嶺南科大，生命科學院，腫瘤免疫實驗室大門口的一間招待室里。

許星辰和王炳濤道明來意后，李朝詫異地看著二人：

“你們要開展腫瘤免疫逃逸方面的研究？是自主課題，還是有導師負責的？”

“有導師負責的，我家導師是陽大生物學院的唐成功，不知道您認不認識？”許星辰自報師門。

李朝恍然地點了點頭：“原來是唐教授的學生，唐教授我認識，以前還在一塊兒吃過飯來著……所以，你們要做的這個課題，是掛在了唐教授名下的，是的吧？”

“沒錯。”

“行，那我這邊先登記下，等會兒你們也得填一份表格。”

李朝埋頭在電腦上敲擊，登記起了許星辰所要開展的課題項目，當然，只是做一個簡單的了解，并不會深入挖掘。

完成登記與表格填寫后，許星辰和王炳濤很快從李朝口中，得知了實驗室里的設備共享機制、費用標準與資質要求。

嶺南科大這座實驗室，作為國家級的重點實驗室，建立著開放共享的機制，儀器設備是面向社會開放使用的，只是具體租賃流程，需要按照嶺南科大的細則來。

由于同屬嶺南省的高校聯盟，外加這座實驗室面積寬闊，且近期閑置的區域比較多，因此，在使用費用上，其實并沒有唐成功之前所說的那么夸張。

相關的高端儀器設備，都是按小時收費的，最高的一小時費用過千，便宜的一小時費用百十來塊。

至于24小時全天候整租實驗室里的所有設備，那是不允許的，只能按小時租用。

除此之外，實驗室內由于場地眾多，還提供實驗室臺面租賃，比如分子生物學實驗室、普通級細胞培養室、病毒級細胞培養室，以及一些復合型的實驗室租賃，價格上還非常公道。

許星辰按照李朝給的費用計價表，大致算了下自己的實驗流程所需。

即便是直接把所有的實驗操作流程，全部安放在嶺南科大，平均一個月的實驗室租賃與儀器租用的花銷，少則幾千塊就能搞定，多則也不會超過三萬塊。

只要原材料那邊的成本，不要太超支，唐導給的二十萬經費，綽綽有余了。

在嶺南科大這邊呆了一下午，許星辰和王炳濤把該走的流程與改簽的合同，全部弄了一遍。

其間，許星辰覺得既然嶺南科大這邊有便宜的實驗室臺面租賃，那就直接把研究地點定在這里好了，就近建立癌細胞系，然后就近租用儀器進行觀測。

做好決定后，接下來兩三天，許星辰等人便開始往嶺南科大的腫瘤免疫室倒騰東西。

因喬施施的采購工作，也進行得比較順利，前后只花了四五天時間，實驗所需的原材料便被全部購齊。

5月21號上午十點。

許星辰在嶺南科大腫瘤免疫實驗室的租賃區內，正式啟動了‘腫瘤微環境中癌細胞免疫逃逸機制’的實驗流程。

在喬施施和王炳濤的協助下，他開始對各類FFPE組織樣品建立腫瘤浸潤淋巴細胞（TIL）和匹配的癌細胞系，并對相關的癌細胞組織進行預處理。

主要是在室溫下于RPMI1640培養基中用0.1%膠原酶、0.01%透明質酸酶和30 U/ml脫氧核糖核酸酶進行酶消化溶解，待到完成后，再進行過濾和密度梯度分離處理，同時，還制備了外周血單核細胞。

在完成前期的實驗原材料制備后，接下來，便是全新的實驗操作流程了。

不過，按照論文《腫瘤微環境中線粒體轉移介導的免疫逃逸機制》中的路子，對許星辰而言，實際就是一些套路化的流程。

他只需抓住重點，按部就班地來進行即可。

其中的重點，前中期主要以研究‘TIL和癌細胞中的mtDNA突變’與‘癌細胞的線粒體轉移’為主。

待相關研究出成果后，再對‘線粒體轉移后是否發生同質’和‘突變T細胞中的線粒體功能障礙’，進行深入研究。

完事兒，可以再對小白鼠為實驗體的體內轉移和抗腫瘤免疫力、線粒體功能和ICI功效，展開擴展性的研究。

原盲盒論文中的科研團隊，由于缺乏前置導向，走了很多彎路，廢了不少時間。

但許星辰的課題組，卻是站在了終點勾勒行經路線，完全可以直接選擇最短、最好的路徑去走，無疑能大大地節省時間。

……

5月23號。

許星辰在王炳濤的配合下，對相關癌細胞系的TILs的mtDNA展開了測序，并進行了進一步的數據分析，確定相關TILs中存在mtDNA突變。

緊接著，許星辰又建立了突變和野生mtDNA的TILs和癌細胞的細胞系。

其中，突變細胞系為TIL04、TILc03和MEL04、MELc03。野生細胞系為TIL02和TIL04、MEL02、MEL03。

通過租用儀器進行觀測，許星辰發現mtDNA突變的細胞線粒體形態異常、嵴減少。但野生型細胞的線粒體，在形態上卻是正常的。

接下來，要確定mtDNA突變，不是在細胞培養中發生的。

對此，許星辰設計實驗，分析了相關患者的FFPE腫瘤組織。

最終的結果顯示，這些組織具有相同的突變。

……

5月26號。

許星辰根據原論文中提供的思路，設計實驗，制備了一種特異性熒光蛋白。

這種熒光蛋白，是一種專用于標記和定位質粒，被命名為Mito-DsRed，簡寫為MD質粒，其成分主要包括紅色熒光蛋白和線粒體亞基蛋白，且進行了相關的線粒體靶向序列設計。

不但可以用來將融合蛋白定位到細胞線粒體，還能在細胞內表達后靶向至線粒體并發出紅色熒光。

在整篇論文中，MD質粒都是一種很關鍵的標記物。

若沒有MD質粒，并非說相關實驗就無法開展了，因為還有其他類型的線粒體標記物，但在這個課題中，MD質粒最為適合、清晰、精準，能直接觀測到線粒體轉移的證據，若換其他標記物，情況就會變得十分復雜。

MD質粒的制備，許星辰全程自己操作，沒讓任何人參與，核心的制備技術，在論文沒有發表與相關專利沒有進入申請流程之前，他都會將之藏著，以免被人搶占了果實。

有了這種特異性熒光蛋白，許星辰再次設計實驗，對線粒體進行標記，然后引入野生型mtDNA的MEL02細胞和突變型mtDNA的MEL04細胞。

通過儀器觀察，他發現，癌細胞之間的線粒體轉移在20個小時之內，其實很少發生。

但是，過了20個小時以后，可以明顯觀察到癌細胞的線粒體，通過細胞間的隧道納米管（TNT）或者細胞外囊泡（EVs），轉移到了T細胞。

針對這種現象，許星辰直接在細胞中加入細胞松弛素B、transwell、GW4869和Y-27632，用以抑制TNT和阻斷小EVs，并避免細胞直接接觸。

結果發現，這些試劑顯著抑制了線粒體的轉移。

……