第四節　特殊雜質檢查

藥物中存在的特殊雜質是指該藥物在生產和貯存過程中，根據藥物的性質及生產工藝條件的不同，有可能引入的雜質，包括中間體、分解產物以及副產物等。特殊雜質的檢查方法在《中國藥典》（2015年版）中列入該藥的檢查項下。特殊雜質的種類因藥物的品種的不同而異，藥物中的特殊雜質情況較為復雜，檢查方法各異，主要是利用藥物和雜質在理化性質和生理作用上的差異來制定適宜的檢查方法，一般分成四大類。

一、物理法

（1）顏色　某些藥物本身無色，但其分解產物有色，或在生產過程中引入了有色的雜質，可通過檢查藥物溶液的顏色來對其有色雜質進行限量檢查。如《中國藥典》2015年版中葡萄糖溶液的顏色檢查。

（2）氣味　藥物（特別是揮發性藥物）中存在的雜質如具有特殊氣味，則可通過特殊氣味來判定該雜質的存在。如乙醇中混入雜醇油，雜醇油具有異臭，檢查乙醇中的雜醇油，是將乙醇分次滴在無臭清潔的濾紙上，待乙醇自然揮散后，不應殘留雜醇油的異臭。

（3）溶解性　某些藥物可溶于水、有機溶劑或酸、堿中而其所含有的雜質不溶或其雜質可溶于水、有機溶劑或酸、堿而藥物卻不溶于相應的溶劑。可以利用藥物和雜質溶解行為的差別來控制藥物中的雜質。如《中國藥典》（2015年版）葡萄糖中糊精的檢查就是利用葡萄糖與糊精在乙醇中的溶解性的差異，通過進行“乙醇溶液澄清度”的檢查來實現的。

（4）物理常數——旋光性　某些藥物本身具有旋光性，在其生產過程中易引入光學異構體雜質，可以利用藥物與其相應的光學異構體雜質之間旋光性質的差異，通過測定旋光度或比旋度來控制雜質的限量。如硫酸阿托品為消旋體，本身無旋光活性，而其雜質莨菪堿為左旋體，《中國藥典》（2015年版）規定藥物溶液（50mg/ml）的旋光度不得過-0.4°，來控制莨菪堿的量。

二、化學法

利用藥物和雜質在化學性質上的差異進行特殊雜質檢查，主要是選擇雜質所特有的化學性質及與一定試劑發生特定的化學反應，來控制雜質的存在。

（1）酸堿性　如果藥物中存在的雜質本身具有酸性或堿性，可以利用藥物與雜質在酸堿性質方面的差異來檢查雜質的存在。如硫酸阿托品中其他生物堿的檢查，由于其他生物堿（東莨菪堿、山莨菪堿和樟柳堿等）比阿托品的堿性弱，可以利用這種差異進行雜質檢查。

（2）氧化還原性　某些藥物與雜質之間在氧化性或還原性方面存在差異，可以利用這種差異檢查藥物中存在的雜質。如鹽酸嗎啡中阿撲嗎啡的檢查。

（3）顏色反應　利用藥物中存在的雜質與一定試劑反應產生顏色來檢查藥物中是否混入雜質，可以根據限量規定，要求其在一定反應條件下不得有某種顏色產生，或在相同條件下與雜質對照品所顯的顏色進行目視比色，應符合規定。

三、光譜法

（1）紫外分光光度法　紫外分光光度法一般是通過檢查雜質吸光度的方法來控制藥物中雜質的限量。即配制一定濃度的藥物溶液，選擇在藥品無紫外吸收而雜質有吸收的波長處測定吸光度，控制吸光度的值不得超過某一限值。如地蒽酚中二羥基蒽醌的檢查，二羥基蒽醌的氯仿溶液在432nm波長處有最大吸收，而地蒽酚在該波長處幾乎無吸收。

如果藥物和雜質在一定波長范圍內均有吸收，也可利用藥物在某兩個波長處的吸光度比值來檢查雜質的限量。如苯丙醇中苯丙酮的雜質檢查。

（2）紅外分光光度法　紅外分光光度法用于雜質限量檢查時，通常用于多晶型藥物中低效或無效晶型的檢查。某些多晶型藥物由于晶型結構不同，一些化學鍵的鍵長、鍵角等發生不同程度的變化，從而導致紅外光譜中某些特征峰的頻率、峰形和強度出現顯著差異。利用這些差異，可以檢查藥物中低效或無效的晶型雜質。

四、色譜法

某些藥物與雜質在吸附或分配性質上存在差異，可以采用色譜法將其分離，同時也可以進行檢測，近年來在特殊雜質的檢查中應用廣泛，主要包括：薄層色譜法、高效液相色譜法和氣相色譜法。

1.薄層色譜法

薄層色譜法是一種常用的特殊雜質檢查方法，具有靈敏度高、簡便快速、不需特殊設備的優點。常用的檢查方法有以下幾種。

（1）靈敏度法（即在規定的試驗條件下不允許出現雜質斑點），該法進行特殊雜質限量檢查的原理是在規定的試驗條件下，用顯色劑對規定量的雜質的檢測限來控制其限量。該法試驗條件影響較大，一般作為備選方法，在無其他合適的檢查方法的情況下才選擇此法。

（2）雜質對照法（以一定濃度的待測雜質溶液為對照品溶液），該法特點是需要被測雜質對照品，適用于待測雜質已經確定，并且具備該雜質的對照品。檢查時，取一定濃度已知雜質的對照品溶液和供試品溶液，分別在同一薄層板上點樣，展開、定位后檢查，供試品所含該雜質斑點，不得超過雜質對照斑點的大小或比雜質對照斑點顏色更深。

（3）選用藥物中可能存在的某些物質作為雜質對照品，本法適用于當藥物中的雜質未確認完全或待測雜質不止一種時，可根據藥物合成工藝、化學性質等判斷其可能含有的雜質，并具備該雜質的對照品的情況下進行特殊雜質檢查。采用本法時應注意雜質斑點與對照品應具有可比性。

（4）主成分自身對照法，本法適用于當雜質的結構難以確定，或無雜質的對照品的情況下控制特殊雜質的量。檢查時，將供試品根據規定稀釋到一定濃度作為雜質對照品溶液，與供試品溶液分別于同一薄層板上點樣，展開后顯色，規定供試品溶液所顯雜質斑點顏色不得比對照品溶液所顯主斑點顏色更深（或熒光強度）。

2.高效液相色譜法

高效液相色譜法分離效能高，應用廣泛，不僅可以分離，而且可以通過準確地測定各組分的峰面積、峰高等來分析各組分的含量，在進行藥物含量測定的同時，還可進行雜質檢查。現介紹以下幾種方法。

（1）主成分自身對照法，本法適用于雜質峰面積與主成分峰面積相差懸殊的情況。檢查時，將供試品溶液稀釋成適宜濃度，作為對照溶液。分別取供試品溶液和對照溶液進樣，通過供試品溶液中各雜質峰面積及其總和與對照溶液主成分峰面積比較，以檢查供試品中雜質的量。如醋酸甲羥孕酮中的有關物質檢查。

（2）內標法加校正因子，測定供試品中某個雜質含量或主成分含量時，按各品種項下規定，精密稱（量）取雜質對照品和內標物質，分別配制成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子測定用的對照溶液。取一定量注入儀器，記錄色譜圖，測量對照品和內標物質的峰面積或峰高，按下式計算校正因子：

式中　AS——內標物質的峰面積或峰高；

AR——對照品的峰面積或峰高；

cS——內標物質的濃度；

cR——對照品的濃度。

再取各品種項下含有內標物質的供試品溶液注入儀器，記錄色譜圖，測量供試品中被測成分（或其雜質）和內標物質的峰面積或峰高，采用校正因子的內標法按下式計算雜質的含量或主成分的含量：

式中　AX——供試品（或其雜質）峰面積或峰高；

cX——供試品（或其雜質）的濃度；

其他符號含義同上。

（3）外標法，測定供試品中某個雜質含量或主成分的含量時，按各品種項下的規定，精密稱（量）取雜質對照品和供試品，分別配成溶液，并精密取一定量，注入儀器，記錄色譜圖，測量對照品和供試品被測成分的峰面積或峰高，采用比較法按下式計算該雜質的含量或主成分的含量：

式中各符號的含義同上。

（4）面積歸一化法，檢查時，取供試品溶液注入儀器，經高效液相色譜法分離后，測定色譜圖上各雜質及藥物的峰面積以及除溶劑峰以外的色譜峰總峰面積，計算藥物中各雜質峰面積及其總和占總峰面積的百分率，不得超過規定的限量。

3.氣相色譜法

除藥物中殘留溶劑外，一些揮發性特殊雜質也可以采用氣相色譜法檢查，檢查方法同高效液相色譜法相同。

如氨芐西林中N，N-二甲苯胺的檢查，取本品約1.0g，精密稱定，置具塞試管中，加1mol/L氫氧化鈉溶液5ml，精密加入內標溶液（精密稱取萘適量，加環己烷溶解并稀釋制成每1ml中約含50μg的溶液）1ml，強烈振搖，靜置，取上層液作為供試品溶液；取N，N-二甲基苯胺50mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加鹽酸2ml和水20ml，振搖均勻后，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置250ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置具塞試管中，加1mol/L氫氧化鈉溶液5ml，精密加入內標溶液1ml，強烈振搖，靜置，取上層液，作為對照品溶液，照氣相色譜法（通則0521）試驗，以硅酮（OV-17）為固定相，涂布濃度為3％；柱溫為120℃；N，N-二甲基苯胺峰與內標峰間的分離度應符合要求。精密量取供試品溶液與對照品溶液各2μl，分別注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，按內標法以峰面積比值計算，N，N-二甲基苯胺的量不得過百萬分之20。