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第16章 動(dòng)物細(xì)胞

〈不想看的請(qǐng)?zhí)^(guò)此章節(jié)>

只見(jiàn)這位生物學(xué)家拿出一本書,仔細(xì)的翻閱

一、《細(xì)胞及血液樣本采集操作指南》(gDNA)

培養(yǎng)細(xì)胞

1.培養(yǎng)細(xì)胞用細(xì)胞瓶,須加滿培養(yǎng)基后,常溫運(yùn)輸。

血液

1.已加入抗凝劑(選擇用 EDTA-、檸檬酸-、ACD 等抗凝,不要用肝素抗凝)的新鮮全血,常溫運(yùn)輸。注意事項(xiàng) 1.我們不接收裂解的細(xì)胞樣本以及全血樣本。

2.所有樣本均應(yīng)標(biāo)明準(zhǔn)確的樣本編號(hào),同時(shí)配有一張樣本登記表,寫明樣本名稱、種類、編號(hào)、取樣日期、樣本處理情況等。

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二、《組織樣本采集操作指南》(gDNA)

(1)動(dòng)物組織

1.首先準(zhǔn)備好用于包裝樣本的鋁箔或冷凍保存管,并且用油性記號(hào)筆在鋁箔或凍存管外表多處寫明樣本編號(hào)。

2.準(zhǔn)確切除所需組織后,立即剔除結(jié)締組織和脂肪組織等非研究所需的組織類型。 3.在生理鹽水中迅速漂洗樣本,以去除血漬和污物。

4.用準(zhǔn)備好的鋁箔或冷凍保存管裝載包裹組織,迅速投入液氮冷卻備用。

5.填寫樣本登記單,寫明樣本名稱、組織類型、編號(hào)、取樣日期、樣本處理過(guò)程等情況。

(2)臨床標(biāo)本

1.樣品操作最好在冰上進(jìn)行。

4.填寫樣本登記單,寫明樣本名稱、組織類型、編號(hào)、取樣日期、樣本處理過(guò)程等情況。

(4)注意事項(xiàng)

1.如用液氮罐存放樣品包裹組織的鋁箔或冷凍保存管轉(zhuǎn)入樣本袋時(shí),請(qǐng)按以下步驟進(jìn)行:把樣本袋(紗布袋等)放入液氮中冷凍一下,而后將液氮冷卻的組織放入樣本袋(每個(gè)樣本袋只保存同樣的組織,樣本較多時(shí)應(yīng)分裝至多個(gè)小袋,不要在一只樣本袋中放過(guò)多的樣本以防無(wú)法放入液氮罐或無(wú)法從液氮罐中取出)袋口,留一根編號(hào)繩,繩上粘 2 張標(biāo)簽紙(標(biāo)簽上注明:動(dòng)物組織名稱、樣本名稱、編號(hào)、日期,粘 2 張標(biāo)簽紙是為了防止標(biāo)簽脫落造成樣本混亂),迅速轉(zhuǎn)入液氮罐。

2.如用廣口容器液氮暫存建議用進(jìn)口高質(zhì)量?jī)龃婀埽托怨P標(biāo)記后,樣品迅速放入管中,擰緊后迅速放入液氮中。然后再轉(zhuǎn)移到超低溫冰箱中保存。

3.直接干冰中保存并郵寄的建議全部用進(jìn)口凍存管,油性筆標(biāo)記后,樣品迅速放入經(jīng)干冰預(yù)冷的凍存管中,放入樣品袋,埋入干冰中,密封包裝后,運(yùn)輸。對(duì)于液氮保存樣品,務(wù)必注意:不要用 Eppendorf 管,因?yàn)?Eppendorf 管從液氮中取出時(shí)極易發(fā)生管子爆裂而造成樣本損失。不要用國(guó)產(chǎn)凍存管,因?yàn)閲?guó)產(chǎn)凍存管從液氮中取出時(shí)也常發(fā)生爆裂,可能造成樣品損失或傷人。

三、《基因組 DNA 樣本采集操作指南》(gDNA)

基因組 DNA 1.如果提供基因組 DNA 樣本,要求電泳條帶清晰,沒(méi)有拖尾,濃度大于等于 50ng/μl, OD260/280 在 1.8 左右。

四、樣本量

1. 2. 3. 4. 5.對(duì)于正常未經(jīng)特殊處理的培養(yǎng)細(xì)胞,細(xì)胞量要求至少 1*107。正常人抗凝血液樣本,體積 0.5ml 以上。新鮮正常組織,25mg 以上。基因組 DNA 總量 1 微克以上。對(duì)于癌癥或經(jīng)過(guò)特殊處理的樣本,要求量以實(shí)際抽提量為準(zhǔn)。

強(qiáng)烈建議為確保實(shí)驗(yàn)的順利,我們強(qiáng)烈建議您在取樣時(shí),應(yīng)同時(shí)備份 2~3 份,如備份 3 份,則送給我們兩份,如果備份 2 份,則送樣一份,您自己留一份,以防備部分樣品降解,重新取材或送樣將耽誤您的時(shí)間。即使樣品全部合格,備份的樣品您還可以用來(lái)進(jìn)行其他方面的實(shí)驗(yàn)(如定量驗(yàn)證,蛋白方面,生化方面的實(shí)驗(yàn)等)。備份又分為兩種,一種為嚴(yán)格備份,即:樣品取下后一分為二,這樣的兩份樣品基本上具備同性質(zhì)。另一種為非嚴(yán)格備份,即生物學(xué)重復(fù)的樣品,這樣的備份樣品同質(zhì)性要較前者差。

注意事項(xiàng)

1.如用液氮罐存放樣品包裹組織的鋁箔或冷凍保存管轉(zhuǎn)入樣本袋時(shí),請(qǐng)按以下步驟進(jìn)行:把樣本袋(紗布袋等)放入液氮中冷凍一下,而后將液氮冷卻的組織放入樣本袋(每個(gè)樣本袋只保存同樣的組織,樣本較多時(shí)應(yīng)分裝至多個(gè)小袋,不要在一只樣本袋中放過(guò)多的樣本以防無(wú)法放入液氮罐或無(wú)法從液氮罐中取出)袋口,留一根編號(hào)繩,繩上粘 2 張標(biāo)簽紙(標(biāo)簽上注明:客戶名、樣本名稱、編號(hào)、日期,粘 2 張標(biāo)簽紙是為了防止標(biāo)簽脫落造成樣本混亂),迅速轉(zhuǎn)入液氮罐。

2.如用廣口容器液氮暫存建議用進(jìn)口高質(zhì)量?jī)龃婀埽托怨P標(biāo)記后,樣品迅速放入管中,擰緊后迅速放入液氮中。然后再轉(zhuǎn)移到超低溫冰箱中保存。

3.直接干冰中保存并郵寄的建議全部用進(jìn)口凍存管,油性筆標(biāo)記后,樣品迅速放入經(jīng)干冰預(yù)冷的凍存管中,放入樣品袋,埋入干冰中,密封包裝后,運(yùn)輸。對(duì)于液氮保存樣品,務(wù)必注意:不要用 Eppendorf 管,因?yàn)?Eppendorf 管從液氮中取出時(shí)極易發(fā)生管子爆裂而造成樣本損失。不要用國(guó)產(chǎn)凍存管,因?yàn)閲?guó)產(chǎn)凍存管從液氮中取出時(shí)也常發(fā)生爆裂,可能造成樣品損失或傷人。

[由于這次嘗試是大膽的嘗試,很有可能會(huì)造成,不可挽回的未知細(xì)菌大規(guī)模感染,造成不可挽回的后果,因此采集的動(dòng)物組織必須嚴(yán)格的進(jìn)行防疫檢查,在經(jīng)過(guò)上百項(xiàng)的安全檢查過(guò)后,才能用于動(dòng)物組織細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)]

(生物學(xué)家在仔細(xì)的閱讀完這本手冊(cè)以后,開(kāi)始著手準(zhǔn)備器材)

生理鹽水、培養(yǎng)皿,經(jīng)過(guò)仔細(xì)消毒的醫(yī)用刀具,酒精........

一切很多就緒后,還需要一位麻醉師,[麻醉師是手術(shù)過(guò)程中的一位比較重要的人員,如果注射的麻醉藥量過(guò)多,可能導(dǎo)致心臟以及身體的其他重要器官無(wú)法收到大腦的指令,從而造成身體的器官出現(xiàn)“罷工“行為(指身體的重要器官失去大腦控制)]{所以食用安眠藥過(guò)多會(huì)致死就是這個(gè)道理,可以簡(jiǎn)單理解為身體睡的太深沉,都忘記要讓身體的其他重要器官工作了}

通過(guò),現(xiàn)有的情形,以及牛羊這些生物的目前的難找性,科學(xué)家從河邊抓到了兩只鴨子,決定從鴨子身上采取樣本,經(jīng)過(guò)層層的細(xì)菌安全檢查以后,才能用于此次實(shí)驗(yàn)。

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