第二章 電泳技術(shù)

帶電顆粒在電場(chǎng)作用下向其所帶電荷相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象，稱為電泳（electrophoresis）。利用電泳現(xiàn)象進(jìn)行物質(zhì)的分離、純化和鑒定的技術(shù)，稱為電泳技術(shù)。

早在1808年，電泳現(xiàn)象即已被發(fā)現(xiàn)，但是直到1937年瑞典科學(xué)家Tiselins設(shè)計(jì)了世界第一臺(tái)自由電泳儀，建立了“移界電泳法”，成功地將血清中的蛋白質(zhì)分離成清蛋白，α1、α2、β和γ球蛋白五個(gè)組分后，電泳才作為一種分離方法逐步應(yīng)用于生物化學(xué)研究。20世紀(jì)50年代，許多科學(xué)家著手改進(jìn)電泳儀，并先后尋找到濾紙、醋酸纖維素薄膜、淀粉及瓊脂糖凝膠等支持物。60年代，Davis等利用聚丙烯酰胺凝膠作為電泳支持物，并在此基礎(chǔ)上發(fā)展了SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳、等電聚焦電泳、雙向電泳和印跡轉(zhuǎn)移電泳等技術(shù)。目前，電泳的種類和方式有了很大的發(fā)展，電泳的分辨率也不斷提高，如利用雙向電泳可將5000種蛋白質(zhì)混合物的樣品逐一完整地分開。電泳技術(shù)已成為生物化學(xué)和分子生物學(xué)研究中必不可少的技術(shù)手段，并廣泛應(yīng)用于生物科學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域的研究和生產(chǎn)實(shí)踐。

第一節(jié) 電泳的基本原理

當(dāng)把一個(gè)帶凈電荷的顆粒放入電場(chǎng)時(shí)，便有一個(gè)來自與它所帶電荷性質(zhì)相反電極的吸引力F作用于其上。F的大小取決于顆粒凈電荷量（Q）及其所處的電場(chǎng)強(qiáng)度（E），它們之間的關(guān)系可用下式表示：

F=E·Q

由于F的作用，使帶電顆粒在電場(chǎng)中向一定方向泳動(dòng)。此顆粒在泳動(dòng)過程中還受到一個(gè)相反方向的摩擦力F′的作用。根據(jù)Stoke公式，球形顆粒運(yùn)動(dòng)時(shí)，F′的大小取決于帶電顆粒的形狀、大小、所處介質(zhì)的黏度及顆粒的移動(dòng)速度，即：

F′=6πrηυ

式中r為顆粒半徑，η為介質(zhì)黏度，υ為顆粒移動(dòng)速度。

當(dāng)F=F′時(shí)，顆粒即在電場(chǎng)中以速度υ作勻速泳動(dòng)，即：

EQ=6πrηυ

故：

由上式可知，帶電顆粒在電場(chǎng)中泳動(dòng)的速度與電場(chǎng)強(qiáng)度和帶電顆粒的凈電荷量成正比，與顆粒半徑和介質(zhì)黏度成反比。因此，在同一電場(chǎng)作用下，不同大小和凈電荷量不等的帶電顆粒在同一介質(zhì)上（內(nèi)）移動(dòng)時(shí)，其移動(dòng)速度不等，經(jīng)過一定時(shí)間后，其移動(dòng)距離不等，從而得以分離。利用這一原理也可用來對(duì)樣品的純度進(jìn)行鑒定。

帶電顆粒在單位電場(chǎng)中泳動(dòng)的速度常用泳動(dòng)度（mobility, m）或遷移率來表示。遷移率可由下式表示：

式中d為帶電顆粒泳動(dòng)的距離（cm）, l為支持物的有效長(zhǎng)度（cm）, t為通電時(shí)間（s）, V為加在支持物兩端的實(shí)際電壓（V），故遷移率的單位為cm2·V-1·s-1。

遷移率也可由下式表示：

由上式可見，在一定條件下，任何帶電顆粒都具有自己特定的遷移率，其大小決定于顆粒本身的性質(zhì)，即所帶電荷的數(shù)量、形狀和大小，亦即取決于顆粒的電荷密度。兩種不同的帶電顆粒（如兩種蛋白質(zhì)分子）一般具有不同的遷移率。

許多在生物學(xué)上具有重大意義的分子都具有可解離的基團(tuán)，在溶液中可形成帶正電荷或負(fù)電荷的質(zhì)點(diǎn)，在電場(chǎng)中便會(huì)向一定的電極移動(dòng)，因此可通過電泳進(jìn)行分離。例如，蛋白質(zhì)分子具有許多可解離的酸性基團(tuán)（如COO-）和堿性基因（如），是一個(gè)典型的兩性電解質(zhì)。蛋白質(zhì)分子所帶電荷的性質(zhì)和數(shù)量取決于蛋白質(zhì)本身的性質(zhì)、溶液的pH值以及溶液的離子強(qiáng)度。不同蛋白質(zhì)分子可解離基團(tuán)各不相同，因此具有不同的等電點(diǎn)（pI）。當(dāng)溶液的pH值等于pI時(shí)，蛋白質(zhì)分子所帶的凈電荷等于零，在電場(chǎng)中不移動(dòng)；當(dāng)溶液pH值小于pI時(shí)，蛋白質(zhì)帶正電荷，電場(chǎng)中向負(fù)極移動(dòng)；當(dāng)溶液pH值大于pI時(shí)，蛋白質(zhì)分子帶負(fù)電荷，在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)。蛋白質(zhì)的pI與溶液pH值相差愈大，其所帶的凈電荷就愈多。因此，不同蛋白質(zhì)由于pI不同，在同一溶液中所帶的凈電荷也會(huì)不等，加之不同蛋白質(zhì)的顆粒大小和形狀也不相同，使得混合于同一溶液中的不同蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中具有不同的遷移速度，因此可通過電泳加以分離。此外，也可通過電泳進(jìn)行核酸、核苷酸、氨基酸等物質(zhì)甚至病毒顆粒、細(xì)胞的分離。

第二節(jié) 影響電泳速度的因素

一、樣品性質(zhì)

樣品顆粒的形狀、大小以及所帶的凈電荷量對(duì)泳動(dòng)速度有較大的影響。一般來說，顆粒的凈電荷量越大，或其直徑越小，或其形狀越接近球形，在電場(chǎng)中的泳動(dòng)速度就越快。反之，則越慢。

二、電場(chǎng)強(qiáng)度

電場(chǎng)強(qiáng)度是指每1cm支持物上的電勢(shì)降，也稱電勢(shì)梯度。以紙電泳為例，若濾紙長(zhǎng)為10cm，兩端電勢(shì)降為150V，則電場(chǎng)強(qiáng)度為。根據(jù)電場(chǎng)強(qiáng)度的大小，可將電泳分為常壓電泳和高壓電泳。前者電場(chǎng)強(qiáng)度一般為2～20V/cm，后者為20～200V/cm。

電場(chǎng)強(qiáng)度對(duì)電泳速度起著十分重要的作用。電場(chǎng)強(qiáng)度愈高，帶電顆粒的泳動(dòng)速度愈快；反之，則愈慢。不過，電場(chǎng)強(qiáng)度增高時(shí)，電流強(qiáng)度會(huì)隨之增大，使產(chǎn)熱增加，可導(dǎo)致區(qū)帶擴(kuò)散，使分辨率降低，甚至導(dǎo)致樣品失活，嚴(yán)重時(shí)會(huì)燒斷濾紙或熔化瓊脂糖凝膠等支持物。因此，高壓電泳時(shí)常需附設(shè)冷卻裝置。

三、緩沖液

電泳中的緩沖液除參與導(dǎo)電外，其pH值和離子強(qiáng)度可直接影響顆粒的解離狀態(tài)，從而影響電泳速度。

1.pH值

緩沖液的pH值是決定帶電顆粒的解離程度，也即決定其帶凈電荷多少的決定因素。對(duì)蛋白質(zhì)、氨基酸等兩性電解質(zhì)而言，緩沖液的pH值離其等電點(diǎn)愈近，則其所帶的凈電荷量愈大，電泳速度也愈快；反之，則愈慢。因此，分離蛋白質(zhì)等樣品時(shí)，應(yīng)選擇一個(gè)合適的pH值，使各種蛋白質(zhì)所帶凈電荷量的差異增大，以利于分離，并縮短電泳時(shí)間。一般常用的電泳緩沖液pH值范圍在4.5～9.0之間。

2．離子強(qiáng)度

緩沖液的離子強(qiáng)度較低時(shí)，緩沖液所載的電流降低，樣品所載的電流相應(yīng)增加，因此，電泳的速度較快。但是，當(dāng)離子強(qiáng)度過低時(shí)，緩沖液的緩沖容量小，不易維持pH值的恒定，同時(shí)樣品的擴(kuò)散比較嚴(yán)重，使分辨率明顯降低。

緩沖液離子強(qiáng)度較高時(shí)，緩沖液所載的電流增加，樣品所載的電流則降低，因此，樣品的電泳速度減慢。離子強(qiáng)度過高時(shí)，由于總電流的增加而使產(chǎn)熱明顯增加，將對(duì)電泳產(chǎn)生不利影響。

因此，電泳選擇離子強(qiáng)度時(shí)要兩者兼顧，一般離子強(qiáng)度的選擇范圍在0.02～0.2之間。

緩沖液離子強(qiáng)度的計(jì)算：

式中I為離子強(qiáng)度，C為離子的摩爾濃度，Zi為離子的價(jià)數(shù)。

例如：0.15mo1/L NaCl溶液的離子強(qiáng)度為：

0.15mo1/L ZnSO4溶液的離子強(qiáng)度為：

由此可見，多價(jià)離子會(huì)使離子強(qiáng)度增高，所以電泳緩沖液常用單價(jià)離子化合物配制。

四、支持介質(zhì)

電泳時(shí)選用的支持介質(zhì)應(yīng)是惰性較大的材料，不與被分離的樣品或緩沖液發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，且應(yīng)具有一定的堅(jiān)韌度。支持介質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)對(duì)電泳速度也有較大的影響。

1．吸附

某些支持介質(zhì)的表面對(duì)被分離物質(zhì)具有吸附作用，使分離物質(zhì)滯留而降低電泳速度。吸附可使樣品的移動(dòng)不能形成一條很清晰的區(qū)帶，出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，因而降低了電泳的分辨率。濾紙的吸附作用最大，醋酸纖維素薄膜的吸附作用很小。

2．電滲

在電場(chǎng)中，液體對(duì)固體的相對(duì)移動(dòng)稱為電滲。當(dāng)支持介質(zhì)不是絕對(duì)惰性物質(zhì)時(shí)，其表面含有的一些離子基團(tuán)可以吸附溶液中帶相反電荷的離子，使靠近支持物的溶液層相對(duì)帶電。在電場(chǎng)作用下，此溶液層會(huì)向相反電極移動(dòng)。例如，在紙電泳時(shí)，由于濾紙的纖維素含有羥基，使表面帶負(fù)電荷，與表面接觸的水溶液則帶正電荷，在電場(chǎng)作用下，該溶液層向負(fù)極移動(dòng)。由于電滲現(xiàn)象與電泳同時(shí)存在，所以會(huì)對(duì)電泳時(shí)顆粒的泳動(dòng)產(chǎn)生影響。當(dāng)顆粒的泳動(dòng)方向與電滲方向一致時(shí)，則加快顆粒的泳動(dòng)速度，當(dāng)顆粒的泳動(dòng)速度與電滲方向相反時(shí)，則降低顆粒的泳動(dòng)速度。

電滲現(xiàn)象可用不帶電的有色顏料或用有色的葡聚糖點(diǎn)在支持介質(zhì)的中間，經(jīng)電泳后可觀察電滲作用的方向和強(qiáng)度。

3．分子篩

有些支持物如瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠等都具有大小不等的篩孔，對(duì)形狀、大小不同的顆粒會(huì)產(chǎn)生程度不同的阻滯作用，從而影響電泳速度，這稱為分子篩效應(yīng)。篩孔較大或分子較小時(shí)，顆粒泳動(dòng)速度較快；反之，則泳動(dòng)速度較慢。支持物的分子篩作用有助于某些單純靠電荷效應(yīng)不能奏效的化合物的分離，從而提高了電泳的分辨率。

第三節(jié) 常用的電泳支持介質(zhì)

根據(jù)電泳是在溶液還是在固體支持物中進(jìn)行，可將電泳分為自由電泳和支持物電泳兩大類，以支持物電泳更常用。電泳的支持介質(zhì)種類很多，不同支持介質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)不同，對(duì)電泳的影響也不相同，可根據(jù)需要加以選擇。

一、醋酸纖維素薄膜（Cellulose Acetate Membrane）

醋酸纖維素即纖維素的醋酸酯，由纖維素的羥基經(jīng)乙酰化而成。當(dāng)將它溶于丙酮等有機(jī)溶液后，即可涂布成均一細(xì)密的微孔薄膜，厚度以0.1～0.15mm為宜。太厚吸水性差，分離效果不好；太薄則缺乏應(yīng)有的機(jī)械強(qiáng)度而易碎。

二、瓊脂糖凝膠（Agarose Gel）

瓊脂糖是由D-半乳糖和3,6脫水的L-半乳糖連接構(gòu)成的多糖鏈，是不帶電荷的中性物質(zhì)。這種多糖鏈在100℃左右時(shí)呈液態(tài)，當(dāng)溫度下降到45℃以下時(shí)，它們之間以氫鍵方式相互連接，就成了線性的雙鏈單環(huán)的瓊脂糖，經(jīng)凝聚即成膠凍狀的瓊脂糖凝膠。

瓊脂糖是從瓊脂中分離出來的。天然的瓊脂是一種多聚糖，主要由瓊脂糖（約占80%）及瓊脂膠組成。瓊脂膠是一種含較多硫酸根和羥基的強(qiáng)酸性多糖，由于這些基團(tuán)帶有電荷，在電場(chǎng)作用下能產(chǎn)生較強(qiáng)的電滲現(xiàn)象，加之硫酸根可與某些蛋白質(zhì)作用進(jìn)而影響電泳速度和分離效果，因此，在制備過程中要盡可能將瓊脂中的瓊脂膠除去，才能得到不帶電的瓊脂糖。

目前多采用瓊脂糖凝膠作為電泳支持物進(jìn)行平板電泳，其優(yōu)點(diǎn)如下：

（1）瓊脂糖凝膠結(jié)構(gòu)均勻，含液體量大（占98%～99%），近似自由電泳，樣品擴(kuò)散較自由電泳小，對(duì)樣品吸附極微。因此，電泳后區(qū)帶整齊，分辨率高，重復(fù)性好。

（2）液相與固相無明顯分界，電泳速度快。

（3）瓊脂糖凝膠透明且無紫外吸收，電泳過程和結(jié)果可直接用于紫外監(jiān)測(cè)及定量測(cè)定。

（4）電泳后區(qū)帶易染色，樣品易洗脫，便于定量測(cè)定。

（5）電泳及染色后，可制成干膜長(zhǎng)期保存。

（6）操作方便，設(shè)備簡(jiǎn)單，所需樣品量少，樣品不需事先處理就可直接電泳。

瓊脂糖凝膠電泳已廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的分離、純化和鑒定。將瓊脂糖凝膠電泳與免疫化學(xué)相結(jié)合發(fā)展成的免疫電泳技術(shù)，能鑒別其他方法不能鑒別的復(fù)雜體系，由于有了超微量技術(shù)，0.1 μg蛋白質(zhì)就可被檢出。

三、聚丙烯酰胺凝膠（Polyacrylamide Gel, PAG）

聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺（acrylamide, Acr）和交聯(lián)劑N, N-甲叉雙丙烯酰胺（methylene-bisacrylamide, Bis）在加速劑和催化劑的作用下聚合交聯(lián)形成的具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠，以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamide gelelectrophoresis, PAGE）。與其他凝膠相比，聚丙烯酰胺凝膠具有下列優(yōu)點(diǎn)：

（1）在一定濃度范圍時(shí)，凝膠透明，機(jī)械強(qiáng)度好，彈性大，有利于電泳后進(jìn)行各種處理。

（2）凝膠是—C—C—C—C…連接的多聚體，側(cè)鏈除不活潑的酰胺基外，無其他離子基團(tuán)，故化學(xué)性能穩(wěn)定，與被分離物不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，且無電滲作用。

（3）樣品不易擴(kuò)散，所需樣品量少（1～100μg）。

（4）凝膠孔徑可調(diào)節(jié)。通過改變單體濃度或單體與交聯(lián)劑的比例，就能得到孔徑不同、范圍廣泛的凝膠，故其應(yīng)用廣泛，可用于多種物質(zhì)的分離和鑒定。

（5）分辨率高，尤其是不連續(xù)凝膠電泳，集濃縮效應(yīng)、分子篩效應(yīng)和電荷效應(yīng)為一體，因而較醋酸纖維素薄膜電泳、瓊脂糖凝膠電泳等有更高的分辨率。

1．凝膠聚合原理

聚丙烯胺凝膠由Acr和Bis聚合而成。Acr和Bis單獨(dú)存在或混合在一起時(shí)是穩(wěn)定的，但在有自由基存在時(shí)，它們就會(huì)聚合成凝膠。根據(jù)引發(fā)產(chǎn)生自由基的方法，聚合分為化學(xué)聚合和光聚合兩種。

（1）化學(xué)聚合：化學(xué)聚合的催化劑一般是過硫酸銨（AP），加速劑是脂肪族叔胺，如四甲基乙二胺（TEMED）、三乙醇胺和二甲基氨丙腈等，其中以TEMED最好。當(dāng)Acr、Bis和TEMED的水溶液中加入過硫酸銨時(shí)，過硫酸銨[（NH4）S2O8]立即產(chǎn)生自由基：

與Acr接觸發(fā)生反應(yīng)，使Acr的雙鍵打開而“活化”。活化的Acr彼此連接形成多聚體長(zhǎng)鏈，含有這種多聚體長(zhǎng)鏈的溶液盡管比較黏稠，但還不能形成凝膠，因?yàn)檫@些長(zhǎng)鏈能向彼此滑動(dòng)，只有在交聯(lián)劑Bis存在時(shí)，才能使兩鏈之間交聯(lián)而形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。

化學(xué)聚合時(shí)，Acr和Bis聚合的速率與過硫酸銨濃度的平方根成正比，并且在堿性條件下反應(yīng)迅速。例如，7%的丙烯酰胺溶液要完全聚合，在pH值為8.8時(shí)，僅需30分鐘；而pH值為4.3時(shí)，則需90分鐘。此外，溫度、氧分子和雜質(zhì)都會(huì)影響聚合速度。一般在室溫下比在零度以下聚合快，溶液預(yù)先抽氣的比不抽氣的聚合快。

（2）光聚合：光聚合的催化劑是核黃素。光聚合過程是一個(gè)光激發(fā)的催化反應(yīng)過程。在氧及紫外線作用下，核黃素生成含自由基的產(chǎn)物，自由基引發(fā)Acr和Bis聚合形成凝膠。用核黃素催化時(shí)，可不加TEMED，但若加入TEMED會(huì)使聚合速度加快。光聚合要有痕量的氧存在，但過量氧能淬滅自由基，阻止聚合，故聚合反應(yīng)時(shí)要抽氣以減少氧含量。聚合反應(yīng)的溫度以20～25℃為宜。

光聚合的優(yōu)點(diǎn)是催化劑核黃素的用量極少（1mg/100mL），對(duì)分析樣品無任何不良影響；聚合時(shí)間可以自由控制——改變光照時(shí)間和強(qiáng)度，可使聚合作用延遲或加快。但光聚合形成的凝膠呈乳白色，透明度較差；光聚合的凝膠孔徑較大，而且隨時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸變小，不太穩(wěn)定，重復(fù)性較差，所以一般用它制備大孔膠較合適。

2．凝膠的孔徑

聚丙烯酰凝膠的孔徑大小是由單體和雙體在凝膠中的總濃度（T），以及雙體占總濃度的百分含量即交聯(lián)度（C）決定的。凝膠總濃度和交聯(lián)度的計(jì)算公式如下：

式中a代表Acr的質(zhì)量（g）, b代表Bis的質(zhì)量（g）, V代表溶液的體積（mL）。

通常，凝膠的彈性、透明度和篩孔的孔徑是隨著凝膠總濃度的增加而降低的。當(dāng)總濃度一定時(shí)，交聯(lián)度增加，將導(dǎo)致篩孔直徑減小。Richard等在1965年提出了適合于確定凝膠總濃度在5%～20%范圍內(nèi)的交聯(lián)度的經(jīng)驗(yàn)公式：

C=6.5%-0.3T

依照上述公式，當(dāng)選用總濃度T分別為5%和10%時(shí)，其適合的交聯(lián)度分別為5%和3.5%。

3．凝膠濃度的選擇

凝膠的特性是具有分子篩效應(yīng)。很明顯，大分子顆粒進(jìn)入凝膠的程度既取決于樣品分子的大小，又取決于凝膠的平均孔徑。如果凝膠的平均孔徑小于顆粒的直徑，那么無論顆粒所帶電荷的多少以及電場(chǎng)強(qiáng)度如何，它們都不能進(jìn)入凝膠。所以，分離不同分子量的混合物時(shí)，只有選擇適宜濃度的凝膠才能得到滿意的效果。在實(shí)際工作中，當(dāng)分析一個(gè)未知樣品時(shí)，常常選用7.5%的標(biāo)準(zhǔn)凝膠或是4%～10%的梯度凝膠作試驗(yàn)，以便選到理想濃度的凝膠。當(dāng)分離物的分子量已知時(shí)，凝膠濃度的選擇可參考表1-2-1。

第四節(jié) 電泳后的染色

經(jīng)電泳分離的各種生物分子本身一般無顏色。因此，電泳后需進(jìn)行染色，使它們?cè)谥С治锏南鄳?yīng)位置顯示出區(qū)帶，從而檢測(cè)其純度、含量及生物活性。不同生物分子的染色方法不同。以下主要介紹蛋白質(zhì)和核酸的幾種常用染色方法。

一、蛋白質(zhì)染色

染色液的種類繁多，各種染色液的染色原理不同，靈敏度各異，使用時(shí)可根據(jù)需要加以選擇。常用的染色液包括：

1．氨基黑10B（Amino Black 10B）

氨基黑10B是酸性染料，λmax在620～630nm間，其磺酸基與蛋白質(zhì)反應(yīng)構(gòu)成復(fù)合鹽。氨基黑10B是最常用的蛋白質(zhì)染料之一。但用氨基黑10B染SDS-蛋白質(zhì)時(shí)效果不好。此外，氨基黑10B染不同蛋白質(zhì)時(shí)，著色度和色調(diào)不一（呈藍(lán)、黑、棕等色），作凝膠樣本掃描時(shí)誤差較大，故一般只用于定性分析。

2．考馬斯亮藍(lán)R-250（CBBR-250）

CBBR-250的λmax在560～590nm間，染色靈敏度較氨基黑10B高5倍，尤其適用于SDS電泳微量蛋白質(zhì)染色。但蛋白質(zhì)濃度超過一定范圍時(shí)，染色不符合Beer定律，故進(jìn)行定量分析時(shí)應(yīng)加以注意。

3．考馬斯亮藍(lán)G-250（CBBG-250）

CBBG-250比CBBR-250多兩個(gè)甲基，λmax在590～610nm間，染色靈敏度不如CBBR-250，但比氨基黑10B高3倍。其優(yōu)點(diǎn)是它在三氯醋酸中不溶而成膠體，可克服CBBR-250在脫色時(shí)易溶解出來的缺點(diǎn)；能選擇性染蛋白質(zhì)而幾乎無本底色；染色穩(wěn)定，重復(fù)性好，適用于作定量分析。

4．銀染色法

銀染色法的機(jī)制尚不清楚，可能與攝影過程Ag+的還原原理相似。該染色法靈敏度很高，較CBBR-250靈敏100倍，因此常用于微量蛋白質(zhì)凝膠電泳后染色，Demoreno等人綜合了銀染色法和考馬斯亮藍(lán)染色法的優(yōu)點(diǎn)，建立了一種與考馬斯亮藍(lán)染色法相結(jié)合的銀染色法，其靈敏度比銀染色法提高數(shù)十倍，應(yīng)用范圍更加廣泛。

5．脂蛋白染色

油紅O可專一地與脂蛋白結(jié)合，特異性顯示脂蛋白的區(qū)帶。蘇丹黑B也是一種常用的染料，用于瓊脂糖凝膠電泳及PAGE中脂蛋白的預(yù)染。

6．糖蛋白染色

利用糖蛋白組成的特點(diǎn)，采用過碘酸-Schiff試劑對(duì)糖蛋白進(jìn)行特異性染色。甲苯胺藍(lán)可用于含酸性多糖的糖蛋白染色。

7．特異性酶的染色

電泳進(jìn)行酶譜分析時(shí)，常利用酶的特異性催化作用，將酶促反應(yīng)直接或間接地與能夠生成深色不溶性產(chǎn)物的化學(xué)反應(yīng)相偶聯(lián)，從而顯示酶蛋白區(qū)帶的存在，并通過顏色深淺顯示酶活性的高低。

二、核酸染色

1．溴化乙錠（Ethidium Bromide, EB）

溴化乙錠是最常用的核酸熒光染料，既可用于雙鏈DNA的染色，也可用于單鏈DNA和RNA的染色。EB可嵌入核酸鏈的堿基之間，在紫外線激發(fā)下發(fā)出橘紅色熒光。EB-核酸復(fù)合物中的EB發(fā)出的熒光，比游離于凝膠中的EB發(fā)出的熒光強(qiáng)度高10倍。因此，一般無需漂洗背景即可直接在紫外燈下觀察核酸區(qū)帶。

2．其他

除EB外，還有多種染料能對(duì)DNA或RNA進(jìn)行染色，見表1-2-2。