第一章　前言

9.政府、企業(yè)及獨立實驗室使用經(jīng)合組織等機(jī)構(gòu)制定的測試指南進(jìn)行化學(xué)品的危害性或安全性評價。使用經(jīng)過驗證的檢驗方法制定的測試指南可以獲得人類和動物健康及環(huán)境危害性評估的可靠數(shù)據(jù)。人們已經(jīng)認(rèn)識到需要為國際社會制定一個指南，內(nèi)容綱要包括一般原則、重要的考慮因素、說明性的例子、可能面臨的挑戰(zhàn)以及在檢驗方法驗證方面取得的試驗結(jié)果。這份指南是在成員國以及經(jīng)合組織有關(guān)部門建議的基礎(chǔ)上由經(jīng)合組織成員國的代表們起草的。

10.本指南的目的：為新建立或更新的檢驗方法與當(dāng)前使用的方法一致性的驗證問題提供指導(dǎo)。此指南提供了檢驗方法驗證這個快速變化和發(fā)展領(lǐng)域的現(xiàn)況。更多關(guān)于經(jīng)合組織測試指南發(fā)展的各個方面的指導(dǎo)原則，詳見經(jīng)合組織化學(xué)品檢測測試指南的發(fā)展指導(dǎo)文件（4）。雖然此指南中所描述的驗證原則是以生物學(xué)為基礎(chǔ)的檢驗方法，但它們可能同樣適用于其他的試驗方法。

11.檢驗方法的驗證是建立在科學(xué)可靠原則（5）（6）基礎(chǔ)上的程序，通過這些原則進(jìn)一步確認(rèn)具有特定目的的試驗、方法或程序的可靠性和相關(guān)性。可靠性是指：在使用相同的標(biāo)準(zhǔn)化方案時，一種試驗在不同時間、在實驗室內(nèi)部及實驗室間結(jié)果再現(xiàn)性的程度。一種檢驗方法的相關(guān)性是指：試驗與目標(biāo)物種產(chǎn)生的效應(yīng)之間的關(guān)系，以及某個具有確定局限性的檢驗方法對有特定目的的檢驗是否有用，是否有意義。簡而言之，就是指一種試驗方法衡量或預(yù)測所關(guān)注（生物學(xué)）效應(yīng)的準(zhǔn)確程度。相關(guān)性包括了檢驗方法的監(jiān)督管理需要、實用性及局限性等方面的內(nèi)容。新的及更新的檢驗方法必須具備可靠性及相關(guān)性，即驗證。

12.驗證的這一套原則，也稱為“索爾納原則”，是經(jīng)合組織1996年在瑞典索爾納舉行的研討會上形成的。在這次會議上，與會者一致認(rèn)為這些原則適用于新的或更新的危害性評估檢驗方法的驗證，無論是體內(nèi)或體外，或是對人類健康或環(huán)境影響的檢驗（1）。這些原則是：

（1）試驗方法應(yīng)該提供基本原理，包括一項科學(xué)需求和官方目的的明確聲明。

（2）要確定體內(nèi)生物作用的試驗方法的檢測終點與待檢測毒性的關(guān)系。需要描述方法的局限性，例如代謝能力。

（3）需提供正式詳細(xì)的方案并在公共領(lǐng)域發(fā)布。方案應(yīng)該足夠詳細(xì)，以保證使用者能夠掌握，并且應(yīng)該包含數(shù)據(jù)分析方法及判斷標(biāo)準(zhǔn)。試驗方法和結(jié)果最好應(yīng)在一個獨立的同行評議的刊物上發(fā)表。另外，試驗的結(jié)果應(yīng)經(jīng)過獨立的科學(xué)評審。

（4）應(yīng)該描述試驗方法在實驗室內(nèi)部及實驗室之間測試結(jié)果的變異性、重復(fù)性及再現(xiàn)性。應(yīng)該有具體的數(shù)據(jù)描述實驗室內(nèi)部及實驗室間的變異水平以及隨時間所產(chǎn)生的變化。

（5）必須說明試驗方法的操作程序，最好對一系列參考化學(xué)品進(jìn)行編碼以排除偏倚。

（6）應(yīng)該對試驗方法的性能與現(xiàn)有的相關(guān)毒性資料以及有關(guān)目標(biāo)物種的信息進(jìn)行了評價。

（7）所有支持試驗方法驗證評估的數(shù)據(jù)，包括在驗證研究中得到的整套數(shù)據(jù)都必須進(jìn)行評審。

（8）通常，這些已經(jīng)獲得的數(shù)據(jù)應(yīng)與良好實驗室操作規(guī)范（GLP）的經(jīng)合組織原則一致。

13.考慮到待開發(fā)的試驗方法無論在數(shù)量上還是類型上一直在持續(xù)增加以滿足不同用途的需要，因此，驗證過程應(yīng)該靈活，并具有較強(qiáng)的適應(yīng)性。這些驗證原則落實的程度將隨著試驗方法的目的、性質(zhì)、以及推薦使用的變化而異。在采用驗證原則時應(yīng)該考慮體內(nèi)試驗與體外試驗或間接體內(nèi)試驗之間存在的差異（7）。一般而言，試驗方法的測試結(jié)果與目的毒理學(xué)作用的關(guān)系越密切，就越容易建立試驗的相關(guān)性。檢測到的作用與預(yù)期作用的一致性越好，試驗方法精確描述或模仿對所關(guān)注測試物種的作用就越可信（8）。

14.隨著時間的推移，毒理學(xué)和生態(tài)毒理學(xué)的檢驗方法的發(fā)展已取得重大的進(jìn)展。許多毒性和生態(tài)毒性試驗方法已經(jīng)常規(guī)使用多年，獲得并且將繼續(xù)獲得關(guān)于化學(xué)品毒性的相關(guān)信息。管理當(dāng)局及管理機(jī)構(gòu)接受這些以危害和風(fēng)險評估為目的的試驗方法，不需用當(dāng)今的驗證標(biāo)準(zhǔn)對這些試驗方法進(jìn)行驗證。經(jīng)合組織測試指南大多以這些試驗方法為基礎(chǔ)。

15.許多關(guān)于人類健康潛在危害的替代試驗已通過聯(lián)合驗證，這些驗證研究是先于國家或國際組織機(jī)構(gòu)［即：機(jī)構(gòu)間替代方法驗證協(xié)調(diào)委員會（ICCVAM）和歐洲替代方法驗證中心（ECVAM）］制定的系統(tǒng)協(xié)調(diào)的驗證原則而進(jìn)行的。這些試驗方法，基于它們的使用歷史以及業(yè)已證明的實用性，而被國際及國家的檢驗組織和管理當(dāng)局在危害評估和風(fēng)險評估中所接受。這些試驗方法為管理機(jī)構(gòu)決策提供了充分的科學(xué)依據(jù)。

16.許多評價人類健康影響試驗方法如今已經(jīng)成為新近發(fā)展起來的替代試驗方法評估的標(biāo)準(zhǔn)。為了決定試驗方法的可靠性，生態(tài)毒理學(xué)團(tuán)體已開展驗證研究（通常指“環(huán)試驗”）數(shù)十年。他們的焦點已放在試驗方案的標(biāo)準(zhǔn)化以及證明它們的普適性和再現(xiàn)性。

17.新的試驗方法經(jīng)過驗證以確保它們的使用合乎科學(xué)并且滿足管理的需要。這些新的試驗方法包含了對人類及生態(tài)健康的關(guān)注、動物福利的考慮、數(shù)據(jù)質(zhì)量保證，并整合了新的及改進(jìn)的技術(shù)而得到逐步完善。使用實驗動物的毒理學(xué)研究和其他物質(zhì)影響的日益增加的關(guān)注，已導(dǎo)致對堅持使用動物的3R原則（9）在開發(fā)替代試驗方法上的廣泛支持。官方當(dāng)局已批準(zhǔn)3R原則。因此替代方法的發(fā)展是為了用非動物試驗系統(tǒng)代替動物的使用，減少檢測中動物的使用數(shù)量或是優(yōu)化實驗程序以減少試驗中動物的疼痛及緊張程度（10）。

18.隨著新試驗方法的產(chǎn)生，試驗方法的進(jìn)展及國際上對新方法和更新方法的需要，促進(jìn)達(dá)成國際共識的重要意識已經(jīng)變得越來越明顯，這種意識應(yīng)該包括大體原則、討論及新方法驗證的相關(guān)示例。

19.這份指南提供指導(dǎo)驗證研究實施方式和如何證明試驗方法業(yè)已經(jīng)過適當(dāng)?shù)尿炞C。驗證研究可以是一個小規(guī)模的活動也可以是一個大規(guī)模多個國家參與的項目。對驗證程序本身的確認(rèn)性研究，可在經(jīng)合組織的主持下，由各個成員國、檢驗方法主辦單位及一些不同的組織承擔(dān)，如一些專門從事替代檢驗方法驗證的運(yùn)行試驗或是已經(jīng)擁有法律確認(rèn)的驗證機(jī)構(gòu)，包括歐盟的歐洲替代方法驗證中心（ECVAM），美國的機(jī)構(gòu)間替代方法驗證協(xié)調(diào)委員會（ICCVAM）和德國的德國動物實驗替代方法認(rèn)證中心（ZEBET）。

20.當(dāng)一種試驗方法經(jīng)過驗證并確定了它的性能（相關(guān)性和可靠性）可以接受使用后就可以推薦將其作為經(jīng)合組織的測試指南。試驗方法的主辦單位若向經(jīng)合組織測試指南提議采納該試驗方法，就應(yīng)該提供該試驗方法已經(jīng)得到充足驗證的證據(jù)，這些驗證是依據(jù)國際上公認(rèn)的原則和標(biāo)準(zhǔn)，例如索爾納研討會（1）上所描述的原則。這些標(biāo)準(zhǔn)適用于新的及經(jīng)過修訂的試驗方法。官方認(rèn)可取決于驗證的結(jié)果，并結(jié)合考慮上述原則。在考慮試驗方法的官方認(rèn)可時，以下標(biāo)準(zhǔn)也很重要（1）。

（1）方法的申請需要提供預(yù)測有關(guān)試驗終點的數(shù)據(jù)，驗證工作需要證明在：①新方法與現(xiàn)有方法；或②新方法與對目標(biāo)物種的作用這兩方面的任一方面有聯(lián)系。

（2）新方法以風(fēng)險評估為目的得到的數(shù)據(jù)，至少要同現(xiàn)有方法得到的數(shù)據(jù)同樣有實用性，甚至要優(yōu)于現(xiàn)有方法。這樣可以在同等水平或是更高的水平上保護(hù)人類健康和環(huán)境。

（3）具有充分的受監(jiān)管項目或監(jiān)管機(jī)構(gòu)管理的化學(xué)品和代表化學(xué)品產(chǎn)品類型的檢測數(shù)據(jù)

（4）試驗方法應(yīng)該是穩(wěn)定的、可轉(zhuǎn)讓的，并應(yīng)考慮標(biāo)準(zhǔn)化。若是需要高度專業(yè)性的設(shè)備、材料及專業(yè)知識技能，應(yīng)該努力尋求促進(jìn)普適性。這是在驗證研究早期階段應(yīng)該考慮的重要標(biāo)準(zhǔn)。【秘書處注釋：根據(jù)現(xiàn)行的經(jīng)合組織政策，試驗不應(yīng)要求設(shè)備或材料來自唯一的來源，這可能會阻礙專利方法的認(rèn)可。在索爾納研討會上沒有討論專利試驗的議題，但是在經(jīng)合組織更高級別政策的議題中有所涉及】。

（5）試驗具有成本效益，并可被應(yīng)用。

（6）相對于現(xiàn)有可利用的所有方法，應(yīng)該為新方法提供（科學(xué)、倫理及經(jīng)濟(jì)方面的）正當(dāng)性。在這方面應(yīng)適當(dāng)考慮動物福利，包括考慮3R原則。

21.正如文件中所描述，雖然試驗的驗證過程分為非連續(xù)的幾個階段，但實際上，檢驗方法的驗證過程在各個驗證要素之間是統(tǒng)一連慣的。這個過程的每個階段都是利用并建立在其他階段工作的基礎(chǔ)之上的。不管驗證的方法是前瞻性、回顧性、模塊式（11）或是其他方式，驗證過程的目標(biāo)是確保每個經(jīng)合組織驗證的原則都被充分考慮。因此，正如第七章所述，提供充足的驗證文件是十分重要的。

22.文件中的特定詞組及術(shù)語定義在附錄Ⅰ有所解釋，還簡單舉例說明了不同驗證機(jī)構(gòu)使用的驗證術(shù)語。例如：體內(nèi)及體外健康及生態(tài)毒理學(xué)研究的各種驗證研究，詳見附錄Ⅱ。

23.此文件記錄了在驗證前和驗證過程中應(yīng)考慮的重要步驟及內(nèi)容。它們包括：

（1）檢驗方法的定義及相關(guān)要點（例如：目的、判斷標(biāo)準(zhǔn)、終點、局限性）；

（2）為得到最優(yōu)的檢驗方法所作預(yù)驗證的研究設(shè)計及實施方式；

（3）在預(yù)驗證結(jié)果的基礎(chǔ)上，以獲取更多檢驗方法的相關(guān)性和可靠性的數(shù)據(jù)為目標(biāo)，設(shè)計及實行正式的實驗室間的驗證工作；

（4）所有的數(shù)據(jù)評價及隨后的驗證研究的結(jié)論，應(yīng)遵循管理機(jī)構(gòu)關(guān)于新方法或修訂方法試驗操作相關(guān)信息呈遞的要求。

還要討論獨立評價的需要及程度，或?qū)Υ炞C的檢驗方法進(jìn)行同行評議。該指南提供了檢驗方法當(dāng)前驗證狀態(tài)的綱要。