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七、N末端氨基酸序列分析

蛋白質序列分析基本原理為Edman化學降解法,即N末端氨基酸殘基依次與衍生化試劑(異硫氰酸苯酯)作用,從蛋白質/多肽N末端按順序切割下來,形成穩定的氨基酸后進行分析鑒定。適于各種方法制備蛋白樣品的N端測序,包括電轉移印跡法、PVDF膜上樣品或HPLC等溶液樣品。靈敏度可達fmol級樣品,在確證新的蛋白、鑒定重組蛋白一級結構的正確性、確定多肽合成產物的結構等方面都具有重要的作用。所有用于序列分析的多肽/蛋白必須是高純度的,去鹽和去除其他干擾測序的成分,不含有與Edman降解相作用的物質如三羥甲基氨基甲烷、甘氨酸、胍、甘油、蔗糖、乙醇氨、十二烷基磺酸鈉、曲通、吐溫(Tween)、硫酸銨以及各種游離氨基酸等。作為重組蛋白和多肽的重要鑒定指標,要求至少每年測定一次。
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