結(jié)核分枝桿菌核酸檢查包含多種技術(shù)，如結(jié)核分枝桿菌環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增檢測、結(jié)核分枝桿菌交叉引物等溫擴(kuò)增檢測、結(jié)核分枝桿菌RNA實時熒光等溫擴(kuò)增檢測、多色巢式實時熒光定量擴(kuò)增檢測、熒光探針實時熒光定量擴(kuò)增檢測等，應(yīng)嚴(yán)格按照每種檢測技術(shù)的產(chǎn)品說明進(jìn)行。結(jié)核分枝桿菌核酸檢查選取一份性狀好的痰標(biāo)本進(jìn)行。

結(jié)核分枝桿菌核酸檢查應(yīng)按照產(chǎn)品的具體操作步驟及整合程度在適宜的實驗室分區(qū)及空間內(nèi)進(jìn)行，人員應(yīng)接受過相關(guān)培訓(xùn)，并嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明進(jìn)行。

應(yīng)按照采取的檢測方法不同設(shè)置適宜的房間和區(qū)域。必要時各個區(qū)域應(yīng)配備2～8℃及-20℃冰箱儲存檢測試劑、核酸等。

不能使用過期試劑，按照每批次工作量對試劑進(jìn)行分裝或按照廠家推薦進(jìn)行試劑的配制和分裝，避免試劑反復(fù)凍融。

根據(jù)具體試劑操作說明決定是否需要提前取出試劑進(jìn)行室溫平衡，取試劑時將試劑瞬時離心確保液體不丟失，各成分配制后須充分混勻，避免取出試劑內(nèi)成分濃度不均一。

核酸提取是決定擴(kuò)增檢測成敗的關(guān)鍵性步驟，取標(biāo)本時選取樣品中性狀好（膿性、干酪痰）的部分，至少取1ml痰標(biāo)本。

遇到可能存在擴(kuò)增抑制劑的標(biāo)本（如血痰），須用緩沖液（0.9%生理鹽水）清洗一次樣本。

確保細(xì)菌裂解的時間和溫度一定要足夠，溫度按照推薦溫度進(jìn)行（一般裂解溫度為95～100℃）。

提取的核酸標(biāo)本如未能立即進(jìn)行擴(kuò)增，應(yīng)放-20℃冰箱保存。

擴(kuò)增設(shè)備的溫度要定期校準(zhǔn)，確保擴(kuò)增溫度的準(zhǔn)確性。擴(kuò)增設(shè)備的擴(kuò)增孔可定期清潔，可使用棉簽蘸取10%含氯試劑擦拭，含氯試劑擦拭后應(yīng)及時用蒸餾水和酒精擦拭避免腐蝕擴(kuò)增設(shè)備。

每批次必須加入陽性、陰性質(zhì)控樣品。陰性質(zhì)控即無樣本對照，用于監(jiān)測污染。陽性質(zhì)控用于檢測儀器、試劑、核酸提取及擴(kuò)增過程中產(chǎn)生的誤差。

需要進(jìn)行雜交等擴(kuò)增后產(chǎn)物分析的一定要在獨立房間進(jìn)行，避免發(fā)生擴(kuò)增子交叉污染。

結(jié)果判讀嚴(yán)格按照檢測方法的推薦判讀方法進(jìn)行判讀，判讀結(jié)果應(yīng)首先判讀陰性對照和陽性對照結(jié)果，對照結(jié)果符合質(zhì)控要求時本次實驗結(jié)果才有效。同時結(jié)果報告應(yīng)由審核人進(jìn)行進(jìn)一步審核。

每次開展分子檢測后應(yīng)進(jìn)行后續(xù)的去污染操作，包括但不僅限下面幾種：用10%含氯消毒劑擦拭實驗臺面、儀器等，在擦拭后用水再次擦拭；試驗后使用紫外線照射實驗操作臺表面（照射距離60～90cm之內(nèi)，推薦照射過夜）。

每月定期匯總分析反映結(jié)核分枝桿菌分子生物學(xué)檢測工作的質(zhì)量指標(biāo)，連續(xù)監(jiān)測各指標(biāo)，指標(biāo)值出現(xiàn)明顯變化應(yīng)立即查詢原因，并盡快解決。

結(jié)核分枝桿菌分子生物學(xué)檢測質(zhì)量指標(biāo)包括結(jié)核分枝桿菌核酸檢測陽性比例、檢測發(fā)生批次污染比例（針對分批量操作的檢測）、檢測發(fā)生錯誤、無結(jié)果、無效比例、結(jié)核分枝桿菌核酸檢測實驗室周轉(zhuǎn)時間。

結(jié)核分枝桿菌核酸檢測陽性比例=結(jié)核分枝桿菌核酸陽性標(biāo)本數(shù)量/開展結(jié)核分枝桿菌核酸檢查的標(biāo)本數(shù)量

結(jié)核分枝桿菌核酸檢測發(fā)生批次污染的比例=結(jié)核分枝桿菌核酸檢測發(fā)生污染的批次/結(jié)核分枝桿菌核酸檢測的批次

檢測發(fā)生錯誤（無結(jié)果或無效）的比例=檢測發(fā)生錯誤（無結(jié)果或無效）的標(biāo)本數(shù)量/開展多色巢式實時熒光定量PCR檢測的標(biāo)本數(shù)量

結(jié)核分枝桿菌核酸檢測實驗室周轉(zhuǎn)時間=實驗室自收到痰標(biāo)本至報告結(jié)核分枝桿菌核酸檢測結(jié)果的時間間隔