三、實驗內容

（一）線粒體的活體染色

1.原理

線粒體是真核細胞內一種重要的細胞器，是細胞進行呼吸作用的場所。細胞各項活動所需要的能量，主要通過線粒體呼吸作用來提供。活體染色是應用無毒或毒性較小的染色劑真實地顯示活細胞內某些結構而又很少影響細胞生命活動的一種染色方法。詹納斯綠 B（Janus green B）是線粒體的專一性活體染色劑，具有脂溶性，能跨過細胞膜，解離后，有染色能力的基團帶正電，結合在帶負電的線粒體內膜上。內膜的細胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態，呈現藍綠色，而在周圍的胞質內，染料被還原成無色。

線粒體浸沒在染液中能維持活性數小時，使我們能夠直接看到生活狀態線粒體的外形、分布及運動。

2.方法與結果

（1）家兔肝細胞線粒體的活體染色：用空氣栓塞法處死家兔，將其置于解剖盤內，迅速打開腹腔，取兔肝邊緣較薄的肝組織一小塊（2～3mm3），放入盛有Ringer液的平皿內洗去血液（用鑷子輕壓），用吸管吸去Ringer液，在平皿內加1/300詹納斯綠B染液，讓組織塊上表面露在染液外面，使細胞內線粒體的酶系可進行充分氧化，這樣才有利于保持染料的氧化狀態，使線粒體著色。當組織塊邊緣染成藍色時即可，一般需要染30min。

染色后，將組織塊移到載玻片上，用鑷子將組織塊拉碎，就會有一些細胞或細胞群從組織塊脫離。將稍大的組織塊去掉，使游離的細胞或細胞群留在載玻片上，加1滴Ringer液，蓋上蓋玻片，吸去多余水分。顯微鏡觀察，肝細胞質中許多線粒體被染成藍綠色，呈顆粒狀（圖2-1）。

（2）人口腔黏膜上皮細胞線粒體的活體染色：用牙簽刮取口腔黏膜上皮細胞涂于清潔的載玻片上，滴加詹納斯綠B染液，在室溫下染色15min，覆以蓋玻片，蓋破片下兩側可放頭發絲支撐，使不壓迫細胞并蓄納較多染液，如果觀察時間較長，可適當添注染液。

用40×物鏡觀察即可見到藍綠色的線粒體，細胞質接近無色。注意該染液有輕微毒性，若染色過久，線粒體可能發生潰變，出現空泡。

（二）線粒體的光鏡切片觀察

用詹納斯綠B染色的兔肝細胞光鏡切片，肝細胞中的線粒體呈藍綠色的顆粒。

（三）線粒體的電鏡照片觀察

不同細胞中線粒體的形態和數目不同。線粒體的外形多樣，如圓形、橢圓形、啞鈴形和桿狀。線粒體的數目與細胞類型和細胞的生理狀態有關，線粒體多聚集在細胞生理功能旺盛的區域。

線粒體嵴的數目與分布方式是多種多樣的。一般與線粒體長軸垂直排列，但也可見到與線粒體長軸平行排列的嵴。嵴的橫切面呈囊狀或管狀。嵴的數量與細胞呼吸功能的強度有很大關系。以下一組照片是電鏡下觀察到的線粒體（圖2-2）。