實驗四 脂質(zhì)的薄層層析

【原理】

由于硅膠G對各種不同脂質(zhì)的吸附能力不同，故用硅膠G做成薄板，以石油醚-丁酮-乙酸的混合液為展開劑，對食用油進行層析，能使各組分分離，并以標準物作對照，顯色后，比較它們的Rf值，即可鑒定其成分。

顯色劑中的過氯酸能與脂質(zhì)中不飽和鍵作用，生成醛類物質(zhì)。后者能使磷鉬酸還原生成藍色的鉬藍。

【操作】

（1）薄板制備：稱取硅膠G1.5g置于研缽中加入蒸餾水5mL。研勻后迅速倒于6cm×15cm玻片上，晃動玻片，使其均勻分布。待凝固后，置110℃烘箱中烘干備用。

（2）點樣：用毛細玻璃管分別吸取各種脂質(zhì)的標準液及試樣液各少許，在距層析薄板一端1.5cm的起點線處，間距1cm分別點樣。點樣的直徑應小于3mm，記錄各樣品的排列位置，待樣品的溶劑蒸發(fā)后再展開。

（3）展開：以石油醚-丁酮-乙酸（95∶4∶1）為展開劑。把已點好樣品的薄板30°傾斜于層析缸中，展開劑的高度必須在薄板點樣的起點線以下。密閉層析缸，讓其展開。

（4）待展開劑的前沿上升到距薄板頂端1cm處，取出薄板，并于展開劑到達處作一記號，將薄板于室溫干燥10分鐘后置80℃烘箱中烘干。

（5）顯色：薄板烘干后，噴以磷鉬酸顯色劑，即可呈現(xiàn)藍色斑點。

（6）求出各點的Rf值：。

【試劑】

（1）硅膠G。

（2）展開劑：石油醚（沸點60～90℃）-丁酮-乙酸（體積之比為95∶4∶1）。

（3）膽固醇甘油酯標準液（1g/L）。

（4）三油酸甘油酯標準液（1g/L）。

（5）卵磷脂標準液（1g/L）。

（6）油酸標準液（1g/L）。