù)還被用于腫瘤的病因和發(fā)病學(xué)研究，使人們對(duì)疾病發(fā)生、發(fā)展規(guī)律的認(rèn)識(shí)更深入，也使病理學(xué)的發(fā)展快速進(jìn)入新時(shí)期。