實訓4 中藥的組織制片與繪圖

【實訓目標】熟練掌握中藥的徒手制片法和表面制片法；學會中藥的組織簡圖及詳圖繪制技術。

【實訓準備】

1．實訓器具 徒手切片器、生物顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、解剖針、擦鏡紙、吸水紙、玻璃棒、培養皿、毛筆、單面刀片、火柴、酒精燈、紗布、離心管、恒溫水浴鍋等。

2．實訓材料 小通草藥材、薄荷莖、牛膝根、松花粉、海金沙、蒲黃、大青葉、五味子等。

3．實訓試劑 稀甘油、甘油醋酸試液、水合氯醛試液、間苯三酚試液、濃鹽酸、乙醇、蒸餾水、醋酐、硫酸、50%甘油、1%苯酚、品紅甘油膠等。

品紅甘油膠制法：取明膠1g，加水6ml，浸泡至溶化，再加甘油7ml，加熱并輕輕攪拌至完全混勻，用紗布過濾至培養皿中，加堿性品紅溶液（堿性品紅0.1g，加無水乙醇600ml及樟油80ml，溶解）適量，混勻，凝固后即得。

【實訓內容及步驟】

（一）徒手制片法

采用徒手制片法制作藥材的橫切片或縱切片，操作簡便、迅速，制成的切片能保持其細胞內含物的固有形態，便于進行各種顯微化學反應。

1．藥材的預處理

（1）切塊或段：先將需觀察的部位，切成適當大小的塊或段，一般以寬1cm、長3cm為宜。

（2）軟硬度調整：軟硬適中的藥材可直接進行切片；質地堅硬的藥材可放在吸濕器（即玻璃干燥器底部盛蒸餾水并滴數滴苯酚防霉，上部瓷板上放置藥材吸濕）中悶潤，或在水中浸泡或略煮，使其軟化后再切片；過于柔軟的材料，可將其浸入70%～95%乙醇溶液中，約20分鐘變硬后再切片。

（3）支持物選擇：對于細小的種子或柔軟而薄的葉類藥材，不便直接手持切片，可選用適宜的支持物進行切片。如細小的種子類藥材可放在軟木塞或橡皮片中（一側切一窄縫，將種子嵌入其中）進行切片；葉類藥材可夾持在質地松軟的小通草中進行切片。

2．切片 選取已軟化的藥材，用左手拇指和食指夾持材料，中指托住藥材底部，使藥材略高出食、拇二指；用右手持刀片，自左向右移動手腕，動作要輕而快，力求切片薄而完整，操作時材料的斷面與刀口需常用水或50%乙醇溶液濕潤。

3．裝片 將切好的薄片，用毛筆小心地移入盛有清水或50%乙醇溶液的培養皿中浸泡，取載玻片滴加稀甘油或其他試液，用鑷子或毛筆將切片移于其上，再滴加稀甘油，蓋片鏡檢；也可將薄片滴加水合氯醛液加熱透化，再滴加稀甘油，蓋片鏡檢。加蓋玻片時，應盡量避免產生氣泡。

（二）表面制片法

將供試品（大青葉、五味子）濕潤軟化后，剪取欲觀察部位約4mm2，一正一反置載玻片上，或撕取葉片、萼片、花冠、果皮、種皮制成表面片，加適宜試液，或加熱透化后以稀甘油裝片觀察。

（三）花粉粒與孢子制片

取松花粉、海金沙及蒲黃（干燥供試品可浸于冰醋酸中軟化），用玻璃棒研碎，經紗布過濾至離心管中，離心，取沉淀加新配制的醋酐與硫酸（9∶1）混合液1～3ml，置水浴上加熱2～3分鐘，離心，取沉淀，用水洗滌2次，取沉淀少量置載玻片上，滴加水合氯醛試液1～2滴，蓋上蓋玻片，觀察；或加50%甘油與1%苯酚各1～2滴，用品紅甘油膠封片觀察。

（四）組織繪圖技術

繪圖方法包括徒手繪圖、網格繪圖、描繪器繪圖和投影繪圖等方法。重點練習徒手繪制組織簡圖及詳圖。要求比例正確，形態逼真，結構清楚，線條及細點粗細均勻，明暗一致。

1．徒手繪圖法 選擇典型的顯微標本片和結構，仔細觀察各部位的形狀、結構及比例關系，用色淡的鉛筆（2H或4H），按照顯微圖像的比例關系畫出輪廓草圖，經反復對照修改后，再用色深的鉛筆（HB或2B）繪出修改圖。

2．組織簡圖繪制法 組織簡圖即用代表符號畫成較簡明的組織構造圖，能清晰地表示出各組織和某些特征排列的位置、分布情況及比例關系，以了解該器官組織構造的全貌。組織簡圖各部位表示符號如圖1-2所示。

繪圖步驟：①將組織標本片置于顯微鏡下觀察，用鉛筆將圖像的各部位輪廓畫出。②按照規定的表示符號繪出各部位的重要特征（如厚壁組織、分泌組織、維管束等）；準確表示組織中各部位的范圍、界限及重要特征的所在位置。③將各部位依次向右方引出直線，標上圖注，圖下注明各部分名稱及放大倍數。

3．組織詳圖繪制法 將顯微鏡下觀察的組織、細胞及其內含物的真實形態、大小等特征，如實地繪制到畫面上的圖形，稱為組織詳圖。繪圖步驟同簡圖繪制法，應注意薄壁組織用單線條表示，厚壁組織用雙線條表示。

【實訓提示】

1．在藥材預處理時應避免影響欲觀察的顯微特征。如觀察菊糖、黏液等特征時，不可與水接觸，以免特征溶解消失；觀察揮發油、樹脂等特征時，則不可與高濃度乙醇或其他有機溶劑接觸。

2．用水合氯醛試液透化處理時，加熱溫度不宜過高，以防水合氯醛試液沸騰，將組織中帶入氣泡。

【實訓報告與考核】繪薄荷莖、牛膝根橫切面簡圖及詳圖；繪松花粉、海金沙、蒲黃整體形態圖；繪大青葉、五味子表面特征圖。