十一、分光光度計的使用

分光光度計的基本原理：物質在光的照射下，對光產生了吸收，物質對光的吸收具有選擇性。各種不同的物質都具有其各自的吸收光譜。因此，某種單色光通過溶液時，其能量就會因被吸收而減弱，光能量減弱的程度和物質的濃度有一定的比例關系，如圖1-33所示，它們之間的定量依據是朗伯-比爾定律。物質吸收光的程度可以用吸光度A或透光率T表示。定義：

式中　I0——入射光強度；

　I——透射光強度。

朗伯-比爾定律的數學表達式為：

A=εbc

式中　A——吸光度；

　c——溶液的濃度，mol·L-1；

　b——液層厚度，cm；

　ε——摩爾吸光系數，L·mol-1 cm-1。

從以上公式可以看出，當入射光、吸光系數和液層厚度不變時，吸光度隨溶液濃度的變化而變化。

分光光度計的基本原理是根據朗伯-比爾定律設計的。下面簡單介紹兩種常用的分光光度計的使用方法。

（一）22pc型可見分光光度計

1.儀器外形結構

22pc型可見分光光度計外形結構如圖1-34所示。

2.22pc可見分光光度計的使用方法

①預熱儀器　打開電源開關16，顯示窗9顯示數字，預熱30min。

②零點調整　打開暗箱蓋或用不透光材料在樣品室中遮斷光路，然后按“↓/0％”鍵7，即能自動調整零位。

③選擇波長　使用波長調節旋鈕4，選擇當前測試所需波長，具體波長由波長顯示窗3顯示，讀出波長時目光要垂直觀察。

④調節百分透光度　將空白液置于光路中，關閉暗箱蓋（同時打開光門），按下“↑/100％”鍵8，即能自動調整T=100％（一次有誤差可加按一次）。

⑤確定濾光片位置　本儀器備有減少雜光、提高340～380nm波段光度準確性的濾波片，位于樣品室內側，用一撥桿來改變位置。當測試波長在340～380nm波段內如作高精度測試，可將撥桿推向前，通常可不使用此濾光片，可將撥桿置于400～1000nm位置。

⑥改變標尺　本儀器有四種標尺，各標尺間的轉換用模式鍵5操作，由“透射比”，“吸光度”，“濃度因子”，“濃度直讀”指示燈分別指示，開機初始狀態為“透射比”，每按一次順序循環。

⑦溶液測定　將待測液盛于比色皿并置于比色池中，關閉暗箱蓋，輕輕拉動比色皿座架拉桿，使待測液進入光路，進行測定。測完后應打開暗箱蓋，以免光電管疲勞。

試驗完畢，切斷電源，將比色皿洗滌干凈并用軟紙將比色皿與座架、暗箱擦凈。

（二）752s型紫外分光光度計

1.儀器外形結構

752s型紫外分光光度計儀器外形結構如圖1-35所示。

2.752s型紫外分光光度計的使用方法

①預熱儀器　打開電源開關16，顯示窗9顯示數字，預熱30min。

②零點調整　打開暗箱蓋或用不透光材料在樣品室中遮斷光路，然后按“↓/0％”鍵7，即能自動調整零位。

③選擇波長　使用波長調節旋鈕4，選擇當前測試所需波長，具體波長由波長顯示窗3顯示，讀出波長時目光要垂直觀察。

④調節百分透光度　將空白液置于光路中，關閉暗箱蓋（同時打開光門），按下“↑/100％”鍵8，即能自動調整T=100％（一次有誤差可加按一次）。

⑤改變標尺　本儀器有四種標尺，各標尺間的轉換用模式鍵5操作，由“透射比”，“吸光度”，“濃度因子”，“濃度直讀”指示燈分別指示，開機初始狀態為“透射比”，每按一次順序循環。

⑥溶液測定　將待測液盛于比色皿并置于比色池中，關閉暗箱蓋，輕輕拉動比色皿座架拉桿，使待測液進入光路，進行測定。測完后應打開暗箱蓋，以免光電管疲勞。

試驗完畢，切斷電源，將比色皿洗滌干凈并用軟紙將比色皿與座架、暗箱擦凈。

（三）分光光度計使用注意事項

①工作環境　室溫：5～35℃，室內相對濕度小于85％。安放在穩定的工作臺上，避免震動，并避免陽光直射及強烈電磁場干擾，避免灰塵及腐蝕性氣體。

②清潔儀器外表時，宜用溫水擦拭，切勿用乙醇、乙醚等有機溶劑，不使用時請加防塵罩。

③比色皿每次使用后都用石油醚清洗，并用鏡頭紙輕拭干凈，存于比色皿盒中備用。不能用堿液或氧化性強的洗滌液洗比色皿，以免損壞。也不能用毛刷，以免損壞透光面。

④為了防止光電管疲勞，不測定時必須將比色皿暗箱蓋打開，切斷光路，以延長光電管的使用壽命。

⑤手拿比色皿時，手指捏住比色皿的毛玻璃面，不要碰比色皿的透光面，以免沾污及磨損。

⑥測定時，一定要用待測液將比色皿內壁洗2～3次，以保證溶液的濃度不變，在測定一系列溶液的吸光度時，通常是按從稀到濃的順序測定，以減少誤差。