3.4 培養(yǎng)基配制

每種培養(yǎng)基配方中有近20種化學(xué)藥品，每種藥品用量不大，常常需要使用分析天平。為簡便起見，先按不同類別的藥品混合或單獨(dú)配成母液，貯存于冰箱備用。

3.4.1 母液（stock solution）配制

①大量元素：通常將所需元素按比例配成10倍（10×）濃度的溶液。

②微量元素：通常將所需元素按比例配成100倍（100×）濃度的溶液。

③鐵鹽：介紹一種螯合鐵的配法。由5.75g FeSO4·7H2O和7.45g Na2-EDTA溶于1000mL水中，每升培養(yǎng)基中加鐵鹽5mL。

④有機(jī)附加物（包括維生素和生長調(diào)節(jié)物質(zhì)）：分別配成mg/mL的母液，貯存于冰箱。注意：稱量藥品時(shí)，要注意藥品所含結(jié)晶水與配方上所列的結(jié)晶水是否相同，如不相同需換算。配制母液時(shí)應(yīng)依配方上先后次序?qū)⑺幤分鹨蝗芙猓环N藥品完全溶解后再加入另一種藥品，或各種藥品單獨(dú)溶解，然后依次相混，否則會產(chǎn)生不可逆沉淀，造成浪費(fèi)。配制微量元素的母液時(shí)，因用量甚微無法稱量，可放大千百倍，再經(jīng)多級稀釋的辦法獲得所需要的量。

3.4.2 培養(yǎng)基配制

培養(yǎng)基配方中化學(xué)藥品和預(yù)先配制的母液種類繁多，數(shù)量各異，配制過程中極易遺漏或重復(fù)。為防止這種情況發(fā)生，宜事先根據(jù)培養(yǎng)基配方及需要配制的數(shù)量列出配料表并計(jì)算出每種溶液的需用量。以配制1.5 L B5培養(yǎng)基為例，每加完一種溶液劃一記號（√）：

大量元素和微量元素的母液都是高濃度的。為防止兩種高濃度母液混合在一起發(fā)生沉淀，建議加完大量元素后先加適量蒸餾水（約占所配培養(yǎng)基總體積的2/3～3/4左右），然后再加微量元素。

有時(shí)培養(yǎng)基經(jīng)過高溫滅菌，冷卻后不凝固，可能的原因?yàn)椋赫{(diào)pH時(shí)攪拌不夠，pH太低；高溫處理時(shí)間過長。

3.4.3 培養(yǎng)基滅菌

采用濕熱滅菌法。瓶裝溶液容積在1000mL以下者，在1.1kg/cm2,120℃下維持20min可達(dá)滅菌效果。超過20min，高溫會使某些有機(jī)物（糖和維生素等）的分解增加，對培養(yǎng)不利。IAA、GA3等應(yīng)使用微孔濾膜過濾除菌，并在培養(yǎng)基溫度降低，但尚未凝固前加入其中，搖勻。

3.4.4 培養(yǎng)基存放

培養(yǎng)基應(yīng)存放于背陰處。若含IAA、Kt則需放在暗處。剛配制的培養(yǎng)基凝固后表面會出現(xiàn)積水，最好過2～3天，當(dāng)表面的積水被吸收后再接種。若急需接種則需用無菌吸管吸去表面流動的積水以免污染源隨水流擴(kuò)散。滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)該在15天內(nèi)用完，最多不得超過30天。

思考與討論題

1．配制培養(yǎng)基的螯合鐵母液時(shí)，稱取5.75g FeSO4·7H2O和7.45g Na2-EDTA溶于1000mL水中。如果藥柜中沒有FeSO4·7H2O，只有FeSO4·12H2O，應(yīng)該稱取多少克FeSO4·12H2O？

2．在MS培養(yǎng)基中，CuSO4·5H2O的含量為0.025mg/L，現(xiàn)需要配制MS培養(yǎng)基微量元素的（100×）母液500mL，如何取用CuSO4·5H2O？

參考文獻(xiàn)

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