從復雜的生物體基因組中采用不同方法分離并獲得帶有目的基因DNA片段。獲得目的基因主要通過以下方法：①鳥槍克隆法：包括提取細胞總DNA，經過酶切、克隆至特定載體，再轉化至特定宿主細胞，構建成具有一定大小的目的基因。②人工合成目的基因：包括酶促方法、化學合成方法和聚合酶鏈式反應（PCR）。其中酶促方法經提取編碼基因的信使RNA（mRNA），在逆轉錄酶的作用下，合成互補DNA鏈，在DNA聚合酶Ⅰ的作用下，加工成雙鏈DNA分子；化學合成法前提必須是已知基因的核苷酸序列，化學合成的DNA片段一般較短，需要用DNA連接酶進行連接，從而獲得較長的DNA片段；聚合酶鏈式反應必須是已知基因的核苷酸序列，根據序列設計引物，進行PCR擴增獲得目的基因，也可以通過反轉錄PCR等方法，直接從富含目的基因的實驗材料中提取RNA，在逆轉錄酶的作用下獲得cDNA，以此為模板進行PCR擴增獲得目的基因。